一種從虎杖中分離純化大黃素甲醚和大黃素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工與制藥領(lǐng)域，具體是涉及一種從虎杖提取物中分離純化大黃素甲 醚和大黃素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 虎杖為寥科寥屬多年生草本植物虎杖(應(yīng)SieA et Zucc的 干燥根莖和根，是一種已被中國(guó)藥典收入的比較常見(jiàn)的中草藥，具有解毒祛風(fēng)、止咳化痰、 活血通經(jīng)等功效，其中的大黃素和大黃素甲醚等蒽醌類化合物具有抑菌、抗炎、抗病毒及 抗腫瘤的作用。
[0003] 目前，對(duì)虎杖中蒽醌類成分的分離純化主要采用大孔樹(shù)脂分離純化法或高速逆流 色譜法。法雖然工藝成熟，但操作繁瑣，高速逆流色譜法中溶劑體系的選擇較困難，分離規(guī) 模難以擴(kuò)大。此外，大孔樹(shù)脂分離純化法和高速逆流色譜法兩種方法均需要消耗大量的有 機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑回收成本高，回收再利用較困難，產(chǎn)品中有機(jī)試劑殘留嚴(yán)重。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、分離量大、綜合成本 低、綠色環(huán)保的快速純化制備大黃素甲醚和大黃素的方法，通過(guò)一步分離純化即可從虎杖 提取物中得到高純度大黃素甲醚和大黃素單體化合物。
[0005] 本發(fā)明的方案如下： 一種從虎杖中分離純化大黃素甲醚和大黃素的方法，步驟為： 步驟1:虎杖藥材粉碎，加入無(wú)水乙醇冷浸提取，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，然后 將浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2 (V/V)的混合溶液中進(jìn)行萃取，合并上 相，減壓蒸餾得虎杖浸膏。
[0006] 步驟2 :將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾后，進(jìn)行超臨界流體色譜分離，色譜柱為 二醇基色譜柱，流動(dòng)相為超臨界流體，改性劑為甲醇。分離過(guò)程由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)檢 測(cè)信號(hào)收集目標(biāo)組分餾分。
[0007] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中無(wú)水乙醇冷浸提取乙醇與藥材的比例 是3 :1~10 :1，最優(yōu)為5 :1 ;提取的次數(shù)為3次，冷浸時(shí)間為8-24小時(shí)。
[0008] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中將浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚 =6:10:5:2 (V/V)的混合溶液中，混合液與浸膏的比例為23 :1~230 :1，最優(yōu)為105 :1。
[0009] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中用甲醇-水-乙酸乙酯-石油醚混合液 萃取，它們相應(yīng)的比例為6:10:5:2,萃取次數(shù)為3次。
[0010] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中過(guò)濾所用濾膜為0. 45 ym濾膜。
[0011] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中超臨界流體為超臨界二氧化碳，超臨界 二氧化碳的壓力為1〇~14 MPa，最優(yōu)為lOMPa ;超臨界二氧化碳的流速為1-10倍柱體積/分 鐘，最優(yōu)為3倍柱體積/分鐘。
[0012] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中色譜柱溫度為35~50° C，最優(yōu)為 40。C〇
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中改進(jìn)劑甲醇的比例為4%~12%，最優(yōu)為 6%〇
[0014]本發(fā)明一種從虎杖提取物中分離純化大黃素甲醚和大黃素的方法，具有如下優(yōu) 勢(shì)： (1)所得到的虎杖提取物中有效成分含量高(從圖1可以看出）。
[0015] (2)不需要像已有技術(shù)一樣對(duì)樣品進(jìn)行多次分離純化，只需要一個(gè)分離步驟即可 得到兩種高純度化合物，經(jīng)過(guò)一步分離純化就可以得到大黃素甲醚和大黃素。
[0016] (3)純化過(guò)程中使用超臨界二氧化碳，不使用對(duì)環(huán)境有危害的有機(jī)溶劑，生產(chǎn)過(guò)程 綠色環(huán)保，所得產(chǎn)品無(wú)有害物質(zhì)殘留。
[0017] (4)二氧化碳回收利用容易，能耗低，生產(chǎn)成本低。
[0018] (5)方法操作簡(jiǎn)單，易于自動(dòng)化控制，效率高，工藝周期短。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1是實(shí)施例1超臨界流體色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí) 施例中所用設(shè)備或原材料皆可從市場(chǎng)獲得。所用試劑均為分析純，購(gòu)自天津試劑四廠，所用 二氧化碳為高純二氧化碳。
[0021] 實(shí)施例1 稱取虎杖100克，用粉碎機(jī)粉碎，放入玻璃容器中，加入500ml無(wú)水乙醇冷浸提取12 小時(shí)，提取3次，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于460 ml甲醇-水-乙酸乙 酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2 (V/V)的比例混合溶液 萃取3次。合并上相，減壓蒸餾回收上相得虎杖浸膏。
[0022] 將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾(所用濾膜為0. 45 ym濾膜)后，進(jìn)行超臨界流體色 譜分離，色譜柱為二醇基色譜柱，色譜柱溫度為40° C。流動(dòng)相為超臨界二氧化碳，流速為 3倍柱體積/分鐘，壓力為lOMPa。改進(jìn)劑為甲醇，其比例為6%。分離過(guò)程由紫外檢測(cè)器檢 測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，根據(jù)檢測(cè)信號(hào)收集目標(biāo)組分餾分，分別得到大黃素甲醚和大黃素。
[0023] 圖1是實(shí)施例1超臨界流體色譜圖。所得各個(gè)組分的純度很高，均在98%以上。
[0024] 實(shí)施例2 稱取虎杖100克，用粉碎機(jī)粉碎，放入玻璃容器中，加入600ml無(wú)水乙醇冷浸提取24 小時(shí)，提取3次，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于690 ml甲醇-水-乙酸乙 酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2 (V/V)的比例混合溶液 萃取3次。合并上相，減壓蒸餾回收上相得虎杖浸膏。
[0025]將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾后，進(jìn)行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基色 譜柱，色譜柱溫度為45° C。流動(dòng)相為超臨界二氧化碳，流速為5倍柱體積/分鐘，壓力為 12MPa。改進(jìn)劑為甲醇，其比例為4%。分離過(guò)程由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，根據(jù) 檢測(cè)信號(hào)收集目標(biāo)組分餾分，分別得到大黃素甲醚和大黃素。
[0026] 實(shí)施例3 稱取虎杖100克，用粉碎機(jī)粉碎，放入玻璃容器中，加入300ml無(wú)水乙醇冷浸提取16 小時(shí)，提取3次，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于230 ml甲醇-水-乙酸乙 酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2 (V/V)的比例混合溶液 萃取3次。合并上相，減壓蒸餾回收上相得虎杖浸膏。
[0027] 將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾后，進(jìn)行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基色 譜柱，色譜柱溫度為40° C。流動(dòng)相為超臨界二氧化碳，流速為4倍柱體積/分鐘，壓力為 13MPa。改進(jìn)劑為甲醇，其比例為10%。分離過(guò)程由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，根 據(jù)檢測(cè)信號(hào)收集目標(biāo)組分餾分，分別得到大黃素甲醚和大黃素。
[0028] 經(jīng)HPLC面積歸一化法分析測(cè)試，實(shí)施例1-3所得到的各個(gè)組分的純度很高，均在 98%以上。
[0029] 經(jīng)NMR、MS鑒定，圖1中A為大黃素甲醚，B為大黃素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從虎杖中分離純化大黃素甲醚和大黃素的方法，其特征是，步驟為： 步驟1:虎杖藥材粉碎，加入無(wú)水乙醇冷浸提取，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，然后 將浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2的混合溶液中進(jìn)行萃取，合并上相，減壓 蒸餾得虎杖浸膏； 步驟2 :將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾后，進(jìn)行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇 基色譜柱，流動(dòng)相為超臨界流體，改性劑為甲醇；分離過(guò)程由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)信 號(hào)收集目標(biāo)組分餾分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中無(wú)水乙醇與藥材的比例是3 :1~ 10 :1，最優(yōu)為5 :1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中提取的次數(shù)為3次，冷浸時(shí)間為 8-24小時(shí)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中混合溶液與浸膏的比例為23 :1~ 230 :1，最優(yōu)為 105 :1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1萃取次數(shù)為3次。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中過(guò)濾所用濾膜為0. 45ym濾膜。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中超臨界流體為超臨界二氧化碳，超 臨界二氧化碳的壓力為1〇~14MPa，最優(yōu)為lOMPa。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，超臨界二氧化碳的流速為1-10倍柱體積/ 分鐘，最優(yōu)為3倍柱體積/分鐘。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中色譜柱溫度為35~50°C，最優(yōu)為 40。C0
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中改進(jìn)劑甲醇的比例為4°/d2%，最 優(yōu)為6%。
【專利摘要】本發(fā)明屬于化工與制藥領(lǐng)域，涉及一種從虎杖提取物中分離純化大黃素甲醚和大黃素的方法?；⒄人幉姆鬯椋尤霟o(wú)水乙醇冷浸提取，將提取液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的混合溶液中進(jìn)行萃取，合并上相，減壓蒸餾得虎杖浸膏。將虎杖浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過(guò)濾后，進(jìn)行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基色譜柱，流動(dòng)相為超臨界流體，改性劑為甲醇。本發(fā)明純化過(guò)程中使用超臨界二氧化碳，不使用對(duì)環(huán)境有危害的有機(jī)溶劑，生產(chǎn)過(guò)程綠色環(huán)保，所得產(chǎn)品無(wú)有害物質(zhì)殘留。
【IPC分類】C07C50-34, C07C46-10
【公開(kāi)號(hào)】CN104817445
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510179426
【發(fā)明人】亢靜靜, 孫愛(ài)玲, 李愛(ài)峰, 于琳琳, 柳仁民
【申請(qǐng)人】聊城大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年4月16日