甲酸裂解酶A(pflA)、丙酮酸甲酸裂解酶B(pflB)、丙酮酸甲酸裂解酶 C(pflC)和丙酮酸甲酸裂解酶D(pflD)。
[0078] 在一個(gè)實(shí)施方案中,改性的大腸桿菌包括導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物甲酸的基因的刪除,所述 基因?yàn)楸峒姿崃呀饷窧(pflB)。
[0079] 在一些實(shí)施方案中,在改性的大腸桿菌中,導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物的一種或更多種基因的 基礎(chǔ)水平表達(dá)可以被再次引入。
[0080] 在一個(gè)實(shí)施方案中,在改性的大腸桿菌菌株中,乙酸激酶(ack)的基礎(chǔ)水平表達(dá) 被再次引入。
[0081] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供改性的大腸桿菌菌株,其包括丙酮酸脫氫酶操縱 子(PDH)的啟動(dòng)子被gapA基因的啟動(dòng)子替代、導(dǎo)致為乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸的競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 的基因的刪除的突變和乙酸激酶的基礎(chǔ)水平表達(dá)的再次引入。
[0082] 在一些實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種獲得改性的細(xì)菌菌株的方法,所述改性的細(xì) 菌菌株可以對(duì)己糖和戊糖兩者進(jìn)行發(fā)酵以增強(qiáng)生物醇的制造。
[0083] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種獲得改性的大腸桿菌菌株的方法,其中所述 改性的大腸桿菌菌株能夠?qū)Π谀举|(zhì)纖維素生物質(zhì)中的己糖和戊糖進(jìn)行發(fā)酵以增強(qiáng)生 物醇制造。
[0084] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌的方法包括用可以在厭氧 條件下以高水平表達(dá)的基因的啟動(dòng)子替代改性的大腸桿菌菌株中的操縱子的啟動(dòng)子。
[0085] 在一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括用可以在厭氧條件 下以高水平表達(dá)的基因的啟動(dòng)替代操縱子的啟動(dòng)子。
[0086] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括替代丙酮酸脫氫酶 操縱子(PDH)的啟動(dòng)子。
[0087] 在一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括用可以在厭氧條件 下以高水平表達(dá)的啟動(dòng)子替代大腸桿菌中的I3DH的啟動(dòng)子,其中替代TOH啟動(dòng)子的啟動(dòng)子 可以為選自但不限于frdA、ldhA、pflB、adhE和gapA中的至少一種。
[0088] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括用gapA啟動(dòng)子替 代I3DH的啟動(dòng)子。
[0089] 在一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 的基因,所述競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物為乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸。
[0090] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 乳酸的基因,所述基因?yàn)槿樗崦摎涿福↖dhA)。
[0091] 在一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 乙酸的基因,所述基因可以選自磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶(Pta)和乙酸激酶(ack)。
[0092] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 乙酸的基因,所述基因?yàn)橐宜峒っ福╝ck)。乙酸激酶(ack)基因可以為乙酸激酶A(ackA) 或乙酸激酶B(ackB)。
[0093] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 琥泊酸的基因,所述基因可以選自延胡索酸還原酶A(frdA)、延胡索酸還原酶B(frdB)、延 胡索酸還原酶C(frdC)、延胡索酸還原酶D(frdD)、琥珀酰輔酶A合成酶和異檸檬酸裂解酶。 [0094] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 琥泊酸的基因,所述基因?yàn)檠雍魉徇€原酶A(frdA)。
[0095] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 甲酸的基因,所述基因可以選自丙酮酸甲酸裂解酶A(pflA)、丙酮酸甲酸裂解酶B(pflB)、 丙酮酸甲酸裂解酶C(pflC)和丙酮酸甲酸裂解酶D(pflD)。
[0096] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括刪除導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 甲酸的基因,所述基因?yàn)楸峒姿崃呀饷窧(pflB)。
[0097] 在一些實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括再次引入競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物 的一種或更多種基因的基礎(chǔ)水平表達(dá)。
[0098] 在一個(gè)實(shí)施方案中,用于獲得改性的大腸桿菌菌株的方法包括再次引入乙酸激酶 (ack)的基礎(chǔ)水平表達(dá)。
[0099] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種獲得改性的大腸桿菌菌株的方法,其中所述 方法包括以下步驟:
[0100] a.用在厭氧條件下以高水平表達(dá)的基因的啟動(dòng)子替代丙酮酸脫氫酶操縱子 O3DH)的啟動(dòng)子;
[0101] b.通過刪除導(dǎo)致為乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸的競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物的基因引入突變;
[0102] c.再次引入編碼乙酸激酶的基因的基礎(chǔ)水平表達(dá)。
[0103] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種獲得改性的大腸桿菌菌株的方法,其中所述 方法包括以下步驟:
[0104] a.用選自frdA、ldhA、pflB、adhE和gapA的基因的啟動(dòng)子替代丙酮酸脫氫酶操縱 子(PDH)的啟動(dòng)子;
[0105] b.通過刪除導(dǎo)致為乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸的競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物的基因引入突變;
[0106] c.再次引入編碼乙酸激酶的基因的基礎(chǔ)水平表達(dá)。
[0107] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種獲得改性的大腸桿菌菌株的方法,其中所 述方法包括以下步驟:
[0108] a.用gapA基因的啟動(dòng)子替代丙酮酸脫氫酶操縱子(PDH)的啟動(dòng)子;
[0109] b.通過刪除導(dǎo)致為乳酸、琥珀酸、乙酸和甲酸的競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)物的基因引入突變;
[0110] C.再次引入編碼乙酸激酶的基因的基礎(chǔ)水平表達(dá)。
[0111] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種利用改性的大腸桿菌菌株對(duì)己糖和/或戊糖 進(jìn)行發(fā)酵以制造生物醇的方法。
[0112] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種對(duì)己糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中己糖可以選自 葡萄糖、半乳糖、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、古羅糖、艾杜糖和塔羅糖。在一個(gè)實(shí)施方案中,本 發(fā)明提供一種對(duì)己糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中所述己糖可以是葡萄糖和/或半乳糖。在一個(gè) 實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種對(duì)己糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中所述己糖是葡萄糖。
[0113] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種對(duì)戊糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中戊糖可以選自 木糖、阿拉伯糖、核糖、來蘇糖、核酮糖和木酮糖。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種對(duì)戊 糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中所述戊糖可以是木糖和/或阿拉伯糖。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明 提供一種對(duì)戊糖進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中所述戊糖是木糖。
[0114] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種通過利用改性的細(xì)菌菌株對(duì)包含己糖和戊糖 的木質(zhì)纖維素生物質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵的方法。
[0115] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中,通過利用改性的細(xì)菌菌株對(duì)包含在木質(zhì)纖維素生物 質(zhì)中的己糖和戊糖進(jìn)行發(fā)酵以制造生物醇的方法在需氧、微需氧和/或厭氧條件下實(shí)施。
[0116] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,通過利用改性的細(xì)菌菌株對(duì)包含在木質(zhì)纖維素生物 質(zhì)中的己糖和戊糖進(jìn)行發(fā)酵的方法在微需氧和/或厭氧條件下實(shí)施。
[0117] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,通過利用改性的細(xì)菌菌株對(duì)包含在木質(zhì)纖維素生物 質(zhì)中的己糖和戊糖進(jìn)行發(fā)酵的方法在微需氧條件下實(shí)施。
[0118] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種利用改性的大腸桿菌菌株對(duì)木質(zhì)纖維素生物 質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵的方法,其中所述方法包括以下步驟:
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