一種乳酸鏈球菌素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了一種乳酸鏈球菌素的制備方法，屬于乳酸鏈球菌素制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸鏈球菌素是由一些乳酸乳球菌在代謝過程中合成和分泌的具有很強(qiáng)抑菌作用的多肽，分子量約為3510Da。由于它對(duì)許多革蘭氏陽性菌，尤其對(duì)引起食品腐敗的芽孢桿菌、梭菌、葡萄球菌、李斯特氏菌等有強(qiáng)烈抑制作用，加之其可被消化道中酶降解，是一種對(duì)人體無毒的天然食品防腐劑，已被廣泛應(yīng)用于乳制品、罐裝食品、肉制品和飲料的防腐保鮮劑。
[0003]自二十世紀(jì)六十年代以來，從發(fā)酵液中提取乳酸鏈球菌素的方法和手段陸續(xù)建立，其回收過程主要包括如下步驟:發(fā)酵液酸化、加熱、濃縮、鹽析(或噴霧干燥)、真空干燥。濃縮方法主要有:低溫真空濃縮法、超濾濃縮法、泡沫濃縮、吸附濃縮。吸附法在發(fā)酵液中加入固體顆粒吸附劑吸附乳酸鏈球菌素，解吸后將解吸液鹽析或噴霧干燥，制成粉末狀乳酸鏈球菌素產(chǎn)品;膜過濾法首先采用板框過濾對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理，去除菌體等固形物，濾液用超濾膜濃縮后，濃縮液鹽析或噴霧干燥，制成乳酸鏈球菌素粉末。市場(chǎng)上的產(chǎn)品為乳酸鏈球菌素與氯化鈉的復(fù)配品，效價(jià)2 90011]/11^，純度為2.5%左右。
[0004]發(fā)明專利“從乳酸乳球菌發(fā)酵液中分離乳酸鏈球菌素的方法”(申請(qǐng)?zhí)?200510066481.7)采用膜過濾方法，用無機(jī)膜或管式膜從發(fā)酵液中去除菌體和固體等分子量比乳酸鏈球菌素分子量大的物質(zhì)；用卷式膜超濾從發(fā)酵液中去除分子量比乳酸鏈球菌素分子量小的物質(zhì)，得到的發(fā)酵液濃縮物，加入固體食鹽，噴霧干燥后食鹽含量為10?50 %。
[0005]發(fā)明專利“一種乳酸鏈球菌素的提取方法”(申請(qǐng)?zhí)?CN201110230940.6)，采用將乳酸鏈球菌素發(fā)酵濃縮液，與水微溶性有機(jī)溶劑或水不溶性有機(jī)溶劑混合，攪拌靜置，固相分離，得乳酸鏈球菌素濕餅，真空減壓干燥，即得乳酸鏈球菌素產(chǎn)品，該方法雖然克服了工藝鹽含量高、產(chǎn)品純度低的缺陷，但是采用了有機(jī)溶劑沉淀乳酸鏈球菌素。
[0006]發(fā)明專利“一種制備乳酸鏈球菌素的提取工藝”(申請(qǐng)?zhí)?CN101906153A)，采用發(fā)酵液打入酸化罐進(jìn)行酸化解析，得酸化液;隨后將酸化液打入曝氣罐，曝氣后經(jīng)過濾進(jìn)入接收器，濃縮發(fā)酵液;之后濃縮發(fā)酵液栗入有機(jī)膜過濾，得到高純濃縮發(fā)酵液;最后高純濃縮發(fā)酵液稀釋后添加食用鹽，干燥后即得乳酸鏈球菌素產(chǎn)品，該方法解決了現(xiàn)有乳酸鏈球菌素提取工藝存在收得率低，單位成本高，并且普遍采用有機(jī)溶劑萃取或洗脫，影響了產(chǎn)品質(zhì)量且對(duì)人體有毒害的問題，但是采用曝氣裝置，操作繁瑣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對(duì)目前常用方法在制備乳酸鏈球菌素的過程中，普遍采用有機(jī)溶劑萃取或者脫洗，影響了產(chǎn)品質(zhì)量且對(duì)人體有毒害，另外制成的產(chǎn)品工藝鹽含量高、產(chǎn)品純度低、提取率低的現(xiàn)狀，提供了一種不添加有機(jī)溶劑淋洗，純天然制備乳酸鏈球菌素的方法。該方法以白蘿卜和鰍魚為原料，首先通過沸煮成漿后，冷卻發(fā)酵，隨后將發(fā)酵固體物進(jìn)行發(fā)霉，收集發(fā)酵渣霉菌，發(fā)酵液則浸泡發(fā)酵渣霉菌，從而得到懸浮菌絲液，之后將得到的懸浮菌絲液靜置分層，減壓得濾液后向其中加入硅膠并再次過濾，最后將濾液真空干燥，從而得到一種乳酸鏈球菌素的制備方法。該方法操作簡便，步驟簡練，原料易得，單位成本低，在制備的過程中不采用有機(jī)溶劑萃取或洗脫，不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量且對(duì)人體無害，最終使得制得的乳酸鏈球菌素工藝鹽含量低、產(chǎn)品純度高于75%，且產(chǎn)品收率高于85%，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
[0008]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(I)取8?10條個(gè)體重量在35?45g的鰍魚，經(jīng)宰殺、去尾、去頭、去內(nèi)臟后，用清水反復(fù)清洗，去除殘留的污物，隨后將洗后的鰍魚均勻切成長2?5cm的魚塊，再用無菌水淋洗干凈，放入菠蘿篩中于無菌通風(fēng)環(huán)境下自然風(fēng)干；
(2 )挑選600?800g無霉斑、無病蟲害的冬至?xí)r節(jié)白蘿卜，洗凈泥沙，用刀削去表皮后，均勻切成長I?2cm，寬2?3cm的蘿卜塊，在開水中燙3?5min后取出放入煮鍋中，并向其中加入上述步驟得到的鰍魚塊以及白蘿卜質(zhì)量2?3倍的清水，混合均勻，在90?110°C下沸煮，其中在沸煮過程中每隔20min用筷子攪拌混合物I?2min，直至混合物完全熟爛成漿為止，隨后將煮后的混合物取出，待其自然冷卻后，倒入5L的發(fā)酵罐中，在溫度為38?58°C，空氣相對(duì)濕度為65?68%下，密封發(fā)酵；
(3)密封發(fā)酵2?3個(gè)月后，將上述發(fā)酵物放入臥式離心機(jī)中，以1200?1250r/min轉(zhuǎn)速下離心分離10?15min，去渣，取上層液體放入2L陶瓷罐中，備用；
(4)同時(shí)將離心分離所得離心物敞開放置于空氣中，放在溫度為28?32°C，空氣相對(duì)濕度為65?68%處，任其自然長菌，待發(fā)酵渣變質(zhì)發(fā)霉長出青褐色菌絲時(shí)，用消毒后的棉簽刮下菌絲放入盛有300mL無水乙醇的燒杯中，收集發(fā)酵渣霉菌；
(5)選取上述步驟(3)得到的備用發(fā)酵液，用質(zhì)量濃度為10%醋酸調(diào)節(jié)pH值為5.3?
6.2，再與上述無水乙醇浸泡的發(fā)酵渣霉菌混合，得到菌絲懸浮液，隨后將得到的菌絲懸浮液靜置過夜，待分層后分離，得上層液，經(jīng)減壓過濾，收集過濾液；
(6)在上述得到的過濾液中加入過濾液質(zhì)量3%的硅膠，攪拌均勻，靜置15?20min，過濾得濾液，將濾液真空干燥，即可得到一種乳酸鏈球菌素。
[0009]本發(fā)明的應(yīng)用方法是:將本發(fā)明制得的乳酸鏈球菌素加入到pH值為3.8?4.2的酸奶、果奶中，其中加入量為每I?2kg酸奶、果奶中添加0.08?0.12g，待添加完畢，混合均勻，在溫度為90?95°C的紫光燈下滅菌15?20min后，灌裝即可。經(jīng)檢測(cè)，酸奶、果奶的保質(zhì)期從原來的10?12天，延長至22?28天，灌裝產(chǎn)品變敗率從5?8 %降低到了 I?2 %，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明操作簡便，原料易得，單位成本低，是綠色環(huán)保工藝；
(2)本發(fā)明在制備過程中不采用有機(jī)溶劑萃取或洗脫，不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量且對(duì)人體無害;
(3)本發(fā)明最終制得的乳酸鏈球菌素工藝鹽含量低、產(chǎn)品純度高，使用后可以延長產(chǎn)品的保質(zhì)期，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0011]首先取8?10條個(gè)體重量在35?45g的鰍魚，經(jīng)宰殺、去尾、去頭、去內(nèi)臟后，用清水反復(fù)清洗，去除殘留的污物，隨后將洗后的鰍魚均勻切成長2?5cm的魚塊，再用無菌水淋洗干凈，放入菠蘿篩中于無菌通風(fēng)環(huán)境下自然風(fēng)干;然后挑選600?SOOg無霉斑、無病蟲害的冬至?xí)r節(jié)白蘿卜，洗凈泥沙，用刀削去表皮后，均勻切成長I?2cm，寬2?3cm的蘿卜塊，在開水中燙3?5min后取出放入煮鍋中，并向其中加入上述步驟得到的鰍魚塊以及白蘿卜質(zhì)量2?3倍的清水，混合均勻，在90?110Γ下沸煮，其中在沸煮過程中每隔20min用筷子攪拌混合物I?2min，直至混合物完全熟爛成漿為止，隨后將煮后的混合物取出，待其自然冷卻后，倒入5L的發(fā)酵罐中，在溫度為38?58°C，空氣相對(duì)濕度為65?68%下，密封發(fā)酵;密封發(fā)酵2?3個(gè)月后，將上述發(fā)酵物放入臥式離心機(jī)中，以1200?1250r/min轉(zhuǎn)速下離心分離10?15min，去渣，取上層液體放入2L陶瓷罐中，備用；同時(shí)將離心分離所得離心物敞開放置于空氣中，放在溫度為28?32°C，空氣相對(duì)濕度為65?68 %處，任其自然長菌，待發(fā)酵渣變質(zhì)發(fā)霉長出青褐色菌絲時(shí)，用消毒后的棉簽刮下菌絲放入盛有300mL無水乙醇的燒杯中，收集發(fā)酵渣霉菌;接下來選取上述得到的備用發(fā)酵液，用質(zhì)量濃度為10%醋酸調(diào)節(jié)pH值為5.3?
6.2，再與上述無水乙醇浸泡的發(fā)酵渣霉菌混合，得到菌絲懸浮液，隨后將得到的菌絲懸浮液靜置過夜，待分層后分離，得上層液，經(jīng)減壓過濾，收集過濾液;最后在上述得到的過濾液中加入過濾液質(zhì)量3 %的硅膠，攪拌均勻，靜置15?20min，過濾得濾液，將濾液真空干燥，即可得到一種乳酸鏈球菌素。
[0012]實(shí)例I
首先取8條個(gè)體重量在35g的嫩魚，經(jīng)宰殺、去尾、去頭、去內(nèi)臟后，用清水反復(fù)清洗，去除殘留的污物，隨后將洗后的鰍魚均勻切成長2cm的魚塊，再用無菌水淋洗干凈，放入菠蘿篩中于無菌通風(fēng)環(huán)境下自然風(fēng)干;然后挑選600g無霉斑、無病蟲害的冬至?xí)r節(jié)白蘿卜，洗凈泥沙，用刀削去表皮后，均勻切成長I cm，寬2cm的蘿卜塊，在開水中