一種達(dá)肝素鈉的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的原料藥制備，其涉及一種達(dá)肝素鈉的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]達(dá)肝素鈉是一種低分子肝素鈉鹽，達(dá)肝素鈉為低分子量的肝素鈉，適用于血液透析的預(yù)防凝血和深靜脈血栓的治療;不穩(wěn)定型冠狀動(dòng)脈疾病;預(yù)防與手術(shù)有關(guān)的血栓形成。臨床研究的數(shù)據(jù)顯示，達(dá)肝素對(duì)老年患者的療效及安全性與年輕患者無(wú)總體差別。與普通肝素鈉比，達(dá)肝素在藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)方面都有諸多優(yōu)勢(shì)，包括:可預(yù)測(cè)抗凝效果;高生物利用度和長(zhǎng)的血漿半衰期;劑量可靠，安全性好等。
[0003]目前國(guó)內(nèi)在達(dá)肝素鈉的純化技術(shù)上主要有離子交換層析法，分子排阻法，以及超濾等方法。離子交換層析與分子排阻法得到的達(dá)特肝素鈉雖然產(chǎn)品質(zhì)量較高，但操作步驟繁瑣，純化周期長(zhǎng)，成本高，僅適用于少量的達(dá)肝素鈉進(jìn)行純化，無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種達(dá)肝素鈉的制備方法，采用本發(fā)明方法得到的精品達(dá)肝素鈉收率明顯提高，方法簡(jiǎn)單易行，生產(chǎn)用時(shí)少，成本低，適宜工業(yè)化生產(chǎn)，具有重要的應(yīng)用前景。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
一種達(dá)肝素鈉的制備方法，該制備方法包括以下步驟:
(1)降解:將肝素鈉溶解并降解，得到肝素鈉降解液；
(2)還原:將肝素鈉降解液用還原劑進(jìn)行還原，得到還原液；
(3)酶解:將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)pH，升到一定溫度后加入酶開始保溫一定時(shí)間；
(4)乙醇沉淀:加入乙醇，不斷攪拌；
(5)超濾:將乙醇沉淀物溶解，溶解液用超微濾膜進(jìn)行超濾；
(6)乙醇再沉淀:用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，加入乙醇，不斷攪拌；
(7)脫水干燥:用乙醇脫水干燥，得到精品達(dá)肝素鈉。
[0005]步驟(1)中，在10-20分鐘內(nèi)迅速升溫至80_90°C，并保持30_60分鐘，不斷攪拌。使肝素鈉降解更完全，且縮短生產(chǎn)用時(shí)。
[0006]步驟(2)中，向肝素鈉降解液中加入氫氧化鈉至pH為11-12終止降解反應(yīng)，再加入還原劑連二亞硫酸鈉或焦亞硫酸鈉或兩者混合還原3-5小時(shí)，然后調(diào)節(jié)PH至6.0-8.0，即得到還原液，還原劑的量為肝素鈉重量的0.5-1.0%。減少還原劑的用量。
[0007]步驟(3)中，將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)pH7.5-8.5，升溫到55_60°C之間后加入胰蛋白酶4-8g/億單位，再加入8-16g/億單位胃蛋白酶，55-60°C保溫3-5小時(shí)。
[0008]步驟(5 )中加入超濾液體積2-3倍的95%乙醇再沉淀10_14小時(shí)。
[0009]本發(fā)明提供了一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其主要具有的有益效果為:
本發(fā)明通過(guò)快速升溫使肝素鈉得到充分降解，縮短生產(chǎn)用時(shí)，且肝素鈉收率明顯提高，達(dá)肝素鈉質(zhì)量有明顯提高，且方法簡(jiǎn)單易行。
[0010]此外，該方法生產(chǎn)用時(shí)少，條件溫和，對(duì)設(shè)備要求低，成本低，方法中用到的多種化學(xué)試劑均低于現(xiàn)有工業(yè)生產(chǎn)中的用量及成本，非常適合應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)中，具有重要的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0011 ] 一種達(dá)肝素鈉的制備方法，該制備方法包括以下步驟:
(1)降解:將肝素鈉溶解并降解，得到肝素鈉降解液；(2)還原:將肝素鈉降解液用還原劑進(jìn)行還原，得到還原液；(3)酶解:將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)pH，升到一定溫度后加入酶開始保溫一定時(shí)間；(4)乙醇沉淀:加入乙醇，不斷攪拌；(5)超濾:將乙醇沉淀物溶解，溶解液用超微濾膜進(jìn)行超濾；(6)乙醇再沉淀:用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，加入乙醇，不斷攪拌；(7)脫水干燥:用乙醇脫水干燥，得到精品達(dá)肝素鈉。
[0012]實(shí)施例:
1.向反應(yīng)罐中加入肝素鈉30kg，再加入純化水100L使其全溶，用lmol/L的醋酸調(diào)節(jié)PH至6.5，控制溫度在35°C左右，加入100 g亞硝酸鈉。加熱，迅速升溫至80°C，保持30分鐘，并不斷攪拌，通冷凝水冷卻至室溫，得到肝素鈉降解液；
2.向肝素鈉降解液中加入氫氧化鈉至pH為11終止降解反應(yīng)，再加入還原劑焦亞硫酸鈉200g還原3小時(shí)，然后調(diào)節(jié)PH至6.5，即得到還原液；
3.將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)PH8.0，升溫到55°C之間后加入胰蛋白酶400g，再加入800g胃蛋白酶，55°C保溫4小時(shí)；
4.向還原液中加入95%乙醇沉淀至乙醇度為65%，進(jìn)行沉淀；
5.將上述沉淀物溶解，溶解液再用超微濾膜進(jìn)行超濾；
6.超濾后超濾液調(diào)節(jié)pH至6.5，加入超濾得到的超濾液體積3倍的95%乙醇沉淀10小時(shí)，用乙醇脫水干燥得到精品達(dá)肝素鈉27.8 kg。經(jīng)檢測(cè)重均分子量為5800，抗Xa/抗Ila比值為2:1，符合生產(chǎn)要求。
[0013]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種達(dá)肝素鈉的制備方法，其特征在于:該制備方法包括以下步驟: (1)降解:將肝素鈉溶解并降解，得到肝素鈉降解液； (2)還原:將肝素鈉降解液用還原劑進(jìn)行還原，得到還原液； (3)酶解:將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)pH，升到一定溫度后加入酶開始保溫一定時(shí)間； (4)乙醇沉淀:加入乙醇，不斷攪拌； (5)超濾:將乙醇沉淀再溶解，溶解液用超濾膜進(jìn)行超濾，得到超濾液； (6)乙醇再沉淀:用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，加入乙醇，不斷攪拌； (7 )脫水干燥:用乙醇脫水在適宜的溫度干燥，得到達(dá)肝素鈉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(1)中，用3-5倍量的水將肝素鈉全部溶解，調(diào)節(jié)PH至6.0-8.0，在25-35°C下加入亞硝酸鈉，該亞硝酸鈉為肝素鈉重量的0.1-0.3%,在10-20分鐘內(nèi)迅速升溫至80-90°C，并保持30-40分鐘，不斷攪拌，冷卻至室溫，得到肝素鈉降解液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(2)中，向肝素鈉降解液中加入氫氧化鈉至pH為11-12終止降解反應(yīng)，再加入還原劑連二亞硫酸鈉或焦亞硫酸鈉或兩者混合還原3-5小時(shí)，然后調(diào)節(jié)PH至6.0-8.0，即得到還原液，還原劑的量為肝素鈉重量的0.5-1.0%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(3)將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)PH7.5-8.5，升溫到55-60°C之間后加入胰蛋白酶4_8g/億單位，再加入8_16g/億單位胃蛋白酶，55-60°C保溫3-5小時(shí)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(4)中加入95%乙醇沉淀至乙醇度為65%-75%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(5)中乙醇沉淀物再溶后，用可截留10000的分子量的超微濾膜進(jìn)行超濾，得到超濾液。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(6)中先用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.0-8.0，在加入超濾液體積2-3倍的95%乙醇沉淀10-14小時(shí)。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(7)中乙醇脫水物在55-70°C干燥4-6小時(shí)，得到達(dá)肝素鈉。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種達(dá)肝素鈉的制備方法，包括：（1）降解：將肝素鈉溶解并降解，得到肝素鈉降解液；（2）還原：將肝素鈉降解液用還原劑進(jìn)行還原，得到還原液；（3）酶解：將上述還原液用鹽酸溶液調(diào)pH，升到一定溫度后加入酶開始保溫一定時(shí)間；（4）乙醇沉淀：加入乙醇，不斷攪拌；（5）超濾：將乙醇沉淀再溶解，溶解液用超微濾膜進(jìn)行超濾；（6）乙醇再沉淀：用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，加入乙醇，不斷攪拌；（7）脫水干燥：用乙醇脫水干燥，得到達(dá)肝素鈉。采用本發(fā)明方法得到的達(dá)肝素鈉，肝素鈉收率明顯提高，方法簡(jiǎn)單易行。此外，該方法生產(chǎn)用時(shí)少，條件溫和，成本低，適宜工業(yè)化生產(chǎn)，具有重要的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C08B37/10
【公開號(hào)】CN105440160
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510880058
【發(fā)明人】劉冠男, 江崇云, 遲培升
【申請(qǐng)人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月6日