一株大葉黃楊內(nèi)生細(xì)菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物農(nóng)藥領(lǐng)域，尤其設(shè)及一株大葉黃楊內(nèi)生細(xì)菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿 菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物炭痘病是一類地域分布廣泛的世界性病害。從單子葉植物到雙子葉植物、從 裸子植物到被子植物均有炭痘病危害的報(bào)道。該病侵染植物葉片、莖干、果實(shí)等，造成巨大 的經(jīng)濟(jì)損失。炭痘菌的無(wú)性階段隸屬于真菌界（E U m y C 0 t a )，半知菌亞口 (Deuteromycotina)，腔抱綱（Coelomycetes)，黑盤抱目（Melanconiales)，炭痘菌屬 (Colletotrichum Corda);有性態(tài)屬于真菌界化umycota)，子囊菌口（Ascomyco1:a)，核菌綱 (Pyrenomyetes)，球殼菌目（S地aeriales)，小叢殼屬(Glomerella)。植物炭痘病菌W菌絲 體和分生抱子盤隨病殘?bào)w或者在±壤中越冬，成為病害的初侵染源，當(dāng)溫濕度條件適宜時(shí)， 分生抱子萌發(fā)產(chǎn)生菌絲并侵染植物。炭痘病菌在寄主植物上形成分生胞子盤，產(chǎn)生的分生 抱子通過(guò)風(fēng)雨瓣散傳播進(jìn)行再侵染。炭痘病嚴(yán)重影響農(nóng)林作物和園林觀賞植物的產(chǎn)量與品 質(zhì)，危害嚴(yán)重時(shí)甚至引起植物死亡。
[0003] 大葉黃楊化uonymus japonicus Thunb.)是一種在我國(guó)廣泛分布的常綠樹種，常 常作為園林園藝觀賞植物栽植于道路兩旁、公園、校園、私人庭院等場(chǎng)所。大葉黃楊常受到 各種病蟲害的侵害，其中炭痘病是一類在大葉黃楊上發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的一種真菌病害。 該病主要發(fā)生于大葉黃楊的葉片和枝梢上，感病植株葉部的病斑常呈褐色，近圓形或不規(guī) 則形，微具同屯、輪紋;枝梢部的病斑呈楠圓形或不規(guī)則形的潰瘍斑，病斑擴(kuò)展后，枝梢頭部 彎曲下垂枯死，后期病斑上產(chǎn)生小粒黑點(diǎn)即病菌分生胞子盤。在高溫多濕條件下，分生抱子 盤會(huì)產(chǎn)生膠粘狀粉紅色分生抱子堆。
[0004] 大葉黃楊炭痘病原菌的分生抱子在病枝、病葉或±壤中越冬，翌年借風(fēng)雨傳播并 侵染新葉，病菌抱子主要通過(guò)風(fēng)雨、昆蟲等傳播，還通過(guò)栽培管理活動(dòng)或帶病苗木遠(yuǎn)距離傳 播。該病可從傷口侵入或者自然孔口，也可直接侵入。
[0005] 目前大葉黃楊炭痘病的防治主要還依賴于化學(xué)防治，該防治方法容易導(dǎo)致病菌的 抗藥性和環(huán)境污染等問(wèn)題。植物內(nèi)生菌是一類與寄主植物長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化而形成的一類共生 微生物，在促進(jìn)植物生長(zhǎng)、提高植物抗逆性等方面發(fā)揮重要作用，內(nèi)生菌作為微生物農(nóng)藥也 具有潛在的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一株大葉黃楊內(nèi)生 細(xì)菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌，滿足使用需求。本發(fā)明的另一目的是提供上述大葉黃楊內(nèi)生細(xì) 菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌的應(yīng)用。
[0007] 技術(shù)方案:為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[000引一株大葉黃楊內(nèi)生菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌，其分類命名為（Bacillus methylotro地icus；)HYEB5-6,已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏編號(hào)是CCTCC NO: M2015728，保藏日期:2015年12月8日，保藏地址為湖北武漢武漢大學(xué)。
[0009] 所述的大葉黃楊內(nèi)生菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌HYEB5-6在抑制大葉黃楊炭痘菌生長(zhǎng) 中的應(yīng)用。
[0010] 所述的大葉黃楊內(nèi)生菌甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌HYEB5-6培養(yǎng)物在防治大葉黃楊炭痘 病中的應(yīng)用。
[0011] 所述的大葉黃楊內(nèi)生菌芽抱桿菌HYEB5-6在括抗大葉黃楊炭痘菌、交鏈抱菌、金黃 殼囊抱菌、希金斯刺盤抱菌、稻攝病菌、絲核菌、屯葉樹殼梭抱菌和腐皮鑲刀菌中的應(yīng)用。
[0012] 大葉黃楊內(nèi)生細(xì)菌芽抱桿菌HYEB5-6,是一株從大葉黃楊化uonymus japonicus Thunb.) -年生幼嫩的枝條中篩選獲得的對(duì)大葉黃楊炭痘菌((：.旨1〇6〇39〇1'；[01(163)生長(zhǎng)繁 殖有抑制作用的內(nèi)生細(xì)菌菌株。該大葉黃楊內(nèi)生細(xì)菌芽抱桿菌HYEB5-6的生物學(xué)特性如下： [OOK]菌株在NA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)表現(xiàn)為圓形、扁平、乳白色、表面權(quán)皺;菌體桿狀、長(zhǎng) 1.5-2μπι;具楠圓形芽抱，且芽抱中生;革蘭氏染色呈陽(yáng)性;有周生鞭毛；嗎I噪乙酸試驗(yàn)和產(chǎn) 出S試驗(yàn)呈陰性，甲基紅、明膠水解、淀粉水解及V.P試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。ΗΥΕΒ5-6菌株形態(tài)學(xué)及生 理生化特征與芽抱桿菌屬具有明顯的相似性。
[0014] ΗΥΕΒ5-6菌株的leSrDNA序列（SEQ ID NO. 1)與eztaxon數(shù)據(jù)庫(kù)中模式菌種的 leSrDNA序列進(jìn)行比對(duì)，并采用MEGA6.0軟件構(gòu)建HYEB5-6與高相似性菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。從 系統(tǒng)發(fā)育樹可W看出，HYEB5-6菌株與其他7株枯草芽抱桿菌同屬于枯草芽抱桿菌復(fù)合種運(yùn) 一分支，其中與甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌(Bacillus methylotrophicus)的親緣關(guān)系最接近（圖 1)。結(jié)合該菌的生物學(xué)習(xí)性與生理生化特性，將HYEB5-6鑒定為甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌 (Bacillus methylotrophicus)。
[0015] 有益效果:本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)勢(shì)：
[0016] 1)甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌HY邸5-6為植物內(nèi)生細(xì)菌，與其他從±壤、植株表面分離的 括抗菌相比，能更好地穩(wěn)定存在于大葉黃楊體內(nèi)，抑菌作用具有更好的持續(xù)性，該菌對(duì)大葉 黃楊炭痘菌(C.gloeosporioides)的生長(zhǎng)和致病性均具有顯著的抑制作用。
[0017] 2)甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌肌EB5-6對(duì)其他植物病原真菌，如交鏈抱菌(Alternaria sp.)、金黃殼囊抱菌（C}ftospora chrysosperm)、希金斯刺盤抱菌（Colletotrichum higginsianum)、稻攝病菌(Ma即aporthe oryzae)、絲核菌（lihizoctonia sp.)、屯葉樹殼梭 抱(化sicoc州m aes州li)和腐皮鑲刀菌屬(化sari皿solani)等均具有明顯的抑菌作用。
[0018] 3)該菌株對(duì)大葉黃楊炭痘病菌等多種植物病原菌具有明顯的括抗作用，為進(jìn)一步 開發(fā)W該菌株為核屯、的植物病害生防菌劑提供了基礎(chǔ)。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1是HYEB5-616S rDNA系統(tǒng)進(jìn)化樹圖；
[0020] 圖2是HYEB5-6對(duì)大葉黃楊炭痘病菌菌絲生長(zhǎng)的影響結(jié)果圖；
[0021 ]圖3是HYEB5-6對(duì)幾種植物病原真菌生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果圖；圖中，1-7分別為鏈格 抱菌，金黃色殼囊抱菌，希金斯刺盤抱菌，稻攝病菌，絲核菌，屯葉樹殼梭抱菌，腐皮鑲刀菌；
[0022]圖4是HYEB5-6的代謝產(chǎn)物對(duì)大葉黃楊炭痘病菌分生抱子萌發(fā)及芽管菌絲生長(zhǎng)的 影響結(jié)果圖；圖中，A.HYEB5-6代謝產(chǎn)物對(duì)分生抱子萌發(fā)的影響，B.HYEB5-6代謝產(chǎn)物對(duì)分生 抱子萌發(fā)產(chǎn)生的菌絲芽管的影響，C.HYEB5-6代謝產(chǎn)物處理后芽管菌絲膨大球的直徑；
[0023] 圖5是HYEB5-6的代謝產(chǎn)物對(duì)大葉黃楊炭痘病菌附著抱形成及附著膨壓的影響結(jié) 果圖；圖中，A.HYEB5-6代謝產(chǎn)物對(duì)大葉黃楊炭痘病菌附著抱形成的影響，B.HYEB5-6代謝產(chǎn) 物處理對(duì)附著抱膨壓的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 根據(jù)下述實(shí)施例，可W更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā) 明。
[00巧]實(shí)施例1 :HY