尿素的無水乙醇溶液中，尿酯比I : 1 g:g，醇酯比10 : I g:g，在60°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)0.5h后，在12°C結(jié)晶2h，然后在 5°C結(jié)晶6h，最后在-KTC結(jié)晶lh，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，40°C減 壓濃縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料YMC-Pack 0DS-AQ，流動(dòng)相為甲醇-異丙醇-水(體積比80 : 5 : 15 得到的洗脫液合并后 于60°C減壓濃縮，然后70°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾80°C、8Pa， 二級(jí)蒸餾120°C、9Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0062] 實(shí)施例2 (1) 取EPA乙酯重量百分含量為70%的魚油，加到尿素的95%乙醇溶液中，尿酯比 2.5 : I g:g，醇酯比4 : I g:g，在78°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)2h后，在15°C結(jié)晶3h， 然后在3°C結(jié)晶4h，最后在-7°C結(jié)晶3h，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下， 60°C減壓濃縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料YMC-Pack 0DS-AQ，流動(dòng)相為甲醇-異丙醇-水(體積比85 : 10 : 5 得到的洗脫液合并后 于60°C減壓濃縮，然后80°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾KKTC、 6Pa，二級(jí)蒸餾140°C、2Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0063] 實(shí)施例3 (1)取EPA乙酯重量百分含量為70%的魚油，加到尿素的95%乙醇溶液中，尿酯比2 : 1 g:g，醇酯比8 : I g:g，在45°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)Ih后，在KTC結(jié)晶lh，然后在0°C 結(jié)晶3h，最后在-5°C結(jié)晶2h，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50°C減壓濃 縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料YMC-Pack ODS-AQ，流動(dòng)相為甲醇-異丙醇-水(體積比82 : 9 : 得到的洗脫液合并后 于60°C減壓濃縮，然后90°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾90°C、4Pa， 二級(jí)蒸餾135°C、6Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0064] 實(shí)施例4 (1) 取EPA乙酯重量百分含量為80%的魚油，加到尿素的95%乙醇溶液中，尿酯比 1.2 : I g:g，醇酯比8 : I g:g，在75°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)2h后，在KTC結(jié)晶lh，然 后在0°C結(jié)晶4h，最后在-KTC結(jié)晶lh，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下， 50°C減壓濃縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料Kromasil C1S， 流動(dòng)相為甲醇-異丙醇-水(體積比85 : 5 : 得到的洗脫液合并后于50°C 減壓濃縮，然后80°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾90°C、4Pa， 二級(jí)蒸餾140°C、7Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0065] 實(shí)施例5 (1) 取EPA乙酯重量百分含量為80%的魚油，加到尿素的95%乙醇溶液中，尿酯比 1.5 : I g:g，醇酯比6 : I g:g，在70°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)2h后，在KTC結(jié)晶lh，然 后在0°C結(jié)晶4h，最后在-KTC結(jié)晶lh，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下， 50°C減壓濃縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料YMC-Pack 0DS-AQ，流動(dòng)相為甲醇-異丙醇-水(體積比85 : 5 : 10 得到的洗脫液合并后 于50°C減壓濃縮，然后80°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾90°C、2Pa， 二級(jí)蒸餾130°C、2Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0066] 實(shí)施例6 (1) 取EPA乙酯重量百分含量為80%的魚油，加到尿素的95%乙醇溶液中，尿酯比2 : 1 g:g，醇酯比7 : I g:g，在70°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)，2h后，在KTC結(jié)晶lh，然后在(TC 結(jié)晶3h，最后在-KTC結(jié)晶lh，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，50°C減壓 濃縮，20%-25%氯化鈉洗滌2次，得到濃縮物； (2) 步驟1所得的濃縮物注入高效液相色譜系統(tǒng)，使用DAC色譜柱，填料YMC-Pack 0DS-AQ，流動(dòng)相按以下方法進(jìn)行梯度洗脫：
得到的洗脫液合并后于50°C減壓濃縮，然后80°C薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3)對(duì)步驟2所得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，溫度和壓力分別為一級(jí)蒸餾90°C、 0.1 Pa，二級(jí)蒸餾125°C、0.1 Pa，得到EPA乙酯濃縮物。
[0067] 分別對(duì)實(shí)施例1~3液相色譜分離純化時(shí)，按照下式計(jì)算上樣率： 上樣率=W /W ±W4, W±#為色譜制備時(shí)上樣的樣品重量，Ww4為色譜制備時(shí)色譜柱中的 填料重量，結(jié)果見下表。
[0068] 分別對(duì)實(shí)施例1飛最終制備得到的EPA乙酯濃縮物進(jìn)行EPA乙酯的重量百 分含量、5種反式EPA的含量及濃縮物的過氧化值和茴香胺值的檢測(cè)，結(jié)果見下表。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高純度的EPA乙酯濃縮物，其特征在于所述EPA乙酯濃縮物包含按油的重量百 分含量計(jì)至少96. 5%的EPA乙酯，并且反-5,順-8, 11，14, 17-二十碳五烯酸乙酯、反-11， 順-5, 8, 14, 17 -二十碳五烯酸乙酯、反-14,順-5, 8, 11，17-二十碳五烯酸乙酯、反-17， 順-5, 8, 11，14-二十碳五烯酸乙酯及反-8, 17,順-5, 11，14-二十碳五烯酸乙酯的含量均 低于0. 3%，濃縮物過氧化值低于2,茴香胺值低于5。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度的EPA乙酯濃縮物，特征在于其制備方法是： (1) 將EPA乙酯重量百分含量大于等于70%的原料魚油，加到尿素的乙醇溶液中，在 45°C~78°C，優(yōu)選60°C~75°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)0. 5~24h后，在KTC~15°C結(jié)晶l~3h， 然后在(TC~5°C結(jié)晶:T6h，最后在-KTC~-5°C結(jié)晶廣3h，過濾除去結(jié)晶所得的析出物，濾 液在惰性氣體保護(hù)下，減壓濃縮、洗滌，得到濃縮物； (2) 對(duì)步驟1制得的濃縮物采用高效液相色譜法進(jìn)行分離純化，流動(dòng)相為甲醇-異丙 醇-水，其中甲醇與異丙醇的體積比為80 : 10 ~85 : 5 異丙醇與水的體積比為5 : 15~10 : 得到的洗脫液合并后減壓濃縮，然后經(jīng)薄膜蒸發(fā)，得到濃縮物； (3) 對(duì)步驟2所制得的濃縮物進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，其中一級(jí)蒸餾是在80°C~100°C、壓力 小于IOPa條件下進(jìn)行，二級(jí)蒸餾是在120°C~140°C、壓力小于IOPa條件下進(jìn)行，得到高純 度EPA乙酯濃縮物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 1的乙醇是95%乙醇。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 1的反應(yīng)時(shí)間為〇. 5~2h。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步 驟1中尿素與原料魚油的重量比是I: 1~2.5 :Ig:g，乙醇與原料魚油的重量比是4 : 1~10 :Ig:g;優(yōu)選為尿素與原料魚油的重量比是1.2 :Ig:g，乙醇與原料魚油的重量比 是 8 :Ig:g〇6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 1是將魚油加到尿素的乙醇溶液中，在45°C~78°C下攪拌溶解至澄清，反應(yīng)0.5~24h后，先在 KTC結(jié)晶lh，然后在(TC結(jié)晶3h，最后在-5°C結(jié)晶2h。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 2使用的色譜柱為DAC色譜柱，填料為KromasilC18。8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 2使用的流動(dòng)相甲醇-異丙醇-水是按如下方法進(jìn)行梯度洗脫：9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度的EPA乙酯濃縮物的制備方法，其特征在于所述步驟 3優(yōu)選為一級(jí)分子蒸餾是在90°C、壓力小于等于5Pa條件下進(jìn)行，二級(jí)分子蒸餾在130°C、壓 力小于等于5Pa條件下進(jìn)行。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度的EPA乙酯濃縮物，其特征在于所述的反-5， 順-8, 11，14, 17-二十碳五烯酸乙酯、反-11，順-5, 8, 14, 17 -二十碳五烯酸乙酯、反-14， 順-5, 8, 11，17-二十碳五烯酸乙酯、反-17,順-5, 8, 11，14-二十碳五烯酸乙酯及反-8, 17， 順-5, 11，14-二十碳五烯酸乙酯的含量，是按照毛細(xì)管氣相色譜法，色譜條件為色譜柱 Omegawax320 (30mX0.32mmX0.25um)，柱溫米用程序升溫，載氣為氫氣,FID檢測(cè)器，進(jìn)樣 口溫度250°C，檢測(cè)器溫度270°C，初始柱溫170°C，I.(TC/min升溫至225°C，以C23:。乙酯作 內(nèi)標(biāo)物，并對(duì)色譜圖按面積歸一化法計(jì)算得到的百分含量。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種EPA乙酯濃縮物，該濃縮物包含按油的重量百分含量計(jì)至少96.5%的EPA乙酯并且反式EPA和氧化產(chǎn)物含量控制在盡可能低的水平，具體為濃縮物中反-5,順-8,11,14,17-二十碳五烯酸乙酯、反-11,順-5,8,14,17-二十碳五烯酸乙酯、反-14,順-5,8,11,17-二十碳五烯酸乙酯、反-17,順-5,8,11,14-二十碳五烯酸乙酯、反-8,17,順-5,11,14-二十碳五烯酸乙酯的含量均低于0.3%，同時(shí)濃縮物的過氧化值低于2，茴香胺值低于5，該產(chǎn)品的氧化穩(wěn)定性更好，安全性更高。
【IPC分類】C07C67/48, C07C69/587
【公開號(hào)】CN105218367
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410249801
【發(fā)明人】蘇誠(chéng), 郭禮新, 郭暉, 徐開輝, 左長(zhǎng)英, 黃建
【申請(qǐng)人】四川國(guó)為制藥有限公司
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2014年6月9日