一種降解石油污染物的液體制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及環(huán)境保護領域，具體涉及一種降解石油污染物的液體制劑。
【背景技術】
[0002] 生物修復技術是石油及相關產品污染土壤的主要修復技術。由于石油污染物具有 組成復雜性、生物難降解性和具有較低的生物可利用度等特點，土著微生物難以有效的、快 速的、徹底的降解土壤中的石油烴。生物添加法可通過添加具有高效降解石油烴能力的微 生物制劑提高生物修復的效率，有效的去除石油烴污染物。因此，加強優(yōu)勢菌選育和開發(fā)環(huán) 境微生物制劑是石油污染土壤生物修復技術的核心。土壤中存在多種能夠降解石油烴的微 生物，其中細菌和真菌是土壤生態(tài)系統(tǒng)中石油烴的主要降解者。
[0003] 以細菌為主要組成的微生物制劑通過細菌對石油烴底物的協(xié)同代謝、共代謝作用 完成對石油經的生物降解。2001年Maruyama Akihiko等人公開了采用Alcanivorax屬 和Bacillus屬的菌株制備成混合生物制劑降解海洋或相關環(huán)境中的重油污染物的方法 (JP2001037466)。細菌是原核生物，其在對有機污染物質的生物降解過程中主要所利用的 是單/雙加氧酶胞內氧化系統(tǒng)及一系列脫氫酶系，反應需在細菌與石油烴接觸后發(fā)生，細 菌對底物的利用受到石油烴生物可利用度低的限制。另外，石油烴與單/雙加氧酶系統(tǒng)最 適宜的底物范圍是C4-C20地直鏈烷烴，因此細菌對碳數(shù)更高、結構更為復雜的石油烴類的 降解較為困難。細菌在土壤中受到土壤顆粒的強吸附作用，導致投加的細菌難以在污染區(qū) 域中均勻分布，也影響了細菌生物制劑用于土壤生物修復過程的效率。細菌在代謝石油烴 的過程中會產生一些糖脂、多糖、蛋白質及脂蛋白等生物表面活性劑，生物表面活性劑類物 質能夠乳化石油烴，在一定程度上能夠加強石油烴的生物可利用度。
[0004] 真菌屬于真核生物，能夠分泌胞外酶，這些胞外酶多屬于氧化還原酶和水解酶。胞 外酶能夠分散到土壤環(huán)境中，通過直接與石油烴的接觸降解污染物。比如，白腐真菌能夠 分泌木質素降解酶至胞外，這類胞外酶能夠非特異性的降解染料、農藥和多環(huán)芳烴等環(huán)境 污染物，并且可將不溶性污染物部分氧化為可溶性物質，從而進一步被細菌代謝。因此，真 菌酶系的復雜性和能產生胞外酶的特點使得真菌更容易利用結構復雜、分子量較大的污染 物。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種降解石油污染物的液體制劑，該液體制劑中的微生物 可以實現(xiàn)對石油污染物的生物降解，該液體制劑中的降解促進劑蘆薈苷可以顯著提高其中 的微生物對石油污染物的生物降解能力。
[0006] 上述目的是通過如下技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] -種降解石油污染物的液體制劑，該液體制劑由真菌液體培養(yǎng)物、細菌液體培養(yǎng) 物和降解促進劑組成，真菌液體培養(yǎng)物與細菌液體培養(yǎng)物的混合比例為1 :〇. 1~10 ;所述 的真菌液體培養(yǎng)物為刺孢小克銀漢菌或白腐真菌黃孢原毛平革菌的單株液體培養(yǎng)物，或是 兩種真菌液體培養(yǎng)物的混合物，真菌培養(yǎng)物中的真菌含量為10~80mg干重/ml ;細菌液體 培養(yǎng)物是具有石油烴降解能力的細菌菌株的液體培養(yǎng)物，細菌含量為IO6~10 12個/ml ;所 述降解促進劑為蘆薈苷，在液體制劑中的濃度為〇. 2~0. 6mg/ml。
[0008] 進一步地，所述降解促進劑為蘆薈苷，在液體制劑中的濃度為0. 4mg/ml。
[0009] 進一步地，當真菌液體培養(yǎng)物為刺孢小克銀漢菌液體培養(yǎng)物與白腐真菌黃孢原毛 平革菌液體培養(yǎng)物的混合物時，刺孢小克銀漢菌液體培養(yǎng)物與白腐真菌黃孢原毛平革菌液 體培養(yǎng)物的混合比例為1 :〇. 8~1。
[0010] 進一步地，所述的具有石油烴降解能力的細菌為假單胞菌屬、諾卡氏菌屬、紅球菌 屬、微球菌屬、分枝桿菌屬、棒狀桿菌屬或芽孢桿菌屬中的一種或多種。
[0011] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0012] 1、本發(fā)明提供的降解石油污染物的液體制劑綜合利用真菌和細菌在降解石油烴 過程中各自的優(yōu)點，能夠實現(xiàn)真菌和細菌之間的生態(tài)合作與代謝途徑的互補，從而提高對 石油烴的降解能力。
[0013] 2、本發(fā)明提供的降解促進劑能夠顯著提高真菌和細菌對石油污染物的降解能力。
【具體實施方式】
[0014] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0015] 實施例1 :使用真菌刺孢小克銀漢菌1株和細菌假單胞菌1株的培養(yǎng)物組成液體 微生物制劑；蘆薈苷在液體制劑中的濃度為0. 4mg/ml。
[0016] 本實施例中使用的液體制劑按如下方法制備：
[0017] 在裝有100mL液體馬鈴薯培養(yǎng)基的容積為300ml三角瓶中接種刺孢小克銀漢菌， 在28°C，160rpm條件下培養(yǎng)3天，收集培養(yǎng)物，真菌含量為30mg干重/ml。在裝有100ml LB 液體培養(yǎng)基的容積為300ml三角瓶中接種假單胞菌，在30°C，160rpm條件下培養(yǎng)1天，收集 培養(yǎng)物，細菌含量為IO 8個/ml。將得到的真菌培養(yǎng)物和細菌培養(yǎng)物按照混合比例為5 : 1 進行混合。添加蘆薈苷，使其終濃度為〇.4mg/ml。
[0018] 實施例2 :使用真菌白腐真菌黃孢原毛平革菌1株和細菌紅球菌1株的培養(yǎng)物組 成液體微生物制劑；蘆薈苷在液體制劑中的濃度為0. 4mg/ml。
[0019] 本實施例中使用的液體制劑按如下方法制備：
[0020] 在裝有100mL液體馬鈴薯培養(yǎng)基的容積為300ml三角瓶中接種白腐真菌黃孢原毛 平革菌，在28°C，160rpm條件下培養(yǎng)3天，收集培養(yǎng)物，真菌含量為30mg干重/ml。在裝有 100ml LB液體培養(yǎng)基的容積為300ml三角瓶中接種紅球菌，在30 °C，160rpm條件下培養(yǎng)1 天，收集培養(yǎng)物，細菌含量為IO8個/ml