中，加入DCM(二氯甲烷）溶脹 半小時，然后抽掉DCM，加入序列中第一個Fmoc保護的氨基酸lOmmol，20mmol的DIEA(二 異丙基乙胺），適量的DMF(二甲基甲酰胺）、DCM溶液(適量是指以可使樹脂充分鼓動起來 為宜)，用氮氣鼓泡反應(yīng)60min。然后加入約50_〇1當(dāng)量甲醇，反應(yīng)半小時，抽掉反應(yīng)液，用 DMF、甲醇洗凈。
[0025] (3)加入適量哌啶去除Fmoc(9-芴甲氧羰基）保護基，洗凈，茚三酮檢測。
[0026] (4)往反應(yīng)器中加入序列中第二個氨基酸(也為20mmol)，20mmolHBTU(苯并三氮 唑-N，N，N'，N' -四甲基脲六氟磷酸鹽)及DIEA，氮氣鼓泡反應(yīng)半小時，抽掉液體，用DMF，甲 醇洗凈，茚三酮檢測。
[0027] (5)重復(fù)依步驟3、4的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液體，用DMF洗凈，茚三酮 檢測。
[0028] (6)將樹脂用氮氣吹干后，從反應(yīng)柱中取下并稱取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶 中加一定量的95%TFA(三氟乙酸)切割液，震蕩反應(yīng)2h，目的是將多肽從樹脂載體上裂解下 來并去除氨基酸的側(cè)鏈保護基團。
[0029] (7)濾掉樹脂，得到濾液，然后向濾液中加入大量乙醚，析出粗產(chǎn)物，然后離心，清 洗即可得到該序列的粗產(chǎn)物。
[0030] (8)分析提純和質(zhì)譜檢測：用ESI(電噴霧電離）離子源質(zhì)譜儀檢測該序列分子量 的正確性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度。
[0031] (9)收集純化好的目標(biāo)寡肽溶液放入凍干機中進行濃縮，凍干成白色粉末。
[0032] 實施例2寡肽對小鼠耳廓腫脹程度的影響，抗炎消腫鎮(zhèn)痛的作用
[0033] 取昆明種小鼠，雌雄各半，體重25_30g，按樣品量隨機分組：每組10只。 HY01-HY24(250mg/kg)(2mg/ml)、萘丁美酮（250mg/kg)、生理鹽水對照組（0?lml/10g)粗提 物劑量均折算為原動物生藥劑量（下同）。各組均經(jīng)口灌胃給藥，對照組經(jīng)口灌胃生理鹽 水。各組每天灌胃1次，連續(xù)4d,末次灌胃2h后，尾靜脈注射Evan'sblue50mg/kg,于 小鼠右耳雙面涂二甲苯25ul/面，20h后，拉頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑 7. 5mm的打孔器分別在雙耳同一部位打下圓耳片，電子天平稱重，求出重量差，用以表示 腫脹度（腫脹度=左耳耳片重-右耳耳片重）。按以下公式計算腫脹抑制百分率。
[0034]抑制率（%) =(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對照組平均腫脹度 *100%。
[0035]表1
【主權(quán)項】
1. 一種寡肽⑶11，其特征在于，由H、Y、L3個氨基酸殘基組成，分子量為431.50Da， 其氨基酸序列如SEQID: 1所示。
2. -種權(quán)利要求1所述寡肽的制備方法，其特征在于包括如下的步驟： a. 合成順序為從C端到N端；取1倍摩爾當(dāng)量的樹脂放入多肽合成儀反應(yīng)器中，加入 DCM(二氯甲烷）溶脹半小時，然后抽掉DCM，加入序列中第一個Fmoc保護的氨基酸IOmmol， 2倍摩爾當(dāng)量的DIEA(二異丙基乙胺），適量的DMF(二甲基甲酰胺）、DCM溶液(適量是指以 可使樹脂充分鼓動起來為宜)，用氮氣鼓泡反應(yīng)60min;然后加入約5倍摩爾當(dāng)量甲醇，反應(yīng) 半小時，抽掉反應(yīng)液，用DMF、甲醇洗凈； b. 加入適量哌啶去除Fmoc(9-芴甲氧羰基）保護基，洗凈，茚三酮檢測； c. 往反應(yīng)器中加入序列中第二個氨基酸(也為2倍摩爾當(dāng)量)，2倍摩爾當(dāng)量HBTU(苯 并三氮唑-N，N，N'，N' -四甲基脲六氟磷酸鹽）及DIEA，氮氣鼓泡反應(yīng)半小時，抽掉液體，用 DMF，甲醇洗凈，茚三酮檢測； d. 重復(fù)依步驟b、c的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液體，用DMF洗凈，茚三酮檢 測； e. 將樹脂用氮氣吹干后，從反應(yīng)柱中取下并稱取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶中加一 定量的95%TFA(三氟乙酸）切割液，震蕩反應(yīng)2h，目的是將多肽從樹脂載體上裂解下來并 去除氨基酸的側(cè)鏈保護基團； f. 濾掉樹脂，得到濾液，然后向濾液中加入大量乙醚，析出粗產(chǎn)物，然后離心，清洗即可 得到該序列的粗產(chǎn)物； g. 分析提純和質(zhì)譜檢測：用ESI(電噴霧電離)離子源質(zhì)譜儀檢測該序列分子量的正確 性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度； h. 收集純化好的目標(biāo)寡肽溶液放入凍干機中進行濃縮，凍干成白色粉末。
3. -種如權(quán)利要求1所述的寡肽在制備抗炎或鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
4. 一種如權(quán)利要求1所述的寡肽在制備修復(fù)創(chuàng)面藥物中的應(yīng)用。
5. -種如權(quán)利要求1所述的寡肽在制備治療皮膚外傷藥物中的應(yīng)用。
6. -種如權(quán)利要求1所述的寡肽在制備治療消化道潰瘍藥物中的應(yīng)用。
7. -種如權(quán)利要求1所述的寡肽在制備提高免疫藥物中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求1所述的寡肽可作為普通食品、保健品或者藥品的組成部分。
9. 含有權(quán)利要求1所述的一種或多種寡肽的組合物，其中含有藥學(xué)可以接受的載體。
10. 權(quán)利要求9所述的組合物可以以藥物制劑形式存在，優(yōu)選的是注射劑，更優(yōu)選的是 冷凍干燥注射劑，該藥物制劑形式藥物組合物，可以按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備，包括將藥物 活性成分，本發(fā)明的寡肽與藥物載體混合，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成所需要的劑型。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一個小分子寡肽及其制備方法，具體是寡肽CD11及其制備方法和應(yīng)用,本發(fā)明公開了寡肽的氨基酸序列如SEQ ID:1所示，可以采用合成，提取或者基因工程等方式制備寡肽CD11，在制備治療抗炎鎮(zhèn)痛、創(chuàng)面修復(fù)以及提高免疫的藥物中有較好的治療效果。
【IPC分類】A61P35-00, A61K38-06, C07K1-04, C07K1-06, A61P17-02, A23L1-29, C07K5-097, A61P31-00, A61P1-04, A61P29-00, A61P37-04
【公開號】CN104817627
【申請?zhí)枴緾N201410044252
【發(fā)明人】陳光健
【申請人】陳光健
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2014年1月30日