U/g ; -葡聚 糖酶5000IU/g ; a -淀粉酶3000IU/g。
[0021] (2)感官指標(biāo)：產(chǎn)品為黃色粉劑，色澤均一。
[0022] (3)理化指標(biāo)：制劑能通過(guò)3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)篩；水分：含水量低于8%。
[0023] (4)衛(wèi)生指標(biāo)：固體酶制劑每克細(xì)菌總數(shù)小于1萬(wàn)個(gè)。
[0024] 本發(fā)明所制備的固體復(fù)合酶制劑與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下的特點(diǎn)： (1)目前大多數(shù)生產(chǎn)廠家所采用的提取植物有效成分的工藝主要是常規(guī)水煮發(fā)法、乙 醇提取法以及微波提取等方法。再經(jīng)過(guò)脫脂、脫蛋白、正丁醇萃取，然后經(jīng)過(guò)多次濃縮，最后 結(jié)晶，得到粗晶體。但是，這種方法不僅消耗大了得有機(jī)溶劑，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且產(chǎn) 品的純度不高，其生物活性也受到一定的影響?？喙瞎麑?shí)中含有大量的纖維素、半纖維素、 抗性淀粉、果膠和樹(shù)膠等成分。酶具有催化底物水解的專(zhuān)一性，在其最佳的、溫度和加酶量 的條件下，破壁苦瓜細(xì)胞，使內(nèi)容物充分的釋放出來(lái)而不破壞細(xì)胞膜內(nèi)的活性物質(zhì)，雖 然，也有企業(yè)采用酶解工藝來(lái)增加提取效率，但常用的均為單一的液體劑型品種，加酶時(shí)要 分步加入，因而生產(chǎn)工藝復(fù)雜、周期，不便掌握及規(guī)?；a(chǎn)。而本發(fā)明所提供的提取植物 有效成分的復(fù)合酶制劑能夠?qū)⒛壳胺植教砑訂我幻阜N的酶解過(guò)程，提升為多酶種的復(fù)合型 酶制劑一步完成酶解過(guò)程，簡(jiǎn)化生產(chǎn)過(guò)程及周期，提高植物有效成分的回收率。
[0025] (2)本發(fā)明采用的植物提取復(fù)合酶的制備方法是由地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、 黑曲霉、綠色木霉按照一定比例經(jīng)過(guò)共生培養(yǎng)，浸提、濃縮后加膨化植物蛋白載體，經(jīng)低溫 噴霧制成。與單獨(dú)發(fā)酵生產(chǎn)各酶種，然后再?gòu)?fù)配相比，增加復(fù)合酶有效成分的回收率，簡(jiǎn)化 生產(chǎn)工藝，縮短了生產(chǎn)周期，降低了生產(chǎn)成本。
[0026] (3)發(fā)明采用的集酶液濃縮、低溫噴霧制粉為一體化的技術(shù)，提高了酶浸液的的濃 縮倍數(shù)，既減輕了后續(xù)干燥環(huán)節(jié)的負(fù)擔(dān)，大大提高了生產(chǎn)效率，又保證了終產(chǎn)品活力品質(zhì)穩(wěn) 定，使植物提取復(fù)合酶生產(chǎn)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。
[0027] (4)本發(fā)明產(chǎn)品的實(shí)施，將針對(duì)提取萌蘆科植物如苦瓜、南瓜、黃瓜類(lèi)原料的多糖、 皂甙等有效功能性成分，提高其提取效率。將木聚糖酶、纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、 a_淀粉酶合理搭配就可在極溫和的條件下分解構(gòu)成細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)的纖維素、半纖維 素和果膠質(zhì)，使細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生局部疏松、膨脹、崩潰等變化，從而增大了有 效成分的擴(kuò)散面積，減小了傳質(zhì)阻力，提高了有效成分的提取率，同時(shí)又可極大地降低 提取液的粘度，成倍提高提取液的濃縮或干燥效率，使提取液的澄清度等質(zhì)量指標(biāo)得到明 顯的提尚。
[0028]
【具體實(shí)施方式】
[0029] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。下述各實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而并 非對(duì)本發(fā)明的限制。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0030] 實(shí)施例1 制備植物提取復(fù)合酶制劑 (1)各菌株來(lái)源： 地衣芽抱桿菌 編號(hào)CGMCC1970 ; 枯草芽抱桿菌 編號(hào)ASL1229 ; 黑曲霉 供'_r，編號(hào)IFFI. 02439 ; 綠色木霉rricAot/eiwaKirit/e，編號(hào)CCTCCAF. 93252。
[0031] (2)斜面菌種培養(yǎng)： 地衣芽孢桿菌使用斜面培養(yǎng)基（g/L):牛肉膏5,蛋白胨10,酵母膏5,NaCl5,瓊脂30， 自來(lái)水配制，PH7. 5,在30°C條件下靜止培養(yǎng)24小時(shí)； 枯草芽孢桿菌使用斜面培養(yǎng)基（g/L):蛋白胨10,牛肉膏5,氯化鈉5,瓊脂20,pH值為 7. 2,在30°C條件下靜止培養(yǎng)24小時(shí)； 黑曲霉菌種使用斜面培養(yǎng)基（g/L): 土豆200,葡萄糖20,磷酸氫二鉀3,七水硫酸鎂 1. 5,pH自然，在0°C條件下靜止培養(yǎng)48小時(shí)； 綠色木霉使用斜面培養(yǎng)基（g/L):羧甲基纖維素鈉（CMC-Na)7. 5，蛋白胨5.0，吐 溫-80 2. 0mL，MgS04 ? 7H20 0? 3,CaCl2 0? 3,FeS04 ? 7H20 5. 0mg，MnS04 ?H20 1. 6mg， ZnS04 ? 7H20 1. 4mg，CoCl2 ? 6H20 2. 0mg，自然pH，在 30°C條件下靜止培養(yǎng) 72 小時(shí)； (3) 液體種子培養(yǎng)： 地衣芽孢桿菌搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):魔芋粉30,骨胨30,玉米漿5,（NH4)2S04 5，Na2HP04 4,KH2P04 0 . 3,MgCl20.6,CaCl2 3,FeS04 0 . 01，Na2C03 3,pH7.0,溫度 30°C，轉(zhuǎn)速 360r/min，培養(yǎng) 72h。
[0032] 枯草芽孢桿菌搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):牛肉膏5,蛋白胨10,氯化鈉5,pH值為 7. 2,溫度 30°C，轉(zhuǎn)速 140r/min，培養(yǎng) 24h; 黑曲霉搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):半纖維素15~20，NH4N034，酵母粉4，KCL0. 6，K2HP041. 5，F(xiàn)eS040 . 03,MgS04 ? 7H20 0? 6,CoCL2 0? 03,吐溫 1. 5,pH5. 5。溫度 30°C，轉(zhuǎn)速 250 轉(zhuǎn) / 分鐘， 培養(yǎng)60h; 綠色木霉搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):蛋白胨11. 0,硫酸銨13,葡萄糖6,KH2P04 10. 5,稻草粉13.4，。&(：120.8，]\%504.711 20 0.6，卩6504.71120 5,211504.71120 1.4 11^，(：〇(：12.611203.7 mg，MnS04.H20 1.6mg，吐溫-80 0. 3mL，接種斜面培養(yǎng)的孢子，28°C，150r/min，振蕩培 養(yǎng)72h左右； (4) 種子罐發(fā)酵： 種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L):黃豆餅粉10. 1、玉米淀粉16. 9、蛋白胨1. 1、葡萄糖2. 4、硫酸 銨8. 0、硫酸鎂0? 45、磷酸氫二鉀0? 45、氯化鈉4. 50，自然pH。
[0033]發(fā)酵罐內(nèi)溫度30°C，通風(fēng)量13m3/h，發(fā)酵罐壓0. 09Mpa，地衣芽孢桿菌接種量10 %、枯草芽孢桿菌接種量3 %、黑曲霉接種量6 %、綠色木霉接種量6 %，發(fā)酵48h。
[0034] (4)發(fā)酵罐發(fā)酵： 種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L):骨胨30,玉米漿5,（NH4) 2S04 5,g，稻草粉13. 4g，Na2HP04 4,H2P04 0? 3,MgCl2 0? 6,CaCl23,FeS04 0? 01，Na2C03 3,吐溫-80 0? 3mL，pH7. 0,消泡油 4， 自來(lái)水配制； 發(fā)酵罐內(nèi)溫度〇°C，通風(fēng)量10m3/h，發(fā)酵罐壓0. 09Mpa攪拌速率270r/min，接種量 10%，發(fā)酵 72h; (5)離心分離菌體細(xì)胞：發(fā)酵液經(jīng)管式離心機(jī)分離，收集濾液于儲(chǔ)罐。
[0035] (6)陶瓷膜超濾濃縮酶液：將儲(chǔ)罐中濾液進(jìn)行超濾膜濃縮，超濾壓力小于0.IMpa， 濃縮時(shí)間3小時(shí)/6噸濾液。
[0036] (7)添加載體：向濃縮酶液中加入膨化大豆顆粒作為載體，使其在濃縮酶液中的終 濃度達(dá)到10%，并于勻漿中充分?jǐn)嚢杌靹颍?(8)低溫噴霧干燥：將已加入載體的濃縮酶液經(jīng)過(guò)高速氣流濃縮低溫噴霧干燥機(jī)進(jìn)行 噴霧干燥制成固體復(fù)合酶產(chǎn)品。復(fù)合酶的有效成分收率90%以上。
[0037] 本發(fā)明制備的固體復(fù)合酶制劑產(chǎn)品的測(cè)定指標(biāo)如下： (1)產(chǎn)品酶活力木聚糖酶3000IU/g;纖維素酶2000IU/g;果膠酶20000IU/g; -葡聚 糖酶 5000IU/g;a-淀粉酶 3000IU/g。
[0038] (2)感官指標(biāo)：產(chǎn)品為黃色粉劑，色澤均一。
[0039] (3)理化指標(biāo)：制劑能通過(guò)3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)篩；水分：含水量低于8%。
[0040] (4)衛(wèi)生指標(biāo)：每克細(xì)菌總數(shù)小于1萬(wàn)個(gè)。
[0041] 實(shí)施例2 制備植物提取復(fù)合酶制劑 (1)各菌株來(lái)源： 地衣芽抱桿菌 編號(hào)CGMCC1970 ; 枯草芽抱桿菌 編號(hào)ASL1229 ; 黑曲霉 供'，編號(hào)IFFI. 02439; 綠色木霉rricAot/eiwaKirit/e，編號(hào)CCTCCAF. 93252。
[0042] (2)斜面菌種培養(yǎng)： 地衣芽孢桿菌使用斜面培養(yǎng)基（g/L):牛肉膏5,蛋白胨10,酵母膏5,NaCl5,瓊脂30， 自來(lái)水配制，PH7. 5,在28°C條件下靜止培養(yǎng)20小時(shí)； 枯草芽孢桿菌使用斜面培養(yǎng)基（g/L):蛋白胨10,牛肉膏5,氯化鈉5,瓊脂20,pH值為 7. 2,在28°C條件下靜止培養(yǎng)20小時(shí)； 黑曲霉菌種使用斜面培養(yǎng)基（g/L): 土豆200,葡萄糖20,磷酸氫二鉀3,七水硫酸鎂 1. 5,pH自然，在28°C條件下靜止培養(yǎng)20小時(shí)； 綠色木霉使用斜面培養(yǎng)基（g/L):羧甲基纖維素鈉（CMC-Na)7. 5，蛋白胨5.0，吐 溫-80 2. 0mL，MgS04 ? 7H20 0? 3,CaCl2 0? 3,FeS04 ? 7H20 5. 0mg，MnS04 ?H20 1. 6mg， ZnS04 ? 7H20 1. 4mg，CoCl2 ? 6H20 2. 0mg，自然pH，在 28°C條件下靜止培養(yǎng) 72 小時(shí)； (3)液體種子培養(yǎng)： 地衣芽孢桿菌搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):魔芋粉30,骨胨30,玉米漿5,（NH4)2S04 5，Na2HP04 4,KH2P04 0 . 3,MgCl20.6,CaCl2 3,FeS04 0 . 01，Na2C03 3,pH7.0,溫度 30°C，轉(zhuǎn)速 250r/min，培養(yǎng) 48h。
[0043] 枯草芽孢桿菌搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):牛肉膏5,蛋白胨10,氯化鈉5,pH值為 7. 2,溫度 30°C，轉(zhuǎn)速 140r/min，培養(yǎng) 24h; 黑曲霉搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):半纖維素15~20，NH4N032，酵母粉2，KCL0. 4，K2HP040 . 5，F(xiàn)eS040 . 01，MgS04 ? 7H20 0? 3,C〇CL20. 01，吐溫 0? 5,pH5. 5。溫度 28°C，轉(zhuǎn)速 180 轉(zhuǎn) / 分鐘， 培養(yǎng)48h; 綠色木霉搖瓶放大培養(yǎng)基（g/L):蛋白胨11. 0,硫酸銨13,葡萄糖6,KH2P04 10. 5,稻草粉13.4，。&(：120.8，]\%504.711 20 0.6，卩6504.71120 5,211504.71120 1.4 11^，(：〇(：12.611203.7 mg，MnS04.H20 1.6mg，吐溫-80 0. 3mL，接種斜面培養(yǎng)的孢子，28°C，150r/min，振蕩培 養(yǎng)72h左右； (4) 種子罐發(fā)酵： 種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L):黃豆餅粉10. 1、玉米淀粉16. 9、蛋白胨1. 1、葡萄糖2. 4、硫酸 銨8. 0、硫酸鎂0? 45、