一種低溫溶磷中華根瘤菌及其菌劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種低溫溶磷中華根瘤菌及其菌劑，菌種名稱為ATHC?2，分類命名為中華根瘤菌屬Sinorhizobium sp.，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No.10651，保藏日期為：2015年3月20日，保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。本發(fā)明所述菌株ATHC?2能夠耐受低溫對(duì)其生長(zhǎng)的影響，且具有較強(qiáng)溶磷活性。通過(guò)施用耐低溫根瘤菌劑緩解低溫脅迫對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大豆結(jié)瘤固氮的影響，提高土壤肥力，減少化肥使用量，提高大豆等農(nóng)作物產(chǎn)量與品質(zhì)。CGMCC No. 1065120150320
【專利說(shuō)明】
一種低溫溶磷中華根瘤菌及其菌劑
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于種植業(yè)與肥料相關(guān)領(lǐng)域，涉及一種低溫溶磷中華根瘤菌及其菌劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)長(zhǎng)期以來(lái)采用高投入高產(chǎn)出的發(fā)展模式，導(dǎo)致農(nóng)業(yè)生產(chǎn)對(duì)化學(xué)肥料 嚴(yán)重依賴?；瘜W(xué)肥料的大量使用不僅增加農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，而且易于引起土壤板結(jié)，造成農(nóng)作 物減產(chǎn)。大量未被利用的氮、磷、鉀等養(yǎng)分隨降雨進(jìn)入到地下水與江河等生態(tài)環(huán)境中，導(dǎo)致 江河水體富營(yíng)養(yǎng)化，生態(tài)失衡與環(huán)境污染，對(duì)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展造成威脅。
[0003] 生物固氮具有提高作物產(chǎn)量，培肥土壤維持生態(tài)系統(tǒng)平衡的作用，豆科植物與根 瘤菌共生體固氮能力很強(qiáng)，是大豆氮素的重要來(lái)源之一。根瘤菌與豆科植物共生體系具有 很強(qiáng)的固氮能力。豆科植物與根瘤菌形成共生固氮體系，占生物固氮量的65%以上，它為豆 科植物提供生長(zhǎng)必須氮素營(yíng)養(yǎng)，增加了作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)。豆科植物接種高效固氮根 瘤菌能夠減少氮肥使用量，從而降低生產(chǎn)成本增加農(nóng)民收入，有助于減少大量使用化肥帶 來(lái)的環(huán)境污染風(fēng)險(xiǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于通過(guò)分離我國(guó)高煒度低溫區(qū)大豆根瘤菌，研究其低溫條件下結(jié) 瘤固氮能力，通過(guò)制備耐低溫根瘤菌劑緩解低溫脅迫對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大豆結(jié)瘤固氮的影響， 提高土壤肥力，減少化肥使用量，提高大豆等農(nóng)作物產(chǎn)量與品質(zhì)。
[0005] 本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：
[0006] -種低溫溶磷中華根瘤菌，菌種名稱為ATHC-2,分類命名為中華根瘤菌屬 Sinorhizobium sp.，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào) 為CGMCC No.10651，保藏日期為：2015年3月20日，保藏地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào) 院3號(hào)。
[0007] 含有上述低溫溶磷中華根瘤菌的生物菌劑，在含有菌株ATHC-2的發(fā)酵液中添加體 積百分比為1-5%羧甲基纖維素，制得有效活菌數(shù)量達(dá)到2-5億個(gè)/毫升的液體菌劑。
[0008] 含有上述低溫溶磷中華根瘤菌的生物菌劑粉末，將權(quán)利要求2所述的液體菌劑經(jīng) 低溫冷凍干燥制得粉末菌劑，其有效活菌數(shù)量達(dá)到1-2億個(gè)/克。
[0009] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：
[0010] 1.本發(fā)明所述根瘤菌ATHC-2革蘭氏陰性（G-)，能夠在Pikovskays's培養(yǎng)基和 NBRIP培養(yǎng)基生長(zhǎng)，具有較強(qiáng)溶磷活性。
[0011 ] 2.本發(fā)明所述根瘤菌ATHC-2能夠在4 °C，7 °C和15 °C條件下在YMA培養(yǎng)基生長(zhǎng)，能夠 耐受低溫對(duì)其生長(zhǎng)的影響。7 °C和15°C培養(yǎng)條件下，菌株ATHC-2在Ashby無(wú)氮固體培養(yǎng)基上 能夠正常生長(zhǎng)，表明菌株ATHC-2能夠在低溫下固氮酶保持活性，有利于防范低溫對(duì)農(nóng)業(yè)生 長(zhǎng)造成的危害。
[0012] 3.溫室盆栽試驗(yàn)和田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種權(quán)利要求書(shū)2所述菌劑能夠增加 供試大豆根系結(jié)瘤數(shù)量，提高大豆地下部與地上部生物量，顯著增加供試大豆產(chǎn)量。
[0013] 4.本發(fā)明所述菌株ATHC-2能夠耐受低溫對(duì)其生長(zhǎng)的影響，且具有較強(qiáng)溶磷活性。 溫室盆栽試驗(yàn)與田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與不施用氮肥組及施用50%氮肥組相比，添加本 發(fā)明所述菌劑能夠增加供試大豆根系結(jié)瘤數(shù)量，提高大豆地下部與地上部生物量，顯著增 加供試大豆產(chǎn)量。該菌劑的使用有助于緩解低溫對(duì)我國(guó)高煒度低溫區(qū)大豆等農(nóng)作物生產(chǎn)的 不利影響。通過(guò)制備耐低溫根瘤菌劑緩解低溫脅迫對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大豆結(jié)瘤固氮的影響，提 高土壤肥力，減少化肥使用量，提高大豆等農(nóng)作物產(chǎn)量與品質(zhì)。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1為施用本發(fā)明的菌劑對(duì)供試大豆品種（黑河68)不同器官生物量的影響，圖中 不同小寫字母表示各處理間差異顯著(p〈〇.05);
[0015] 圖2為施用本發(fā)明的菌劑對(duì)供試大豆品種(科豐6)不同器官生物量的影響，圖中不 同小寫字母表示各處理間差異顯著(p〈〇.05)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明方法。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明中所用的技術(shù) 手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的，而非限制本發(fā) 明的范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書(shū)所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背 離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改 動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0017] -種低溫溶磷中華根瘤菌，篩選及鑒定過(guò)程如下：
[0018] 本發(fā)明菌株ATHC-2分離自吉林省延吉市安圖縣大豆根瘤。將實(shí)地采集大豆新鮮根 瘤，放置與無(wú)菌離心管中迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，通過(guò)無(wú)菌水大量沖洗去除根瘤表面附著泥土，加 95 %乙醇浸泡2-3min后，加入70 %乙醇浸泡5min，棄去乙醇加入3 %次氯酸鈉浸泡6min，棄 去次氯酸鈉溶液，大量無(wú)菌水沖洗4-5次。將表面消毒后根瘤在準(zhǔn)備好的YMA培養(yǎng)基上擠碎 涂布，28 °C培養(yǎng)3-7d，設(shè)置無(wú)菌水沖洗液對(duì)照。將YMA培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落，通過(guò)形態(tài)觀察挑選 與根瘤菌菌落形態(tài)特征相似菌落通過(guò)平板劃線法分離純化，挑選單菌落進(jìn)行斜面與甘油管 保藏待用。通過(guò)形態(tài)學(xué)和16S rDNA序列分析鑒定結(jié)果表明，菌株ATHC-2屬于中華根瘤菌屬 (Sinorhizobium sp.)，現(xiàn)保藏于：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保 藏號(hào)為CGMCC No. 10651，保藏日期為：2015年3月20日，分類命名為中華根瘤菌屬 (Sinorhizobium sp.)，保藏地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0019] 本發(fā)明通過(guò)分離篩選到的耐低溫溶磷中華根瘤菌(Sinorhizobium sp.)，ATHC_2， 實(shí)驗(yàn)室生理生化特性研究表明，菌株ATHC-2能夠在Pikovskays ' s培養(yǎng)基和NBRIP培養(yǎng)基生 長(zhǎng)，具有較強(qiáng)溶磷活性。低溫脅迫試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株ATHC-2能夠在4°C_15°C低溫條件下正 常生長(zhǎng)，且能夠保持固氮酶活性。溫室盆栽試驗(yàn)及田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種含有ATHC-2 的菌劑能夠增加供試大豆根系結(jié)瘤數(shù)量，提高大豆地下部與地上部生物量，顯著增加供試 大豆產(chǎn)量。
[0020]本發(fā)明還提供一種含有上述低溫溶磷中華根瘤菌的固體生物菌劑，制作方法如 下:通過(guò)添加羧甲基纖維素（1 % -5 % v/v)制得含有菌株ATHC-2有效活菌數(shù)量達(dá)到2-5億個(gè)/ 毫升，液體制劑經(jīng)真空低溫冷凍干燥法制得，制成品體積小，質(zhì)量輕，便于運(yùn)輸保存，其有效 活菌數(shù)量達(dá)到1-2億個(gè)/克。
[0021]本發(fā)明還提供一種液體根瘤菌劑的制備方法，大豆根瘤菌Sinorhizobium sp.ATHC-2的活化，將-80°C甘油保藏根瘤菌菌種在超凈工作臺(tái)中室溫融化，用移液槍吸取 融化后菌液1〇〇μ1，滴加于250ml三角瓶中的無(wú)菌液體TY培養(yǎng)基，置于搖床中28°C，180rpm條 件下培養(yǎng)48h。吸取活化后菌液100μΙ，分別滴加與三只準(zhǔn)備好的無(wú)菌YMA平板，恒溫培養(yǎng)箱 中28°C培養(yǎng)3d，待菌落形成，采用劃線法與常規(guī)染色檢測(cè)菌株純度與活性。
[0022]通過(guò)鏡檢確定菌株ATHC-2純度后，吸取上述TY培養(yǎng)基菌株培養(yǎng)液，按1 %接種量接 種于3瓶500ml滅菌后冷卻至室溫TY培養(yǎng)基，28°C，180rpm條件下培養(yǎng)72h，將菌液無(wú)菌條件 下轉(zhuǎn)移至滅菌后50ml離心管中，離心法收集菌體（10000rpm，10min)，重復(fù)上述操作。將收集 到的菌體加入無(wú)菌水反復(fù)震蕩洗滌三次，離心棄去上清液，加入0.9 %無(wú)菌生理鹽水，震蕩 后懸浮所得菌體備用。無(wú)菌條件下吸取上述懸浮液4ml，測(cè)定其600nm下吸光度，同時(shí)進(jìn)行梯 度稀釋平板法檢測(cè)活菌數(shù)量。通過(guò)上述制備過(guò)程得菌液添加粘附劑甲基纖維素（1%-5%ν/ v)濃縮制得不同規(guī)格的液體制劑密封包裝，有效活菌數(shù)量達(dá)到2-5億個(gè)/毫升。
[0023]菌劑的使用方法為:液體菌劑稀釋50-100倍，浸泡植物種子0.5-1小時(shí)后播種。固 體制劑按1:20比例溶解于水中，浸泡種子0.5-1小時(shí)后播種。
[0024] 本發(fā)明篩選的菌及制備的菌劑的相關(guān)特性試驗(yàn)如下：
[0025] -、試驗(yàn)處理
[0026] 溫室盆栽與田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)處理：
[0027]⑴未接菌對(duì)照組(盆栽）；
[0028]⑵添加菌劑ATHC-2組(盆栽）；
[0029] (3)不施用氮肥組（田間）；
[0030] ⑷施用50 %氮肥組（田間）；
[0031] (5)不施用氮肥添加菌劑ATHC-2組（田間）。
[0032] 每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)。上述處理分別在溫室盆栽和田間小區(qū)完成。其中人工氣候室 培養(yǎng)條件為：日光照時(shí)長(zhǎng)為14h，黑夜時(shí)長(zhǎng)10h，白晝時(shí)段溫度為26 ± 2°C，黑夜時(shí)段溫度為20 ± 2 °C，濕度為 60 %-70 %。
[0033] 1.根瘤菌ATHC-2溶解無(wú)機(jī)磷酸鹽試驗(yàn)
[0034] 菌株ATHC-2溶磷試驗(yàn)采用添加 0 · 5 %磷酸三鈣的Pikovskays ' s培養(yǎng)基和NBRIP培 養(yǎng)基（Γ1: : glucose，10g:Ca3(P04)2,5g;MgC12W6H20,5g;MgS047H20,0.25g ;KCl，0.2g; (NH4)2S04,0. lg;瓊脂粉15g)。配制上述培養(yǎng)基分裝于250ml三角瓶中每瓶100ml，121°C， 30min滅菌室溫冷卻后滴加，對(duì)數(shù)期菌種懸液(0D6m = 1.0)。30 °C，培養(yǎng)3d，7d后觀察記錄。每 組實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。
[0035] 2.根瘤菌ATHC-2低溫生長(zhǎng)與固氮試驗(yàn)
[0036] 接種對(duì)數(shù)期菌株ATHC-2于YMA固體平板，4 °C和7 °C下連續(xù)培養(yǎng)，分別于3d和7d觀察 生長(zhǎng)情況并記錄。將菌株ATHC-2接種于Ashby無(wú)氮固體培養(yǎng)基，4°C，7°C和15°C下連續(xù)培養(yǎng)， 分別于3d和7d觀察生長(zhǎng)情況并記錄。
[0037] 3.溫室條件下接種根瘤菌ATHC-2試驗(yàn)
[0038]挑選飽滿健全大豆品種:科豐6號(hào)和黑河68各約100粒，以無(wú)菌水沖洗去種子所帶 泥土，自來(lái)水漂洗去掉泥土，3%NaC10表面消毒15min，無(wú)菌水漂洗5次。將表面消毒后種子 浸泡于稀釋100倍的菌體懸浮液中，置于恒溫培養(yǎng)箱28°C，培養(yǎng)lh。分別撈出兩種大豆種子， 室溫陰干后播種。以無(wú)菌水浸泡作為對(duì)照組。溫室大棚培養(yǎng)30d取樣收獲。
[0039] 5.田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)
[0040]通過(guò)拌種法接種權(quán)利要求書(shū)2中所述菌劑，在天津?yàn)I海新區(qū)中塘鎮(zhèn)南臺(tái)村開(kāi)展田 間小區(qū)實(shí)驗(yàn)。供試大豆品種:科豐6號(hào)，試驗(yàn)小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方法，小區(qū)面積約6500平 方米。試驗(yàn)密度:40萬(wàn)株/公頃。播種方法:人工開(kāi)溝單粒點(diǎn)播，人工覆土鎮(zhèn)壓。收獲方法:去 邊行全區(qū)人工收獲，人工脫粒，淸雜去水后統(tǒng)計(jì)地上部與地下部生物量，產(chǎn)量等指標(biāo)。
[0041 ]通過(guò)對(duì)本發(fā)明所述菌劑實(shí)驗(yàn)室生理特性研究表明，菌株ATHC-2能夠耐受低溫對(duì)其 生長(zhǎng)的影響，且具有較強(qiáng)溶磷活性，有利于防范我國(guó)北方地區(qū)低溫對(duì)農(nóng)業(yè)生長(zhǎng)造成的危害。 溫室盆栽試驗(yàn)與田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與不施用氮肥組及施用50%氮肥組相比，添加本 發(fā)明所述菌劑能夠增加供試大豆根系結(jié)瘤數(shù)量，提高大豆地下部與地上部生物量，顯著增 加供試大豆產(chǎn)量。該菌劑的使用有助于緩解低溫對(duì)我國(guó)高煒度低溫區(qū)大豆等農(nóng)作物生產(chǎn)的 不利影響。通過(guò)制備耐低溫根瘤菌劑緩解低溫脅迫對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大豆結(jié)瘤固氮的影響，提 高土壤肥力，減少化肥使用量，提高大豆等農(nóng)作物產(chǎn)量與品質(zhì)。
[0042]二、結(jié)果與分析
[0043] 1.菌株ATHC-2溶磷特征分析
[0044] 菌株ATHC-2能夠在Pikovskays ' s培養(yǎng)基NBRIP培養(yǎng)基生長(zhǎng)，通過(guò)30°C，3d和7d培養(yǎng) 結(jié)果表明，菌株G1能夠在上述兩種添加難溶性無(wú)機(jī)磷酸鹽的培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，且溶磷活 性顯示為陽(yáng)性，表明菌株G1具有溶解難溶性無(wú)機(jī)磷酸鹽的能力。
[0045] 2.菌株低溫生長(zhǎng)與固氮研究
[0046] 通過(guò)YMA培養(yǎng)基在4°C，7°C和15°C條件下生長(zhǎng)與固氮研究結(jié)果表明，菌株ATHC-2能 夠在7 °C和15 °C條件下在YMA培養(yǎng)基正常生長(zhǎng)，而在4 °C條件下長(zhǎng)勢(shì)較弱。7 °C和15 °C培養(yǎng)條 件下，菌株ATHC-2在Ashby無(wú)氮固體培養(yǎng)基上能夠正常生長(zhǎng)，表明菌株ATHC-2能夠在低溫下 固氮。
[0047] 3.添加根瘤菌對(duì)不同品種大豆生物量的影響
[0048] ⑴通過(guò)溫室盆栽試驗(yàn)研究添加 ATHC-2菌劑對(duì)兩種大豆不同器官生物量的影響。結(jié) 果表明，添加 ATHC-2菌劑能夠增加供試大豆黑河68根系，莖，葉片和豆莢干重，其中根，莖和 豆莢與對(duì)照比達(dá)顯著水平(P〈〇.05)。與未接菌對(duì)照相比，添加 ATHC-2能夠顯著增加供試大 豆科豐6號(hào)根，莖和葉片生物量(p〈0.05)。如圖1，2所示。
[0049] ⑵田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明。添加 ATHC-2菌劑能夠增加供試大豆根系結(jié)瘤數(shù)量，提 高大豆地下部與地上部生物量，顯著增加供試大豆產(chǎn)量。如表1，2所示。
[0050] 表1田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)處理大豆鮮重、干重及收獲物干重表(單位:g)
[0051]
[0052] 注:0 % N為不施用氮肥組;50 % N為施用50 %氮肥組；
[0053] 表2添加 ATHC-2菌劑對(duì)大豆株高及產(chǎn)量影響
[0054]
[0055] 注:0 % N為不施用氮肥組;50 % N為施用50 %氮肥組·
[0056] ATHC-2的 16S rDNA序列如下：
[0057] GGGCGGCAGGCTTACACATGCAAGTCGAGCGCCCCGCAAGGGGAGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATCTA CCCTTTTCTACGGAATAACGCAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATGAGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGGAAA GGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGG ATGATCAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGC GCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATG ACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGG AATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGATTGTTAAGTGAGGGGTGAAATCCCAGGGCTCAACCCTGGAACTGCC TTTCATACTGGCAATCTAGAGTCCAGAAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGA GGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGTCTGGAACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATT AGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTCGGGCAGTTTACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACG CATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTG GAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATCCCGATCGCGGATACGAGAGATCG TATCCTTCAGTTCGGCTGGATCGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAG TCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGC CGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGA CAGTGGGCAGCGAGACCGCGAGGTCGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGT GCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCC CGTCACACCATGGGAGTTGGTTCTACCCGAAGGTAGTGCGCTAACCGCAAGGAGGCAGCTAACCACGGTAGTCAGCG AAT
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種低溫溶磷中華根瘤菌，其特征在于:菌種名稱為ATHC-2，分類命名為中華根瘤菌 屬Sinorhizobium sp.，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏 號(hào)為CGMCC No.10651，保藏日期為：2015年3月20日，保藏地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1 號(hào)院3號(hào)。2. 含有權(quán)利要求1所述的低溫溶磷中華根瘤菌的生物菌劑，其特征在于：在含有菌株 ATHC-2的發(fā)酵液中添加體積百分比為1-5%羧甲基纖維素，制得有效活菌數(shù)量達(dá)到2-5億 個(gè)/毫升的液體菌劑。3. 含有權(quán)利要求1所述的低溫溶磷中華根瘤菌的生物菌劑粉末，其特征在于:將權(quán)利要 求2所述的液體菌劑經(jīng)低溫冷凍干燥制得粉末菌劑，其有效活菌數(shù)量達(dá)到1-2億個(gè)/克。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK105838655SQ201610415006
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日
【發(fā)明人】郭軍康, 郭瑾, 盧書(shū)華, 馮人偉, 王瑞剛, 丁永禎
【申請(qǐng)人】農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所, 天津吉麥生態(tài)農(nóng)業(yè)技術(shù)研究院