一種提高大櫻桃花粉萌發(fā)率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種提高植物花粉萌發(fā)率的方法，具體設(shè)及一種一種提高大樓桃花粉 萌發(fā)率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大樓桃屬于菩薇科落葉喬木果樹(shù)，是中國(guó)北方落葉果樹(shù)中繼中國(guó)樓桃之后果實(shí)成 熟最早的果樹(shù)樹(shù)種，因此，早有"春果第一枝"的美譽(yù)。在調(diào)節(jié)鮮果淡季，均衡周年供應(yīng)和滿 足人民生活的需要方面，有著特殊的作用。一直W來(lái)，大樓桃適宜在迂寧、山東、陜西、河南、 河北等地栽培，長(zhǎng)江中下游暖冬地區(qū)由于存在著年均氣溫過(guò)高，尤其是夏季高溫、雨水多、 ±質(zhì)粘重等問(wèn)題而被認(rèn)為是大樓桃栽種的非適宜區(qū)，"花而不實(shí)"、花器崎形、坐果率偏低、 崎形果率偏高等問(wèn)題一直限制著大樓桃產(chǎn)區(qū)向低海拔地區(qū)推進(jìn)。但是，由于長(zhǎng)江中下游地 區(qū)春季升溫快，大樓桃生育期有望比北方適栽區(qū)明顯縮短、果實(shí)成熟期提早、價(jià)格高，因而 近年來(lái)大樓桃在南方地區(qū)引種試栽正逐漸受到重視。
[0003] 大樓桃絕大多數(shù)品種自花授粉不結(jié)實(shí)，在生產(chǎn)上必須配置授粉樹(shù)或在花期人工輔 助授粉才能獲得預(yù)期的產(chǎn)量和品質(zhì)。人工授粉所用的花粉主要是新鮮花粉，但也有用上年 采集的膽藏花粉授粉。使用膽藏花粉時(shí)，其生活力的高低直接影響人工授粉的效果。在正常 條件下，花粉在雌蕊柱頭上所具有的萌發(fā)能力，就是花粉的生活力。采集的花粉和膽存的花 粉，在使用之前必須作生活力的鑒定，W評(píng)價(jià)花粉是否有授精能力。所W，對(duì)花粉生活力進(jìn) 行測(cè)定，可W成為其W后分析坐果率高低的重要依據(jù)。此外，在雜交工作中，往往由于需要 應(yīng)用經(jīng)膽藏的花粉或經(jīng)郵寄的花粉，因此在雜交前檢查是否具有生活力是十分必要的。其 原理是人工創(chuàng)造一個(gè)適于花粉發(fā)芽的環(huán)境條件，從而鑒定花粉發(fā)芽能力的強(qiáng)弱。在人工創(chuàng) 造花粉發(fā)芽的環(huán)境條件時(shí)，其培養(yǎng)基的種類及配比、培養(yǎng)溫濕度對(duì)大樓桃花粉萌發(fā)具有十 分重要的影響，因此找到合適的上述培養(yǎng)條件十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對(duì)目前的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種提高大樓桃花粉萌發(fā)率的方法，可W有 效的解決大樓桃花粉的收集、膽藏和萌發(fā)等問(wèn)題。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種提高大樓桃花粉 萌發(fā)率的方法，包括：
[0006] 1)花粉的采集與保存：4月初采集含巷待放的鈴鏈花帶回室內(nèi)，用軟毛牙刷刷下 花藥，置于光滑紙面，用50目鐵篩除去花絲，把鮮花藥均勻地鋪在60cmX 45cm的白紙上， 置于20-25°C干燥培養(yǎng)箱中干燥散粉，每?jī)尚r(shí)翻動(dòng)一次，24h后，花藥開(kāi)裂散出花粉，然 后，把花藥倒入100目細(xì)蘿篩，把花粉篩入侶盆中，最后用毛刷將白紙上W及細(xì)蘿篩上的花 粉也輕輕刷入盆中，將篩出的花粉用若干硫酸紙小袋包好標(biāo)記后放入塑料盒子中，再添加 1.5-2倍的變色硅膠干燥劑，花粉要分散埋在變色硅膠中，然后密封，放入-18°C冰柜里膽 藏備用；
[0007]?；ǚ凵盍y(cè)定
[000引固體培養(yǎng)基的制備：在500血的燒杯中加入IOOmL蒸饋水，再加入瓊脂，在微波爐 中加熱，使之完全烙解，然后加入薦糖，制成糖液。注意在熬制時(shí)要用玻璃棒不斷攬拌，使其 融化均勻，還可加入微量聚乙二醇、維生素等W形成花粉粒發(fā)芽的最適環(huán)境條件。再加入少 量棚酸，W促進(jìn)花粉的萌發(fā)。等到溶液冷卻后，調(diào)節(jié)抑值6. 5。在熬制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)在燒杯 上的液面處用計(jì)號(hào)筆沿液面劃線標(biāo)記。當(dāng)液面在熬制過(guò)程中因水分蒸發(fā)下降時(shí)，應(yīng)及時(shí)添 加蒸饋水，W保持培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)濃度，并將熬制好的培養(yǎng)基溶液連燒杯放入盛有35°C熱水 的容器中，防止冷卻凝固，W備隨后使用。
[0009] 器皿消毒：發(fā)芽實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的載玻片、蓋玻片、綴子等都要經(jīng)過(guò)酒精消毒后備用， 使用時(shí)要盡量減少和手指接觸的面積，W減少污染。
[0010] 花粉的播種與活力測(cè)定：用滴管吸取培養(yǎng)基溶液，立即滴一滴于載玻片的中央，越 薄越好，否則透光性差，影響在顯微鏡下觀察，當(dāng)凝固后再進(jìn)行花粉的播種。播花粉時(shí)，用經(jīng) 酒精消毒過(guò)的頭發(fā)絲薩取花粉，在培養(yǎng)基的表面輕輕震動(dòng)。一要在培養(yǎng)基上劃波浪線，避免 頭發(fā)絲過(guò)重地接觸培養(yǎng)基，破壞培養(yǎng)基的表面；二要注意盡量在培養(yǎng)基上均勻劃線，使得花 粉的分布松散、均勻，不能密集成堆；=要注意適宜的播種數(shù)量。一般情況下，一個(gè)顯微鏡 視野W分布80~120?；ǚ哿橐?。播好后將載玻片放置于培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)皿要事先在 皿內(nèi)放好濾紙或棉墊并加水用于保濕。每種花粉做3組即3個(gè)載玻片。而后要在培養(yǎng)皿上 用玻璃鉛筆標(biāo)號(hào)，并進(jìn)行記錄，記錄內(nèi)容包括花粉種類、采粉時(shí)間，播種時(shí)間。用濕紗布覆 蓋后加蓋，放于25°C的光暗培養(yǎng)箱內(nèi)采用光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的方法培養(yǎng)?；ǚ叟囵B(yǎng) 15min~25min后部分花粉開(kāi)始萌發(fā)，花粉萌發(fā)后花粉管長(zhǎng)度超過(guò)花粉粒直徑，花粉管開(kāi)始 快速生長(zhǎng)。培養(yǎng)3.化~4h后，W花粉管長(zhǎng)度大于花粉粒直徑為花粉萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù) 3次，每重復(fù)隨機(jī)觀察3~5個(gè)視野，每視野觀察花粉數(shù)30~80粒，統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率。
[0011] 所述的消毒處理是將實(shí)驗(yàn)用品用無(wú)菌紗布包裹浸入70-75%濃度的酒精中消毒 10-15S，快速取出立即浸入飽和次氯酸鋼溶液中消毒6minW上，在消毒過(guò)程中輕輕晃動(dòng)使 其消毒充分，最后用無(wú)菌水沖洗多次。
[001引所述的固體培養(yǎng)基為0. 5 %瓊脂+10 %薦糖+0. 3 %棚酸+Img?L1嗎I噪乙酸 +30g?L1聚乙二醇+IOmg?L1維生素Vc。
[0013] 所述的光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)花粉是采用光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的方法，光照培養(yǎng)光 源采用日光燈，溫度控制在20°C-25°c，光照強(qiáng)度10Jimol.m2.S1-13Jimol.m2.S1，光照培 養(yǎng)20min后轉(zhuǎn)為暗培養(yǎng)，再隔20min后切換為光照培養(yǎng)，如此反復(fù)。
[0014]本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明解決了大樓桃花粉的收集、膽藏和萌發(fā)等技術(shù)難題， 通過(guò)采用固體培養(yǎng)基結(jié)合光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的方法交替培養(yǎng)花粉來(lái)測(cè)定花粉發(fā)芽 情況。本發(fā)明培養(yǎng)基測(cè)定的花粉具有良好的萌發(fā)率，用本發(fā)明的方法對(duì)大樓桃的花粉進(jìn)行 培養(yǎng)，具有花粉萌發(fā)時(shí)間短、萌發(fā)率高等優(yōu)點(diǎn)，具有較好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述，W使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征能更易于被 本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍做出更為清楚明確的界定。
[0016] 實(shí)施時(shí)間：2015年4月-2015年8月
[0017] 實(shí)施地點(diǎn)：鎮(zhèn)江農(nóng)科院華陽(yáng)園區(qū)果樹(shù)示范區(qū)
[0018](一）具體實(shí)施例：
[0019] 實(shí)驗(yàn)品種為4年生'布魯克斯'大樓桃。4月初采集含巷待放的鈴鏈花帶回室 內(nèi)，用軟毛牙刷刷下花藥，置于光滑紙面，用50目鐵篩除去花絲，把鮮花藥均勻地鋪在 60cmX45cm的白紙上，置于20-25°C干燥培養(yǎng)箱中干燥散粉，每?jī)尚r(shí)翻動(dòng)一次，24h后，花 藥開(kāi)裂散出花粉，然后，把花藥倒入100目細(xì)蘿篩，把花粉篩入侶盆中，最后用毛刷將白紙 上W及細(xì)蘿篩上的花粉也輕輕刷入盆中；
[0020] 采用固體培養(yǎng)法進(jìn)行花粉萌發(fā)條件的篩選。其中固體培養(yǎng)基的配制方法為：在 SOOmL的燒杯中加入IOOmL蒸饋水，再加入瓊脂，在微波爐中加熱，使之完全烙解，然后加入 糖液，再加入少量棚酸，在其中加入微量聚乙二醇、維生素W形成花粉粒發(fā)芽的最適環(huán)境條 件，促進(jìn)花粉的萌發(fā)，等到溶液冷卻后，調(diào)節(jié)pH值6. 5,在熬制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)在燒杯上的液面 處用計(jì)號(hào)筆沿液面劃線標(biāo)記；當(dāng)液面在熬制過(guò)程中因水分蒸發(fā)下降時(shí)，應(yīng)及時(shí)添加蒸饋水， W保持培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)濃度，并將熬制好的培養(yǎng)基溶液連燒杯放入盛有35°C熱水的容器中， 防止冷卻凝固，W備隨后使用；
[002。 花粉培養(yǎng)W10%薦糖、棚酸0. 1 %、0. 5%瓊脂為基本培養(yǎng)基，抑值6. 5,溫度25°C， 在凹玻片上用滴管滴上配好的培養(yǎng)基，然后用頭發(fā)絲條播花粉，播好后放入鋪有加濕濾紙 的消毒處理好的培養(yǎng)皿中，然后放于25°C的光暗培養(yǎng)箱內(nèi)采用光照培養(yǎng)和暗培養(yǎng)相結(jié)合的 方法培養(yǎng)?；ǚ叟囵B(yǎng)15min~25min后部分花粉開(kāi)始萌發(fā)，花粉萌發(fā)后花粉管長(zhǎng)度超過(guò)花 粉粒直徑，花粉管開(kāi)始快速生長(zhǎng)。培養(yǎng)3.化~4h后，W花粉管長(zhǎng)度大于花粉粒直徑為花粉 萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)隨機(jī)觀察3~5個(gè)視野，一個(gè)顯微鏡視野分布80~120 ?；ǚ哿?，每視野觀察花粉數(shù)30~80粒，統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率。
[002引（二）、實(shí)施處理：
[002引實(shí)驗(yàn)（1):^不同薦糖濃度（0,5%，10%，15%)+0.1%&803+0.5%瓊脂為培養(yǎng)基， 探討薦糖濃度變化對(duì)花粉萌發(fā)的影響，確定最佳薦糖濃度；
[0024] 實(shí)驗(yàn)似：^最佳薦糖濃度+不同蝴〇3濃度（0,0.1%，0.3%，0.5%)+0.5%瓊脂 為培養(yǎng)基，探討H3BO3因子對(duì)花粉萌發(fā)的影響，確定最佳H3BO3濃度；
[0025] 實(shí)驗(yàn)（3) :W最佳薦糖濃度+最佳H3BO3濃度+0. 5 %瓊脂+嗎I噪乙酸不同濃度（0， 0. 5,1，1. 5, 2mg?L1)為培養(yǎng)基，探