一種富鍶發(fā)菜細(xì)胞及其培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品生物富集加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富鍶發(fā)菜細(xì)胞及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鍶是人體組織進(jìn)行正常生命活動所需的微量元素之一。鍶對人體的功能主要是與 骨骼的形成密切相關(guān)，是人體骨骼及牙齒的正常組成部分。它與血管的功能及構(gòu)造有關(guān)系， 鍶在腸內(nèi)與鈉競爭吸收部位，可減少人體對鈉的吸收，增加鈉的排泄。體內(nèi)鈉過多，易引起 高血壓、心血管疾病，而鍶卻能減少人體對鈉的吸收，有預(yù)防疾病的作用。
[0003] 發(fā)菜，又稱發(fā)狀念珠藻，因其色黑而細(xì)長，如人的頭發(fā)而得名，且發(fā)菜與"發(fā)財(cái)"諧 音，千百年來深受人們的喜愛，發(fā)菜營養(yǎng)價(jià)值豐富，每l〇〇g天然發(fā)菜中含蛋白質(zhì)22. 8g，是 雞蛋的1. 5倍，脂肪含量低，富含鈣、鐵、碘、鎂、鋅、硒、錳等微量元素。近年來，由于發(fā)菜過 度的采收已經(jīng)帶來了嚴(yán)重的環(huán)境問題，給生態(tài)環(huán)境和社會穩(wěn)定造成了極大的危害。目前，從 發(fā)菜藻體中分離發(fā)菜細(xì)胞進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)逐漸受到人們的重視，發(fā)菜細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是從 發(fā)菜藻體中分離純化出具有旺盛分裂能力的發(fā)菜細(xì)胞，通過液體懸浮培養(yǎng)使發(fā)菜細(xì)胞大量 繁殖，通過再加工處理，實(shí)現(xiàn)發(fā)菜細(xì)胞工廠化生產(chǎn)，培養(yǎng)過程中發(fā)菜細(xì)胞的生長速率是野生 發(fā)菜生長速率的30倍，實(shí)現(xiàn)了發(fā)菜資源的快速生長繁殖。
[0004] 鍶在發(fā)菜細(xì)胞中有兩種存在形態(tài)：其一是鍶的離子態(tài)形式，其二是與有機(jī)物結(jié)合 的有機(jī)鍶形式。離子態(tài)鍶能夠溶解于水，被吸收到細(xì)胞內(nèi)，其中一部分與蛋白質(zhì)結(jié)合進(jìn)一步 轉(zhuǎn)化成有機(jī)鍶，這是發(fā)菜細(xì)胞富集有機(jī)鍶的前提。而溶于水中的離子態(tài)鍶，在生產(chǎn)過程中特 別容易流失，導(dǎo)致利用率不高，經(jīng)濟(jì)效益不明顯。如果長時(shí)間攝食高含量離子態(tài)鍶，不僅造 成浪費(fèi)，還會出現(xiàn)鍶中毒現(xiàn)象；相反，有機(jī)鍶毒性低，生物活性高，易被人和動物吸收利用， 是安全高效的鍶制劑。富集有機(jī)鍶發(fā)菜細(xì)胞有生產(chǎn)利用率高、食用安全的特點(diǎn)，有機(jī)鍶發(fā)菜 細(xì)胞可用于因缺鍶而引起的多種疾病。因此，利用發(fā)菜細(xì)胞作為載體進(jìn)行生物富集和轉(zhuǎn)化 無機(jī)鍶為有機(jī)鍶是目前具有發(fā)展前景的途徑。
[0005] 中國專利CN103976411A公開了一種發(fā)菜產(chǎn)品的制造方法，通過在培養(yǎng)基中加入 土壤提取液和鍶溶液的方式，促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞對鍶的吸收，同時(shí)起到了防止心血管病，但是該 公開的發(fā)菜產(chǎn)品的制備方法培養(yǎng)的發(fā)菜細(xì)胞中鍶含量仍然較低，如何通過調(diào)整培養(yǎng)基的組 成成分，提高發(fā)菜細(xì)胞的鍶含量，對鍶的富集和發(fā)菜細(xì)胞的開發(fā)利用具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的之一在于提供一種生物量高、鍶含量高 的發(fā)菜細(xì)胞。
[0007] 同時(shí)，本發(fā)明還在于提供一種富鍶發(fā)菜細(xì)胞的培養(yǎng)方法。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 一種富鍶發(fā)菜細(xì)胞，將發(fā)菜細(xì)胞置于富鍶培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得，所述富鍶培養(yǎng)基為將 SrCl2添加至基本培養(yǎng)基中混合制得，SrCl 2的濃度為0. 5~4mg/L ;其中每lOOOmL基本培養(yǎng) 基主要由以下質(zhì)量的原料配制而成：NaN03 2 50mg，MgS04 ? 7H20 75mg，CaCl2 ? 2H20 36mg， H3B04 0? 286mg，MnCl2 ? 4H20 0? 18mg，ZnS04 ? 7H20 0? 02mg，CuS04 ? 5H20 0? 08mg，NaMo04 ? 2H20 0? 04mg，CoC12? 6H20 0? OOlmg，EDTA-Na2 (乙二酸四乙酸二鈉）0? lmg，F(xiàn)eS04 ? 7H20 0? 48mg， 檸檬酸 0.06mg，Na2Si03 58mg，K2HP04 40mg，余量為水。
[0009] 所述富鍶培養(yǎng)基中SrClJ^濃度與Na 2Si03的濃度比為（1~8) : 116。
[0010] 上述富鍶發(fā)菜細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括以下操作： 1) 將干發(fā)菜浸泡于基本培養(yǎng)基，均漿后得到發(fā)菜細(xì)胞接種液； 2) 取步驟1)制備的發(fā)菜細(xì)胞接種液在固體培養(yǎng)基上劃線接種，純化培養(yǎng)得到發(fā)菜細(xì)胞 培養(yǎng)物，從中選出純化的單藻落，備用； 3) 取步驟2)中純化的單藻落置于基本培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，得到發(fā)菜細(xì)胞； 4) 將步驟3)制備的發(fā)菜細(xì)胞接種在富鍶發(fā)菜培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后靜置過濾分離 出發(fā)菜細(xì)胞，即得所述的富鍶發(fā)菜細(xì)胞； 其中固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基中加入瓊脂制備而得。
[0011] 所述固體培養(yǎng)中基本培養(yǎng)基和瓊脂的質(zhì)量比為100:1. 7。
[0012] 步驟1)中干發(fā)菜浸泡于基本培養(yǎng)基前進(jìn)行預(yù)處理，具體方法為：將干發(fā)菜用蒸餾 水清洗干凈晾干后消毒，再用水沖洗干凈。
[0013] 所述消毒為采用70%~75%的酒精消毒0. 5~1. Omin。
[0014] 步驟1)中發(fā)菜在基本培養(yǎng)基中浸泡時(shí)間為8~llh。
[0015] 步驟3)中擴(kuò)大培養(yǎng)至對數(shù)生長期即得發(fā)菜細(xì)胞。
[0016] 步驟4)中所述培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：溫度為25°C;光照周期為12h光照12h黑暗， 光照強(qiáng)度為2000Lux;培養(yǎng)時(shí)間為15~20天。
[0017] 上述富鍶發(fā)菜細(xì)胞的培養(yǎng)方法，還包括將步驟4)中分離出的發(fā)菜細(xì)胞用水洗滌后 冷凍干燥，冷凍干燥過程中的捕水倉溫度為-50~_55°C，時(shí)間為12~20h，即得所述的富鍶發(fā) 菜細(xì)胞產(chǎn)品。
[0018] 所述基本培養(yǎng)基由包括以下操作步驟的方法制備而得： I :原料預(yù)溶解： a:取CaCl2、MgS04 ? 7H20,用水溶解，得到溶液A ; b :取 NaMo04 CHW'ZnSC^ .fflW'EDTA-NarFeSC^ .71120、〇1504.5H20、 C〇Cl2 ? 6H20、檸檬酸，用水溶解，得到溶液B ; c :取K2HP04 ? 3H20,用水溶解，得到溶液C ; d :取Na2Si03 ? 9H20,用水溶解，得到溶液D ; II :將溶液A和溶液B混合后滅菌得到溶液E ;將溶液C和溶液D混合后，加入NaN03， 滅菌得溶液F; III :將溶液E和溶液F混合，即得所述的基本培養(yǎng)基。
[0019] 所述溶液B 4°C冷藏保存?zhèn)溆谩?br>[0020] 所述溶液A、C、D常溫保存?zhèn)溆谩?br>[0021] 步驟II中所述滅菌為濕熱法滅菌，溫度為121°C，時(shí)間為20min。
[0022] 所述富鍶培養(yǎng)基由以下方法制備而得：取SrCl2用水溶解后，得到SrCl 2母液，將 31~(：12母液滅菌后加入基本培養(yǎng)基中，即得所述的富鍶發(fā)菜細(xì)胞培養(yǎng)基。調(diào)整富鍶發(fā)菜細(xì)胞 培養(yǎng)基的pH為7. 5。
[0023] 有益效果 本發(fā)明富鍶發(fā)菜細(xì)胞，將發(fā)菜細(xì)胞置于富鍶培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得，富鍶培養(yǎng)基中加入氯 化鍶，并加入FeS04 ? 7H20、Na2Si03等物質(zhì)，共同作用，促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞對鍶的吸收，發(fā)菜細(xì)胞 從培養(yǎng)基中吸收的無機(jī)鍶通過細(xì)胞轉(zhuǎn)化為有機(jī)鍶，從而提高了發(fā)菜細(xì)胞中鍶含量，同時(shí)提 高發(fā)菜細(xì)胞中的生物量。
[0024] 本發(fā)明富鍶發(fā)菜細(xì)胞的制備方法，采用將發(fā)菜浸泡于基本培養(yǎng)液中提取接種獲得 純化的發(fā)菜細(xì)胞單藻落，并通過基本培養(yǎng)基的擴(kuò)大培養(yǎng)獲得發(fā)菜細(xì)胞，將發(fā)菜細(xì)胞置于富 鍶培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得富鍶發(fā)菜細(xì)胞，提高了發(fā)菜細(xì)胞對培養(yǎng)基中無機(jī)鍶的吸收，進(jìn)而提高 了發(fā)菜細(xì)胞中鍶含量，同時(shí)提高發(fā)菜細(xì)胞中的生物量。本發(fā)明制備方法，操作簡便，過程易 于控制，適于工業(yè)化推廣應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限 制。
[0026] 實(shí)施例1 本實(shí)施例富鍶發(fā)菜細(xì)胞為將發(fā)菜細(xì)胞在富鍶培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得，其中富鍶培養(yǎng)基為將 SrCl2添加至基本培養(yǎng)基中混合制得，SrCl 2的濃度為2mg/L ;其中每1000mL基本培養(yǎng)基主 要由以下質(zhì)量的原料配制而成：NaN03 250mg，MgS04 ? 7H20 75mg，CaCl2 ? 2H20 36mg，H3B04 0? 286mg，MnCl2 ? 4H20 0? 18mg，ZnS04 ? 7H20 0? 02mg，CuS04? 5H20 0? 08mg，NaMo04 ? 2H20 0? 04mg，CoC12? 6H20 0? OOlmg，EDTA-Na2 (乙二酸四乙酸二鈉）0? lmg，F(xiàn)eS04 ? 7H20 0? 48mg， 梓樣酸 〇? 〇6mg，Na2Si03 58mg，K2HP04 40mg。