一種源自煙草的香豆素化合物、其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于煙草化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從煙草中首次提取得到的香豆素化 合物。同時(shí)，本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草是世界上化學(xué)成分最為復(fù)雜的植物，次生代謝產(chǎn)物非常豐富，經(jīng)過幾十年的 研宄，人們目前從煙草中鑒定出來的單體化學(xué)物質(zhì)就超過3000多種，而且還有許多成分尚 未鑒定出來。煙草除主要用于卷煙抽吸用途外，還可從中提取多種有利用價(jià)值的化學(xué)成分， 從中發(fā)現(xiàn)有開發(fā)利用價(jià)值的先導(dǎo)性化合物。
[0003] 香豆素是一類自然界中廣泛存在的生物活性物質(zhì)。由于植物香豆素成分結(jié)構(gòu)類型 多，立體化學(xué)復(fù)雜，具有多種生物活性，國內(nèi)外對該領(lǐng)域的研宄十分活躍；無論是天然存在 的，還是人工合成得到的香豆素化合物，都引起了化學(xué)家的廣泛關(guān)注。有研宄證實(shí)，香豆素 化合物的藥理作用與化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，可進(jìn)一步研宄和開發(fā)更多的香豆素化合物，從中 尋找有效的先導(dǎo)化合物和活性基團(tuán)。本發(fā)明從煙草中分離得到了一種具有抗輪狀病毒活性 的香豆素化合物，該化合物至今尚未見到相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一方面在于提供了一種新的香豆素化合物，其分子式為c18h16o5，經(jīng)過 分析化學(xué)鑒定，具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0006] 根據(jù)有機(jī)化合物的IUPAC系統(tǒng)命名法，該化合物的命名為6-羥基-7-甲基-5-甲 氧基-3-(4' -甲氧基苯基）_香豆素。
[0007] 該化合物為淺黃色膠狀物，本發(fā)明人將其英文名命名為：6-117(11'(?7-7-11161:1171-5-methoxy-3- (4'-methoxypheny1) -coumarin，發(fā)明人將其中文名命名為"苯香豆素"。
[0008] 本發(fā)明的第二方面提供了上述第一方面所述的香豆素化合物的制備方法，該方法 包括以下步驟：
[0009] (1)浸膏提取：以煙草葉片為原料，將其粉碎或切成小段，并用第一溶劑浸泡并提 取所述煙草3~5次，每次24h~72h，將提取液合并、過濾并濃縮后得到所述煙草提取物浸 膏；其中所述第一溶劑是選自甲醇、乙醇或丙酮的有機(jī)溶劑與水的混合物，其中甲醇或乙醇 占該第一溶劑的80wt%~100wt%，丙酮占該第一溶劑的60wt%~90wt%，且第一溶劑： 煙草=2~4:1，重量比；
[0010] (2)硅膠柱層析：將上述煙草提取物浸膏用選自純甲醇、純乙醇或純丙酮的第二 溶劑溶解，且第二溶劑：浸膏=1. 5~3 :1，重量比，溶解后的煙草提取物浸膏與為其0. 8~ 1. 2重量倍的80~100目硅膠拌樣，將拌樣后的混合物再與為煙草提取物浸膏的2~4重量 倍的160~300目硅膠混合后干法裝柱，然后用體積比依次為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、 1:1和1:2的一系列氯仿-丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集其中用體積比為8:2的氯仿-丙酮 溶液洗脫時(shí)得到的洗脫液，稱為第一洗脫液。
[0011] (3)高壓液相色譜分離純化：將上述第一洗脫液通入高壓液相色譜進(jìn)行分離純 化，該高壓液相色譜采用21. 2mmX250mm，5ym的C18色譜柱，流動相為42wt%的甲醇水 溶液，流動相流速為20mL/min，紫外檢測器檢測波長為285nm，第一洗脫液液每次進(jìn)樣 200yL，收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為19. 6min時(shí)所對應(yīng)的洗脫液，稱為第二洗脫液， 該第二洗脫液脫除溶劑后即得所述香豆素化合物。
[0012] 其中所述高壓液相色譜是指使用時(shí)壓力為5-15MPa的反相制備液相色譜。
[0013] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括以下進(jìn)一步提純的步驟：將在所述高壓液相 色譜分離之后得到的所述香豆素類類化合物再次用純甲醇溶解，并以純甲醇為流動相，通 過凝膠柱進(jìn)行層析分離，提到進(jìn)一步提純的所述香豆素類化合物。
[0014] 本發(fā)明的第三方面提供了第一方面所述的香豆素類化合物在制備抗輪狀病毒藥 物中的用途。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明的香豆素化合物的核磁共振碳譜；
[0016] 圖2為本發(fā)明的香豆素化合物的核磁共振氫譜；
[0017] 圖3為本發(fā)明的香豆素化合物的主要-C)相關(guān)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本發(fā)明所制備的香豆素類化合物的結(jié)構(gòu)是通過以下方法測定出來的：本 發(fā)明化合物為淺黃色膠狀物；紫外光譜（溶劑為甲醇），A_(loge) 285 (3. 98)、 231 (4.22)nm、210 (4.43)nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vmx 3446、1722、1600、1548、1458、 1412、1282、1156、1063、874、790〇1^;高分辨質(zhì)譜（HRESMS)給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 335. 0899[M+Na] + (計(jì)算值335. 0895)。結(jié)合1H和13CNMR譜給出一個(gè)分子式C18H1605，不飽和 度為11。從1H和13CNMR譜（數(shù)據(jù)歸屬見表-1)信號可以看出化合物中有一個(gè)3, 5, 6, 7-四 取代香豆素母核（C-2~C-10)、一個(gè)對甲氧基苯基、一個(gè)甲氧基、一個(gè)甲基、一個(gè)酚羥基。根 據(jù)H-2'，6'和C-3,H-4和C-2'，6'的HMBC相關(guān)（圖-3)可證實(shí)對甲氧基苯基取代在香豆 素母核的3位。根據(jù)甲氧基氫和C-5的HMBC相關(guān)可證實(shí)甲氧基取代在C-5位，根據(jù)甲基氫 (H-1"）和C-6、C-7、C-8的HMBC相關(guān)可證實(shí)甲基取代在C-7位，根據(jù)酚羥基氫和C-5、C-6、 C-7的HMBC相關(guān)可證實(shí)酚羥基取代在C-6位。至此本化合物的結(jié)構(gòu)得以確定。
[0019]表-1.化合物的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)（C5D5N)
[0020]
[0021] 本發(fā)明化合物是首次被分離出來的，通過上述核磁共振和質(zhì)譜測定方法確定了 為香豆素化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。經(jīng)對抗輪狀病毒的實(shí)驗(yàn)，其TC5(I值為182. 8yg/ mL、IC5(I值為8. 84yg/mL，治療指數(shù)TI為20. 68 ;其治療指數(shù)超過對照病毒唑的治療指數(shù) 18. 90 ;化合物具有很好的抗輪狀病毒活性。以上結(jié)果揭示了本發(fā)明的化合物在制備抗輪狀 病毒藥物中有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單活性較好，可作為抗輪狀病毒藥物 研發(fā)的先導(dǎo)性化合物用于抗輪狀病毒藥物制劑研發(fā)。
[0022] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不以任何方式對本發(fā)明 加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來源的煙草均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，下面 以來源于云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司的煙草原料對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。除非另有說明， 本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] 煙草樣品來源于云南玉溪，品種為K326。將煙草取樣2. 0kg粉碎以70%的丙酮/ 水提取4次，每次提取54h，提取液合并，過濾，減壓濃縮成浸膏，得浸膏100g。浸膏用重量 150g的純甲醇溶解后用180g的80目粗硅膠拌樣，1. 0kg的160目硅膠裝柱進(jìn)行硅膠柱層 析，用體積配比1:0、20:1、9 :1、8:2、7:3、6:4、1:1和1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，其中8:2 洗脫洗脫液繼續(xù)用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以42%的甲醇水溶液為流動相， Zorbax SB-C18(21. 2X250mm, 5ym)制備柱為固定相，流動相流速為20mL/min，紫外檢測器 檢測波長為285nm，每次進(jìn)樣200yL，收集保留時(shí)間為19. 6min的色譜峰，多次累加后蒸干， 即得本發(fā)明所述的香豆素化合物。
[0026] 實(shí)施例2
[0027] 煙草樣品來源于云南大理，品種為云煙200,將煙草取樣3. 5kg切碎，以95%的乙 醇提取4次，每次提取48h，提取液合并，過濾，減壓濃縮成浸膏，得浸膏250g。浸膏用重量 比2. 0倍量的純甲醇溶解后用250g的80目粗硅膠拌樣，1. 2kg的200目硅膠裝柱進(jìn)行硅 膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9 :1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，用 薄層色譜（縮寫為TLC)監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配比為8:2的氯 仿-丙酮洗脫液用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以42%的甲醇為流動相，Zorb