一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]木聚糖酶(1，4_β — D — xylanase; EC 3.2.1.8)是一種重要的工業(yè)用酶，在造紙工業(yè)、食品、飼料和能源等領(lǐng)域中具有重要的應(yīng)用價值。不同的應(yīng)用領(lǐng)域?qū)δ揪厶敲傅拿笇W(xué)特性有不同的要求，比如，在造紙工業(yè)中，木聚糖酶主要作為紙漿漂白助劑，用于提高紙張的百度和強度，減少傳統(tǒng)氯化物漂白劑的應(yīng)用，為了不破壞紙漿中的纖維素，一般要求采用沒有纖維素酶活性的堿性木聚糖酶。在飼料工業(yè)上，木聚糖酶主要作為飼料添加劑，用于降解木聚糖，提高動物對飼料的利用率，一般選擇在酸性條件下有高活性，同時能耐蛋白酶降解的木聚糖酶。自然界中，不同來源的木聚糖酶的酶活特性有很大的差異，有著各自特異的最適反應(yīng)pH和最適作用溫度。多數(shù)木聚糖酶最適反應(yīng)pH值在4.0?6.0，容易被蛋白酶降解，因此研究開發(fā)出在pH 2-3環(huán)境中具有高酶活性，同時能耐受蛋白酶降解的木聚糖酶在飼料工業(yè)上具有重要的應(yīng)用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法的技術(shù)方案。
[0004]所述的一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
將青霉菌在固體PDA平板上30°C培養(yǎng)5-7天，收集孢子，制成每毫升含有17孢子的孢子懸液，按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30° C，200 rpm搖床中培養(yǎng)，得到含有嗜酸木聚糖酶的培養(yǎng)液。
[0005]所述的一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有:ΚΗ2Ρ043.0 g/L，NaN033.0 g/L，CaCl20.5 g/L，MgSO4.7 H2O0.5 g/L，F(xiàn)eSO4.7H207.5 mg/L，MnS04*H202.5 mg/L, ZnS042.0 mg/L, CoC123.0 mg/L0
[0006]上述的一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，設(shè)計合理，通過該方法得到的木聚糖酶活力達(dá)到150U/ml，纖維素酶活力達(dá)到3.5 U/ml，其在在動物飼料、食品工業(yè)中具有重要的應(yīng)用價值。
【具體實施方式】
[0007]以下將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
[0008]實施例1
將青霉菌在固體PDA平板上30°C培養(yǎng)5-7天，收集孢子，制成每毫升含有17孢子的孢子懸液，按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30° C，200 rpm搖床中培養(yǎng)，每隔24小時取樣1ml，離心取上清用于測定酶活。
[0009]該發(fā)酵培養(yǎng)基含有:ΚΗ2Ρ043.0 g/L, NaN033.0 g/L, CaCl20.5 g/L, MgSO4*7 H2O0.5g/L, FeSO4*7H207.5 mg/L, MnS04*H202.5 mg/L, ZnS042.0 mg/L, CoC123.0 mg/L。
[0010]木聚糖酶的活性檢測方法簡述如下:
測定底物:1.0%山毛櫸木木聚糖(Beech wood xylan, Sigma)；
標(biāo)準(zhǔn)曲線:分別吸取O mM , ImM, 2 mM, 3 mM，4 mM和5 mM木糖標(biāo)準(zhǔn)液，加入等體積DNS，沸水中沸騰5分鐘，取出冷卻后，于波長540 nm測定吸光值，根據(jù)獲得的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0011]木聚糖酶活測定:取1.5ml離心管，加入100 μ I木聚糖底物溶液，95 μ I pH緩沖液，5 μ I稀釋10倍的酶粗提液，550C保溫10 min，加入200 μ I DNS,搖勻后沸水浴5min，冷卻后于波長540nm測定吸光值，以O(shè) min反應(yīng)時間為空白對照。
[0012]酶活性定義為:在55°C，相應(yīng)pH條件下，I min水解木聚糖底物產(chǎn)生出相當(dāng)于I μmol葡萄糖的還原糖量為一個酶活力單位。酶活測定時選用的底物為山毛櫸木木聚糖(Beech wood xylan，Sigma)，利用二硝基水楊酸(DNS)方法檢測還原糖。
[0013]測定結(jié)果顯示，在pH 3.0的情況下HN培養(yǎng)液上清酶活為150 U/ml。
【主權(quán)項】
1.一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于包括以下工藝步驟: 將青霉菌在固體PDA平板上30°C培養(yǎng)5-7天，收集孢子，制成每毫升含有17孢子的孢子懸液，按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30° C，200 rpm搖床中培養(yǎng)，得到含有嗜酸木聚糖酶的培養(yǎng)液。2.如權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有:KH2P043.0 g/L，NaN033.0 g/L,CaCl20.5 g/L，MgS04*7 H2O0.5 g/L,FeS04*7H207.5 mg/L, MnS04*H202.5 mg/L, ZnS042.0 mg/L, CoC123.0 mg/L0
【專利摘要】一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。其包括以下工藝步驟：將青霉菌在固體PDA平板上30oC培養(yǎng)5-7天，收集孢子，制成每毫升含有107孢子的孢子懸液，按2%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30oC，200rpm搖床中培養(yǎng)，得到含有嗜酸木聚糖酶的培養(yǎng)液。上述的一種生產(chǎn)嗜酸木聚糖酶的方法，設(shè)計合理，通過該方法得到的木聚糖酶活力達(dá)到150U/ml,纖維素酶活力達(dá)到3.5U/ml，其在動物飼料、食品工業(yè)中具有重要的應(yīng)用價值。
【IPC分類】C12N9/42, C12R1/80
【公開號】CN105200026
【申請?zhí)枴緾N201510610309
【發(fā)明人】秦文勝
【申請人】浙江科峰生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月23日