吉瑪烷型倍半萜衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種吉瑪烷型倍半萜衍生物及其制備方法與應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 流行性感冒病毒（influenza virus)引起的流行性感冒，是一種傳染性強(qiáng)、傳播速 度快的疾病，由于病毒易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行，每次都造成上百萬(wàn)人的死亡。 近年來(lái)，以Hl、H5、H7亞型引起的高致病力流感，不僅給禽類帶來(lái)滅頂之災(zāi)，更多次發(fā)生了 人染病致死的情況。該病因具有人群普遍易感性、高傳染性、發(fā)展迅速及后果嚴(yán)重等特點(diǎn)， 受到醫(yī)患的普遍關(guān)注。
[0003] 臨床上常用的抗流感病毒藥物主要有兩類，112離子通道阻滯劑（M2ion channel inhibitors)和神經(jīng)氨酸酶抑制劑（Neuraminidae inhibitor)。1\12離子通道阻滯劑（如金 剛烷胺）主要對(duì)甲型流感病毒有效，對(duì)乙型流感病毒幾乎無(wú)效，且副作用大。神經(jīng)氨酸酶抑 制劑（如奧司他韋，即達(dá)菲）雖然對(duì)甲型和乙型流感病毒都有效，但是易產(chǎn)生耐藥性。有報(bào) 道稱日本接受達(dá)菲治療的50名H3N2流感兒童中有18%出現(xiàn)耐藥變異；在越南，一個(gè)H5N1 感染的女孩體內(nèi)發(fā)現(xiàn)對(duì)大劑量達(dá)菲產(chǎn)生耐藥抵抗。因現(xiàn)有抗流感病毒藥物存在作用單一， 毒副作用大，易產(chǎn)生耐藥性等問(wèn)題，已無(wú)法滿足臨床需要，急需開(kāi)發(fā)一種更為安全有效的抗 流感病毒藥物。
[0004] 吉瑪烷型倍半萜為菊科天名精屬和旋復(fù)花屬植物中特征性天然小分子，具有高度 氧化、手性中心多、結(jié)構(gòu)新穎的特點(diǎn)?；钚匝绣嘲l(fā)現(xiàn)，吉瑪烷型倍半萜具有細(xì)胞毒活性和抗 炎的活性，但其抑制流感病毒方面的活性未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)新的具有抗流感病毒 活性的結(jié)構(gòu)類型，該類型化合物具有很強(qiáng)的抑制流感病毒的活性，且抗腫瘤活性也較已有 同類（吉瑪烷型倍半萜）化合物有顯著提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在提供一種新的吉瑪烷型倍半萜衍生物，其抑制流感病毒的活性更強(qiáng)， 是對(duì)現(xiàn)有抗流感藥物存在不足的很好補(bǔ)充。
[0006] 本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)通式為I的化合物，該化合物為吉瑪烷型倍半萜衍生物或其生 理上可接受的鹽，
[0007]
[0008] 其中札和R2為氫基、甲基、含有1~8個(gè)碳原子的?；械囊环N。
[0009] 發(fā)明人在對(duì)天名精屬植物成分的研宄過(guò)程中，驚喜地發(fā)現(xiàn)了結(jié)構(gòu)通式為I的化合 物，該化合物在抗流感病毒方面表現(xiàn)出了良好的活性，實(shí)驗(yàn)表明，該化合物抗H5N1病毒的 效果較蓮花清瘟膠囊有顯著提高，與公認(rèn)效果最強(qiáng)的達(dá)菲相近。此外，該化合物還具有良好 的抗腫瘤活性、特別是對(duì)宮頸癌、胃癌的效果更為顯著。該化合物的結(jié)構(gòu)及其在抗腫瘤及抗 流感病毒方面的活性未見(jiàn)任何報(bào)道。
[0010] 臨床數(shù)據(jù)顯示，達(dá)菲的耐藥性問(wèn)題日趨明顯，但目前缺乏同樣具有良好抗病毒活 性的藥物可替代它，而本發(fā)明所述化合物的抗病毒活性雖不及達(dá)菲強(qiáng)，但已與其相近，在沒(méi) 有更好的替代產(chǎn)品的情況下，是對(duì)其不足的良好補(bǔ)充，是達(dá)菲耐藥人群的福音。
[0011] 所述流感病毒特別是指甲型流感病毒，包括H5N1、H1N1、H1N2、H2N2、H3N2、H3N8、 H5N2、H5N3、H5N8、H5N9、H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N7、H7N9、H9N2 和 H10N7 等亞型病毒。甲 型流感病毒中具體亞型（HnNn)的基因組高度同源（基因序列中有90%以上是相同的），本 發(fā)明化合物對(duì)3種不同的流感病毒（H5N1、H3N2、H1N1)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均顯示出較強(qiáng)的活 性，由此可推斷對(duì)其他HnNn也有效果。
[0012] 所述的生理上可接受的鹽，主要是指吉瑪烷型倍半萜衍生物的無(wú)機(jī)酸鹽或有機(jī)酸 鹽，其中的無(wú)機(jī)酸為鹽酸、硫酸、磷酸、氫溴酸或氫碘酸；有機(jī)酸為酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙 酸、乙二酸、丁酸、草酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、檸檬酸、天冬氨酸、苯苯磺酸、樟腦 酸、樟腦磺酸、二葡糖酸、環(huán)戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸、 庚酸、己酸、延胡索酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、煙酸、2-萘磺酸、撲酸、果膠酯 酸、3-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、硫代氰酸、對(duì)-甲苯磺酸鹽和十一 烷酸鹽等，優(yōu)選酒石酸、檸檬酸、乙二酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、檸檬酸、苯磺酸。成鹽后既不影響 藥效，又可進(jìn)一步提高其溶解性；進(jìn)一步優(yōu)選為鹽酸鹽或馬來(lái)酸鹽。
[0013] 本發(fā)明化合物所述的札和R 2優(yōu)選為含有3~5個(gè)碳原子的酰基。所述的R i進(jìn)一 步優(yōu)選為：3-甲基丁酰基、當(dāng)歸酰基或異丁?；?；R2進(jìn)一步優(yōu)選為：3-甲基丁酰基、2-甲基 丁?；?、異丁?；虍?dāng)歸酰基。此時(shí)，本發(fā)明所述的化合物分別為：
[0014]
[0015] 金挖耳內(nèi)醋 S(Cardivins S)、金挖耳內(nèi)醋 T(Cardivins T)、
[0016]
[0019] 金挖耳內(nèi)醋 W(Cardivins W)、金挖耳內(nèi)醋 X(Cardivins X)
[0020] 上述金挖耳內(nèi)酯S-X的命名是根據(jù)文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道的同類化合物的順序，文獻(xiàn)上只 有金挖耳內(nèi)酯A-D，該金挖耳內(nèi)酯A-D的結(jié)構(gòu)及功效與本發(fā)明所述化合物截然不同。
[0021] 上述化合物的化學(xué)名稱分別為：
[0022] 金挖耳內(nèi)酯S:4f3,8a-二羥基-5β-3-甲基丁酰氧基-9β_3-甲基丁酰氧 基-3-酮-吉瑪烷_(kāi)6 a，11 a，12-內(nèi)酯；
[0023] 金挖耳內(nèi)酯Τ:4β，8α-二羥基-5β-2-甲基丁酰氧基-9β_3-甲基丁酰氧 基-3-酮-吉瑪烷_(kāi)6 a，11 a，12-內(nèi)酯；
[0024] 金挖耳內(nèi)酯U :4β, 8a -二羥基-5 β -異丁酰氧基-9 β-3-甲基丁酰氧 基-3-酮-吉瑪烷_(kāi)6 a，11 a，12-內(nèi)酯；
[0025] 金挖耳內(nèi)酯V :4 β，8 a -二羥基-5 β -異丁酰氧基-9 β -當(dāng)歸酰氧基-3-酮-吉 瑪烷-6 a，Ila，12-內(nèi)酯；
[0026] 金挖耳內(nèi)酯W :4 β，8 a -二羥基-5 β -異丁酰氧基-9 β -異丁酰氧基-3-酮-吉 瑪烷-6 a，Ila，12-內(nèi)酯；
[0027] 金挖耳內(nèi)酯X :4 β，8 a -二羥基-5 β -當(dāng)歸酰氧基-9 β -當(dāng)歸酰氧基-3-酮-吉 瑪烷-6 a，Ila，12-內(nèi)酯。
[0028] 在一優(yōu)選實(shí)施例中所述的&和R2均為異丁?；?，即上述的金挖耳內(nèi)酯W。當(dāng)1^和 馬均為異丁?；鶗r(shí)，其抗流感病毒的活性更強(qiáng)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，1. 17 μ g/mL的濃度便顯示出良 好的抗流感病毒活性，是同等抗病毒結(jié)果蓮花清瘟膠囊用量的1/32,當(dāng)濃度為2. 34 μ g/mL 時(shí)，抗流感病毒效果與達(dá)菲相當(dāng)。
[0029] 本發(fā)明所述化合物易溶于甲醇、乙醇，可溶于氯仿、二氯甲烷，其紫外吸收波長(zhǎng)多 在195-215nm之間，個(gè)別化合物在260nm左右（如金挖耳內(nèi)酯U)。本發(fā)明所述結(jié)構(gòu)通式為 I的化合物除上述化合物外，還包括以下化合物，詳見(jiàn)表1 :
[0030] 表1其他吉瑪烷型倍半萜衍生物舉例
[0031]
[0032]
[0033] 實(shí)驗(yàn)證實(shí)了本發(fā)明化合物中的6個(gè)化合物均具有抗病毒活性，而它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上的 區(qū)別在于部分側(cè)鏈不同，由此，可以推斷抗流感病毒活性主要與母核結(jié)構(gòu)有關(guān)，故推斷通式 (I)化合物均具有抗病毒活性。
[0034] 本發(fā)明化合物較已有同類化合物的溶解性有所改善，這不但降低了其制藥難度， 更有助于提高其生物利用度，從而在保證療效的前提下可減少服用/使用量，減小毒副作 用。
[0035] 本發(fā)明的目的還在于提供通式I化合物的制備方法，該方法為：用有機(jī)溶劑提取 天名精屬植物的花、根、莖葉或全草，提取物用水分散后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分， 回收溶劑，得到的萃取物經(jīng)過(guò)柱層析后得到通式I化合物。
[0036] 所述的天名精屬植物包括金挖耳、大花金挖耳、暗花金挖耳、小花金挖耳、毛暗花 金挖耳、煙管頭草、天名精、貴州天名精、高原天名精等。本發(fā)明優(yōu)選以金挖耳為提取原料。 藥用部位優(yōu)選為全草。
[0037] 上述的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙醚及乙酸乙酯中的一種，優(yōu)選甲醇、乙醇 或丙酮?？紤]到安全性和成本問(wèn)題等因素，進(jìn)一步優(yōu)選為濃度50-95%乙醇，最優(yōu)選為濃度 90-95%乙醇。提取方法為冷浸或熱回流提取法。
[0038] 上述制備方法進(jìn)一步為：用濃度為50-95%的低級(jí)醇提取天名精屬植物的花、根、 莖葉或全草，提取物用水分散后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收乙酸 乙酯，得到的萃取物過(guò)層析柱分離得到通式I化合物，該通式I化合物再經(jīng)過(guò)制備液相色 譜及半制備液相色譜可得到高純度單體化合物，所述的高純度是指純度不低于98%。
[0039] 所述的低級(jí)醇包括甲醇和乙醇。所述的制備液相色譜（pr印HPLC)，如，色譜柱 Daisogel-C18-IOOA (10 μ m ;250 X 30mm ;20mL/min)，流動(dòng)相為 55 ~65% 的 CH3OH,優(yōu)選流動(dòng) 相為 60% 的 CH3OH ;半制備液相色譜（semi-prepHPLC)，如 YMC-Pack ODS-A column (5 μ m ; 250X IOmm ;2mL/min)，以 60% -90% (0-35min)的 CH3OH-H2O 為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。
[0040] 所述萃取的步驟中，提取物加4-6倍量的水進(jìn)行分散，水相與有機(jī)相的體積比為 (1:3)~（3:1)，優(yōu)選為1:1;萃取以兩層均澄清為終點(diǎn)，萃取次數(shù)為1~5次。溶劑回收方 法為本領(lǐng)域常規(guī)方法。
[0041] 所述得到的通式（I)化合物為有效部位，該有效部位中約含有通式（I)化合物 60 ~70% 〇
[0042] 上述的柱層析包括：所述萃取物首先采用硅膠柱層析分離，用二氯甲烷-甲醇 (200:1，60:1，30:1，15:1)進(jìn)行梯度洗脫，收集15:1部分，回收溶劑至干，再采用凝膠柱層 析（如，S印hadex LH-20柱色譜）進(jìn)行純化，以甲醇、二氯甲烷-甲醇（1:1)或丙酮為洗脫 劑洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，得到通式（I)化合物；優(yōu)選以甲醇為洗脫劑。
[0043] 上述以二氯甲烷-甲醇（200:1，60:1，30:1，15:1)梯度洗脫的環(huán)節(jié)，還可以采用石 油醚-丙酮（50:1，25:1，10:1，5:1，2:1)進(jìn)行梯度洗脫，收集5 :1的部分，凝膠柱純化的方 法不變。