一種異鴉膽子素b的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從抗痢鴉膽子的枝葉中分離制備異鴉膽子素B的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抗痢鴉膽子(Brucea antidysenterica Mill)是苦木科鴉膽子屬的一種樹，在埃塞俄比亞用于治癌。異鴉膽子素B是該樹木的主要特征化學成分，為針狀結(jié)晶，溶于乙醚、二氯甲烷等有機溶劑，熔點為243~246°C。
[0003]現(xiàn)代研宄表明，異鴉膽子素B具有多種生物活性，如殺蟲止痢、抗瘧、抗腫瘤、抗病毒等作用。對人體多種癌細胞有很強的抑制活性，LC5tl在100?10 μΜ。
[0004]通過文獻枷鎖，國內(nèi)尚未見從抗痢鴉膽子中制備異鴉膽子素B的工藝報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種異鴉膽子素B的制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
(1)以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界0)2進行萃取，以總?cè)軇w積4%的乙醇為夾帶劑，設(shè)置萃取溫度為40~50°C，待溫度穩(wěn)定后通入C02，流量為25~35L/h，并調(diào)節(jié)壓力到30~40MPa，進行萃取2~3h后，收集萃取物；
(2)萃取物濃縮后上硅膠柱，以體積比為50:3的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物；
(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，其兩相溶劑系統(tǒng)為氯仿-甲醇-水，上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，低溫干燥即得異鴉膽子素B。
[0007]步驟(2)中所述的硅膠目數(shù)為200~300目。
[0008]步驟(3)中所述的兩相溶劑的體積比為15:4:1。
[0009]步驟(3)中所述的高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為lOOOrpm，流動相流速為4~5mL/min。
[0010]步驟(3)中所述的紫外檢測波長為242nm。
[0011]步驟(3)中所述的低溫為0~5°C。
[0012]本發(fā)明的有益效果在于:采用超臨界流體提取，提取時間短、提取效率高，無毒、無味，廉價易得；采用硅膠柱層析富集純化，可除去多種雜質(zhì)，減輕了后面工序的工作量；采用高速逆流色譜分離效果好，產(chǎn)品純度高。
[0013]下面將結(jié)合【具體實施方式】進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
【具體實施方式】
[0014]實施例1: 以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界CO2進行萃取，以總?cè)軇w積4%的乙醇為夾帶劑，設(shè)置萃取溫度為40°C，待溫度穩(wěn)定后通入CO2，流量為25L/h，并調(diào)節(jié)壓力到30MPa，進行萃取2h后，收集萃取物；萃取物濃縮后上目數(shù)為200~300的硅膠柱，以體積比為50:3的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，以體積比為15:4:1的氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相流速為4mL/min，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長為242nm，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，于0°C下干燥即得異鴉膽子素B，含量為98.4%。
[0015]實施例2:
以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界CO2進行萃取，以總?cè)軇w積4%的乙醇為夾帶劑，設(shè)置萃取溫度為45°C，待溫度穩(wěn)定后通入CO2，流量為30L/h，并調(diào)節(jié)壓力到35MPa，進行萃取3h后，收集萃取物；萃取物濃縮后上目數(shù)為200~300的硅膠柱，以體積比為50:3的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，以體積比為15:4:1的氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相流速為4.5mL/min,流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長為242nm，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，于5°C下干燥即得異鴉膽子素B，含量為99.0%。
[0016]實施例3:
以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界CO2進行萃取，以總?cè)軇w積4%的乙醇為夾帶劑，設(shè)置萃取溫度為50°C，待溫度穩(wěn)定后通入CO2，流量為35L/h，并調(diào)節(jié)壓力到40MPa，進行萃取3h后，收集萃取物；萃取物濃縮后上目數(shù)為200~300的硅膠柱，以體積比為50:3的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，以體積比為15:4:1的氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相流速為5mL/min，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長為242nm，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，于5°C下干燥即得異鴉膽子素B，含量為98.1%。
【主權(quán)項】
1.一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界0)2進行萃取，以總?cè)軇w積4%的乙醇為夾帶劑，設(shè)置萃取溫度為40~50°C，待溫度穩(wěn)定后通入C02，流量為25~35L/h，并調(diào)節(jié)壓力到30~40MPa，進行萃取2~3h后，收集萃取物； (2)萃取物濃縮后上硅膠柱，以體積比為50:3的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物； (3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，其兩相溶劑系統(tǒng)為氯仿-甲醇-水，上相為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，低溫干燥即得異鴉膽子素B。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的硅膠目數(shù)為200~300目。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的兩相溶劑的體積比為15:4:1。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為lOOOrpm，流動相流速為4~5mL/min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的紫外檢測波長為242nm。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異鴉膽子素B的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的低溫為0~5°C。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種操作簡單、污染少的異鴉膽子素B的制備方法，工藝步驟為：（1）以抗痢鴉膽子的枝葉為原料，經(jīng)粉碎處理，采用超臨界CO2進行萃取，收集萃取物；（2）以硅膠為填料，氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥得粗提物；（3）采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的異鴉膽子素B，其兩相溶劑系統(tǒng)為氯仿-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動相，收集異鴉膽子素B組分，真空濃縮，干燥即得異鴉膽子素B。本發(fā)明制備的異鴉膽子素B，產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好。
【IPC分類】C07D493/10
【公開號】CN104961745
【申請?zhí)枴緾N201510270792
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年10月7日
【申請日】2015年5月26日