一種用于抑郁癥診斷的lncRNA標(biāo)志物、試劑盒及基因芯片的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于抑郁癥診斷的IncRNA標(biāo)志物、試劑盒及 基因芯片。
【背景技術(shù)】
[0002] 抑郁癥的核心癥狀是情緒低落、興趣減退、精力缺失，在全球范圍內(nèi)有超過3.5億 人患有抑郁癥。世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2020年，抑郁癥將占據(jù)世界疾病負(fù)擔(dān)的第二位。
[0003] 抑郁癥對社會造成的重大負(fù)擔(dān)，其原因有發(fā)病率高、發(fā)病年輕化、呈慢性發(fā)展、損 害其社會功能和認(rèn)知能力，及非自然死亡，抑郁癥患者中自殺死亡與自殺未遂的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn) 高于在普通人群中的比值。因此研究抑郁癥發(fā)病機(jī)理及可以體現(xiàn)其嚴(yán)重程度的生物標(biāo)志 物，并及時針對病因進(jìn)行干預(yù)與治療是治療疾病、減輕社會負(fù)擔(dān)的關(guān)鍵因素。
[0004] 關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制及治療原理目前尚不明確，既往認(rèn)為遺傳因素、生物學(xué)因 素、心理社會因素對抑郁癥的發(fā)生有一定的影響，后來學(xué)術(shù)界開展了神經(jīng)生化、神經(jīng)內(nèi)分 泌、神經(jīng)可塑性、神經(jīng)電生理以及神經(jīng)影像學(xué)等多方面研究，提出了多種病因假說、可能有 關(guān)的內(nèi)分泌軸、腦區(qū)結(jié)構(gòu)及功能的變化、腦區(qū)環(huán)路以及信號通路的變化等，均取得了相應(yīng)的 進(jìn)展，但目前仍然無單一的理論即可完全解釋抑郁癥的發(fā)病原因。現(xiàn)代分子遺傳學(xué)認(rèn)為很 多社會環(huán)境或自身經(jīng)歷等因素可引起基因表達(dá)的變化，可導(dǎo)致某些特定的基因發(fā)生表觀遺 傳改變，這些變化可引起神經(jīng)元的可塑性和功能異常，而這些異常表現(xiàn)可以被遺傳下來，即 表觀遺傳機(jī)制，基于基因水平的MDD發(fā)病機(jī)理及生物標(biāo)志物的研究逐步引起學(xué)者們的關(guān)注。
[0005] 非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)即不編碼蛋白質(zhì)的RNA，按照其長短分為長非 編碼RNA(>200bp)和短非編碼RNA(〈200bp)，廣義上包括1111?嫩、丨1?嫩、冰嫩、小干擾卩祖、111丨尺· 以及功能尚未明確的長鏈非編碼RNA。很多學(xué)者研究了miRNA在抑郁癥患者中的差異表達(dá)， 提示miRNA可能通過不同方式參與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展，例如神經(jīng)可塑性、神經(jīng)內(nèi)分泌、心理 社會因素、抗抑郁藥等，而且認(rèn)為miRNA-26b、miRNA-1972、miRNA-4485、miRNA-4498和 miRNA-4743等可以作為抑郁癥的生物標(biāo)志物。后來學(xué)者們發(fā)現(xiàn)LncRNA可以作為人類基因組 中一類非常重要的表觀遺傳調(diào)控因子，通過表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多種機(jī)制 調(diào)控DNA甲基化、組蛋白修飾或染色質(zhì)重構(gòu)，使基因沉默或激活，LncRNA還廣泛地參與中樞 神經(jīng)系統(tǒng)的各種生物學(xué)進(jìn)程，如海馬發(fā)育、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘形成、腦老化、CREB和PGCl-a 轉(zhuǎn)錄調(diào)控、GABA能神經(jīng)元和G蛋白偶聯(lián)受體等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān).LncRNA除了直接參與基因 的表達(dá)調(diào)控外，可作為一種競爭性內(nèi)源性RNA(Competing endogenous RNA，ceRNA)與miRNA 相互作用，從而實現(xiàn)相互間的交流與調(diào)節(jié)。LncRNAs與很多的人類疾病有關(guān)，比如癌癥、共濟(jì) 失調(diào)及心血管疾病，但是關(guān)于LncRNA在抑郁癥患者中差異表達(dá)的研究極少。
[0006] 越來越多的研究證明，在大腦的發(fā)育、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)元成熟及突觸形成過程中， IncRNA起關(guān)鍵的調(diào)控作用。進(jìn)一步的研究表明，抑郁癥癥的發(fā)生、發(fā)展中，IncRNA亦起重要 作用，并與抗抑郁藥物的療效有相關(guān)性。因此，某些IncRNA可成為抑郁癥診斷和預(yù)測抗抑郁 藥物治療效果的生物標(biāo)記物。
[0007] 越來越多的研究證明，在大腦的發(fā)育、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)元成熟及突觸形成過程中， IncRNA起關(guān)鍵的調(diào)控作用。進(jìn)一步的研究表明，抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展中，IncRNA亦起重要作 用，并與抗精神病藥物的療效有相關(guān)性。因此，某些IncRNA可成為抑郁癥診斷和預(yù)測抗精神 病藥物治療效果的生物標(biāo)記物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是:提供一種用于抑郁癥診斷的IncRNA標(biāo)志物。
[0009] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種用于抑郁癥診斷的 IncRNA標(biāo)志物，所述標(biāo)記物包括TC0NS_12_00001212(PY1)、N0NHSAT102891(PY2)、T⑶NS_ 00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、 N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)。所述 TC0NS_12_00001212、N0NHSAT102891、 TC0NS_00019174、ENST00000566208、N0NHSAG045500、ENST00000517573、N0NHSAT034045、 N0NHSAT142707為數(shù)據(jù)庫中的RNA代號，可以在數(shù)據(jù)庫中檢索得到，各IncRNA的具體來源數(shù) 據(jù)庫見表4。
[0010] 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種抑郁癥診斷試劑盒，其能夠測定血液中的 TC0NS_12_00001212(PY1)、N0NHSAT102891(PY2)、TC0NS_00019174(PY3)、ENST00000566208 (PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)這八種 IncRNA 的含量。
[0011]在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，上述試劑盒含有!'(：(^3_12_00001212(?￥1)、 N0NHSAT102891(PY2)、T⑶NS_00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500 (PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)的引物和探 針。
[0012] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，上述TC0NS_12_00001212的正向引物如SEQ ID N0.1所 示，TC0NS_12_00001212的反向引物如SEQ ID N0.2所示；N0NHSAT102891的正向引物如SEQ ID N0.3所示，N0NHSAT102891的反向引物如SEQ ID N0.4所示;TC0NS_00019174的正向引物 如SEQ ID N0.5所示，TC0NS_00019174的反向引物如SEQ ID N0.6所示；ENST00000566208的 正向引物如SEQIDN0.7所示，ENST00000566208的反向引物如SEQIDN0.8所示 ； N0NHSAG045500的正向引物如SEQIDN0.9所示，N0NHSAG045500的反向引物如SEQID N0.10所示 ;ENST00000517573的正向引物如SEQIDN0.11所示，ENST00000517573的反向引 物如SEQIDN0·12所示 ；N0NHSAT034045的正向引物如SEQIDN0·13所示，N0NHSAT034045 的反向引物如SEQIDN0.14所示 ；N0NHSAT142707的正向引物如SEQIDN0.15所示， N0NHSAT142707的反向引物如SEQIDN0.16所示。
[0013] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，上述TC0NS_12_00001212的探針序列如SEQ ID N0.17 所示；N0NHSAT102891的探針序列如SEQ ID N0.18所示；TC0NS_00019174的探針序列如SEQ IDN0·19所示；ENST00000566208的探針序列如SEQIDN0·20所示；N0NHSAG045500的探針 序列如SEQ ID N0.21所示；ENST00000517573的探針序列如SEQ ID N0.22所示； N0NHSAT034045的探針序列如SEQIDN0.23所示；N0NHSAT142707的探針序列如SEQID NO. 24所示。
[0014]在本發(fā)明的第三方面，提供了一種抑郁癥診斷基因芯片，包括探針和固相支持物 組成，所述探針序列如SEQ ID NO. 17~24所示，所述固相支持物包括玻璃片、硅片、聚丙烯 膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚苯乙烯膜。
[0015] 在本發(fā)明的第四方面，提供了一種用于評估抗抑郁癥藥物療效的IncRNA標(biāo)志物， 所述標(biāo)記物包括TC0NS_12_00001212(PY1)、TO0NS_00019174(PY3)、ENST00000566208 (PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)〇
[0016] 在本發(fā)明的第五方面，提供了一種評估抗抑郁癥藥物療效的試劑盒，其能夠測定 血液中的 TC0NS_12_00001212(PY1)、T ⑶NS_00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、 N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9WPN0NHSAT142707 (PY10)七種IncRNA的含量。
[0017] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，上述試劑盒含有TC0NS_12_00001212 (PY1)、T⑶NS_ 00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、 N0NHSAT034045(PY9)、NONHSAT 142707(PY10)的引物及探針。
[0018] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，上述TC0NS_12_00001212的正向引物如SEQ ID Ν0.1所 示，TC0NS_12_00001212的反向引物如SEQ ID N0.2所示；TC0NS_00019174的正向引物如SEQ IDN0.5所示，TC0NS_00019174的反向引物如SEQIDN0.6所示 ;ENST00000566208的正向引 物如SEQIDN0.7所示，ENST00000566208的反向引物如SEQIDN0.8所示 ；N0NHSAG045500 的正向引物如SEQIDN0.9所示，N0NHSAG045500的反向引物如SEQIDN0.10所示 ； ENST000005