一種同時(shí)分離土大黃苷和去氧土大黃苷的工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種能夠同時(shí)分離土大黃苷和去氧土大黃苷的工業(yè)化 生產(chǎn)技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 土大黃苷的分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] CAS:155-58-8 分子式：C21H2409
[0005] 去氧土大黃苷的分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]
[0007] CAS:30197-14-9 分子式：C21H2408
[0008] 大黃為寥科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖，是我國(guó)傳統(tǒng) 中藥，已經(jīng)有幾千年的使用歷史，里面所含的大量蒽醌類(lèi)化合物，具有瀉下通便、破積滯、解 毒消癰等作用，《中國(guó)藥典》里規(guī)定不得檢出土大黃苷，但國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果表明土大黃苷和 去氧土大黃苷等二苯乙烯苷類(lèi)化合物具有抗菌、改善微循環(huán)、降血脂、降血壓、降血糖、抗腫 瘤、抑制過(guò)敏反應(yīng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫防御系統(tǒng)、抗血栓及抗氧化等作用，韓國(guó)科學(xué)家的研究還 表明土大黃苷具有一定的美白作用，作為具有生物活性的天然有機(jī)化合物單體，有望將其 開(kāi)發(fā)為創(chuàng)新藥物。土大黃、河套大黃、西寧大黃、羊蹄大黃、華北大黃中的土大黃苷和去氧 土大黃苷含量比較高，開(kāi)發(fā)一種適合于工業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)大量制備土大黃苷和去氧土大黃 苷，將其用于藥物研究并最終開(kāi)發(fā)為新藥造福人類(lèi)具有重要的意義。
[0009] 我們對(duì)現(xiàn)有工藝技術(shù)進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，都存在或多或少的不足。其中，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?為201210139975. 3,發(fā)明名稱(chēng)為《一種快速制備高純度土大黃苷和脫氧土大黃苷的方法》， 由于受設(shè)備及工藝的限制，每次只能制備幾百毫克的樣品，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足新藥研究和生產(chǎn) 的需要。其中，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枮?01110212533. 2,發(fā)明名稱(chēng)為《從河套大黃中提取土大黃苷 的方法》，制備過(guò)程中使用低沸點(diǎn)易燃易爆有機(jī)溶劑萃取，不但收率低而且容易發(fā)生安全事 故，而且只制備了土大黃苷一種化合物，沒(méi)有得到去氧土大黃苷，造成資源浪費(fèi)。其中，專(zhuān)利 申請(qǐng)?zhí)枮?01210166053. 1，發(fā)明名稱(chēng)為《一種高效率精準(zhǔn)分離純化去氧土大黃苷的方法》， 由于需要經(jīng)過(guò)兩次大孔樹(shù)脂純化，工藝冗長(zhǎng)，而且只得到去氧土大黃苷一種化合物，沒(méi)有得 到土大黃苷，也造成資源的浪費(fèi)。
[0010] 聚酰胺層析分離技術(shù)是八十年代發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，是分離科學(xué)領(lǐng)域的重大 創(chuàng)新，在天然有機(jī)化合物的分離純化中得到廣泛應(yīng)用，尤其是對(duì)酚類(lèi)化合物的分離效果更 好。它具有分離純化工藝簡(jiǎn)單、聚酰胺再生處理方便、聚酰胺化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、可重復(fù)使用數(shù) 百次甚至上千次等諸多優(yōu)點(diǎn)，深受植物活性成分提取行業(yè)的青睞。它的分離原理是根據(jù)有 機(jī)化合物的極性大小以及分子中羥基和羰基等官能團(tuán)與聚酰胺中的酰胺基團(tuán)形成氫鍵的 強(qiáng)弱進(jìn)行分離，在用水和酒精溶液等強(qiáng)極性溶劑為洗脫溶劑的情況下相當(dāng)于反相色譜，極 性大的先洗脫下來(lái)，弱極性的后洗脫下來(lái)；當(dāng)使用弱極性溶劑如二氯甲烷、石油醚、正己烷 等為洗脫溶劑的情況下相當(dāng)于正相色譜。在工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程中，只需食用酒精洗脫和再生 就可以，制備的目標(biāo)化合物無(wú)有毒有害溶劑殘留，因此，采用聚酰胺分離純化天然有機(jī)化合 物已經(jīng)得到天然產(chǎn)物化學(xué)、植物提取等領(lǐng)域?qū)＜业钠毡檎J(rèn)可。
[0011] 由于土大黃苷分子和去氧土大黃苷分子的極性差別比較大又屬于酸類(lèi)有機(jī)化合 物，因此本發(fā)明使用聚酰胺對(duì)多種大黃中的土大黃苷和去氧土大黃苷進(jìn)行分離純化，充分 利用藥材資源大批量生產(chǎn)高純度土大黃苷和去氧土大黃苷滿足藥物研究需要。選用聚酰胺 作為分離材料、梯度洗脫用酒精濃度的確定、重結(jié)晶方法以及重結(jié)晶母液中土大黃苷和去 氧土大黃苷的回收純化等工藝的選擇也得本發(fā)明主要改進(jìn)的地方。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠同時(shí)分離土大黃苷和去氧土大黃苷的生產(chǎn)工藝， 該工藝生產(chǎn)流程簡(jiǎn)單，操作方便，不使用有毒有害溶劑，只使用食用酒精，而且還具有生產(chǎn) 成本低，產(chǎn)品純度高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。
[0013] 本發(fā)明所述的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：
[0014] 1)將大黃粉碎，
[0015] 2)用酒精提取大黃，提取液濃縮至無(wú)酒精味，加水得大黃提取液，
[0016] 3)將大黃提取液過(guò)濾后，上聚酰胺層析柱吸附，先用純化水洗脫，后用酒精梯度洗 脫，將含有土大黃苷和去氧土大黃苷的洗脫液分別收集并濃縮至有結(jié)晶析出，過(guò)濾，干燥， 得到土大黃苷粗品和去氧土大黃苷粗品，
[0017] 4)將兩種粗品分別用酒精重結(jié)晶，離心，過(guò)濾干燥，即得土大黃苷和去氧土大黃 苷，
[0018] 5)將土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０穼游鲋兓猛链?黃苷，將去氧土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０窐?shù)脂純化得去氧土大 黃苷。
[0019] 其中，步驟1)中大黃是指土大黃、河套大黃、西寧大黃、羊蹄大黃、華北大黃。
[0020] 其中，步驟2)酒精提取是常溫提取或加熱回流提取，藥材與酒精質(zhì)量體積比為 1:1至1:20,酒精濃度是20% - 95%。
[0021] 其中，步驟4)梯度洗脫用酒精濃度分別是0 - 40%和50% - 95%。
[0022] 其中，步驟4)制備得到的土大黃苷的含量彡98. 5%，去氧土大黃苷的含量 彡 98. 5%〇
[0023] 其中，步驟5)重結(jié)晶用酒精濃度是20% - 95%，粗品與酒精的質(zhì)量體積比為1:1 至 1:20。
[0024] 其中，步驟5)制備得到的土大黃苷，含量為98. 9%，回收率彡90%;制備得到的去 氧土大黃苷，含量為98. 7%，回收率多90%。
[0025] 其中，本發(fā)明所述酒精為食用酒精。
[0026] 優(yōu)選的，本發(fā)明的生產(chǎn)工藝，步驟如下：
[0027] 1)將大黃粉碎成粉末，
[0028] 2)按1:1至1:20的質(zhì)量體積比向大黃粉末中加入濃度為20%-95%的酒精溶液， 加熱回流提取1 - 3小時(shí)，提取次數(shù)為1 - 3次，合并提取液濃縮至無(wú)酒精味，加水得大黃提 取液，
[0029] 3)將大黃提取液過(guò)濾后上聚酰胺層析柱吸附，先用水洗脫，然后用1 - 3倍柱體積 的濃度為10 - 50 %酒精洗脫，之后再用濃度50 - 95 %的酒精洗脫至目標(biāo)分子完全洗脫下 來(lái)，土大黃苷先被洗脫下來(lái)，去氧土大黃苷后被洗脫下來(lái)，分別收集土大黃苷和去氧土大黃 苷洗脫液，濃縮至有結(jié)晶析出，過(guò)濾，干燥，得到土大黃苷粗品和去氧土大黃苷粗品，
[0030] 4)將土大黃苷粗品和去氧土大黃苷粗品分別用1 - 20倍的20 - 95%酒精加熱回 流溶解，加活性炭脫色，室溫自然結(jié)晶過(guò)濾，干燥，得到土大黃苷和去氧土大黃苷，
[0031] 5)將土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０穼游鲋兓猛链?黃苷，將去氧土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０窐?shù)脂純化得去氧土大 黃苷。
[0032] 進(jìn)一步優(yōu)選的，本發(fā)明所述的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：
[0033] 1)將大黃粉碎成粉末，
[0034] 2)按1:7 - 10的質(zhì)量體積比向大黃粉末中加入濃度為50% - 85%的酒精溶液，加 熱回流提取2小時(shí)，提取次數(shù)為2次，合并提取液濃縮至無(wú)酒精味，加水得大黃提取液，
[0035] 3)將大黃提取液過(guò)濾后上聚酰胺層析柱吸附，先用水洗脫，然后用1 - 3倍柱體積 的濃度為20 - 50 %酒精洗脫，之后再用濃度50 - 80 %的酒精洗脫至目標(biāo)分子完全洗脫下 來(lái)，土大黃苷先被洗脫下來(lái)，去氧土大黃苷后被洗脫下來(lái)，分別收集土大黃苷和去氧土大黃 苷洗脫液，濃縮至有結(jié)晶析出，過(guò)濾，干燥，得到土大黃苷粗品和去氧土大黃苷粗品，
[0036] 4)將土大黃苷粗品和去氧土大黃苷粗品分別用8 - 12倍的70 - 85%酒精加熱回 流溶解，加活性炭脫色，室溫自然結(jié)晶過(guò)濾，干燥，得到土大黃苷和去氧土大黃苷，
[0037] 5)將土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０穼游鲋兓猛链?黃苷，將去氧土大黃苷重結(jié)晶母液減壓回收酒精，加水稀釋?zhuān)暇埘０窐?shù)脂純化得去氧土大 黃苷。
[0038] 進(jìn)一步優(yōu)選的，本發(fā)明所述的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：
[0039] 1)將大黃用萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，得到目數(shù)為60目的藥材粉末，
[0040] 2)按1:10的料液質(zhì)量體積比向所述藥材粗粉中加入濃度為70%的酒精溶液，置 于帶攪拌的提取罐中加熱回流提取2小時(shí)，提取次數(shù)為2次，合并提取液濃縮至無(wú)酒精味， 加水得大黃提取液，
[0041] 3)將大黃提取液過(guò)濾后上聚酰胺層析柱吸附，先用水洗去極性大的水溶性雜質(zhì)， 然后用兩倍柱體積的濃度為30%酒精洗脫，再用60%酒精洗脫至目標(biāo)分子完全洗脫下來(lái)， 土大黃苷先被洗脫下來(lái)，去氧土大黃苷后被洗脫下來(lái)，分別收集土大黃苷和去氧土