蜜環(huán)菌菌劑的制備方法及該方法制成的蜜環(huán)菌菌劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及真菌菌劑制備領域，具體而言，涉及一種蜜環(huán)菌菌劑的制備方法及該 方法制成的蜜環(huán)菌菌劑。
【背景技術】
[0002] 蜜環(huán)菌 Armillaria mellea (vahl. ex Fr.) Quel 是一種藥（食）用菌，隸屬于 擔子菌亞門（Basidomycotina)，層菌綱（Hymenomycetes)，傘菌目（Agaricales)，口蘑科 (Tricholomataceae)，又名糖蕈、蜜色環(huán)菌、蜜蘑、櫟菌、小蜜環(huán)菌、蜜環(huán)蕈、青岡菌；該菌是 僅有的幾個具有菌索的種類之一，在東北地區(qū)俗稱"榛蘑"。當前，蜜環(huán)菌人工栽培產(chǎn)量有 限。
[0003] 在相關技術中，蜜環(huán)菌菌索生長緩慢、形成菌球時間長、出菇條件苛刻，進而使得 蜜環(huán)菌菌材的產(chǎn)量不能得到保障。隨著蜜環(huán)菌菌材在作為藥材（或食材）方面的需求不斷 增大，因此，提供一種能夠直接侵染枝條（以實現(xiàn)蜜環(huán)菌菌材制備）的蜜環(huán)菌菌劑是生產(chǎn)中 亟待解決的一個技術問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于一種蜜環(huán)菌菌劑的制備方法，以解決上述的技術問題。
[0005] 在本發(fā)明的實施例中提供了一種蜜環(huán)菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：
[0006] 1)、將蜜環(huán)菌原菌的菌索段接入菌株保藏培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，待所述菌索段的尖 端長至所述菌株保藏培養(yǎng)基深度的1/2時，置于22-25?的溫度下放置3天，得到待活化菌 種；
[0007] 其中，按照重量份數(shù)計，所述菌株保藏培養(yǎng)基的原料組份包括：玉米粉提取液 38-42份、蔗糖18-22份、麩皮28-32份、瓊脂8-12份、硫酸鎂0. 5份、磷酸二氫鉀0. 5-1. 5 份；
[0008] 2)、將所述待活化菌種的尖端菌索轉接至菌種活化培養(yǎng)基中進行活化，得到活化 后菌種；
[0009] 其中，按照重量份數(shù)計，所述菌種活化培養(yǎng)基的原料組份包括：麥粒提取液38-42 份、瓊脂8-12份、葡萄糖18-22份、磷酸二氫鉀1-2份、硫酸鎂2-4份；
[0010] 3)、將所述活化后菌種接種到另一新的所述菌種活化培養(yǎng)基中進行擴繁，得到擴 繁后的固體菌種；
[0011] 4)、利用麩皮液體培養(yǎng)基將所述擴繁后的固體菌種進行兩次暗培養(yǎng)，得到二級液 體菌種；
[0012] 其中，按照重量份數(shù)計，所述麩皮液體培養(yǎng)基包括：麩皮提取液48-52份、葡萄糖 18-22份、磷酸二氫鉀1-2份、硫酸鎂0. 75份、維生素0. 01份；
[0013] 5)、將所述二級液體菌種接入所述麩皮液體培養(yǎng)基中進行深層發(fā)酵培養(yǎng)，得到能 夠直接侵染枝條的蜜環(huán)菌菌劑。
[0014] 本發(fā)明提供的這種蜜環(huán)菌菌劑的制備方法，通過探索蜜環(huán)菌的生長條件，依次將 其原菌的菌索段（一般來源于與其伴生的豬苓或天麻專用菌株）接種到菌株保藏培養(yǎng)基 中，該培養(yǎng)基含有大量的玉米粉提取液以及碳源等，可供菌株的營養(yǎng)所需。接種后，菌索段 的尖端會向著培養(yǎng)基的內(nèi)部生長，待其伸入到培養(yǎng)基后，置于〇_4°C的溫度下保藏（半年內(nèi) 蜜環(huán)菌的種性不會發(fā)生明顯變化），使其處于半休眠狀態(tài)，以后使用時進行活化。
[0015] 在活化的過程中，優(yōu)選利用菌種活化培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的組份配比最適于菌種的 生長，一般而言，僅需7-10天即可布滿整個培養(yǎng)基。得到活化后菌種后，為了保證所獲菌材 的質(zhì)量，需要將其利用優(yōu)選的培養(yǎng)基（菌種活化培養(yǎng)基）進行擴繁，該培養(yǎng)基會使得活化 后的固體菌種的菌絲球生長狀況非常好（萌發(fā)天數(shù)、滿皿天數(shù)短、菌索干重量大）。擴繁之 后，將擴繁后的固體菌種利用液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，進而得到二級液體菌種；最后再通過深 層發(fā)酵培養(yǎng)之后即可獲得能夠直接侵染枝條的蜜環(huán)菌菌劑。通過實驗測定，該蜜環(huán)菌菌劑 可直接侵染枝條，接種枝條約30天之后即可形成栽培用的菌枝。
[0016] 綜上，通過本發(fā)明實施例提供的這種方法可獲得用于直接侵染枝條的蜜環(huán)菌菌 劑，該菌劑接種到枝條后約30天即可用于人工種植豬苓或天麻，與現(xiàn)有技術相比，縮短了 菌材的獲取時間（不經(jīng)過原種階段），進而使得蜜環(huán)菌菌材的產(chǎn)量得到保障，還可為醫(yī)藥業(yè) 獲取其藥用成分提供充足的物質(zhì)來源。
[0017] 可選的，在步驟2)中：具體包括：將所述待活化菌種常溫放置46-50小時后，挑選 其菌索尖端的白色或淡黃色的生長點并轉接至活化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10天，得到活化后菌 種。
[0018] 可選的，在步驟4)具體包括：將所述擴繁后的固體菌種接入至所述麩皮液體培養(yǎng) 基中，暗培養(yǎng)8-12天，得到一級液體菌種；
[0019] 將所述一級液體菌種按照8-12%的接種量轉接至另一新的麩皮液體培養(yǎng)基繼續(xù) 暗培養(yǎng)，得到二級液體菌種。
[0020] 可選的，在所述將所述擴繁后的固體菌種接入至所述麩皮液體培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng) 8-12天，得到一級液體菌種的步驟中；
[0021] 暗培養(yǎng)的溫度為28-30°C、轉速為140-160轉/分鐘。
[0022] 可選的，在步驟5)中：在所述深層發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，溶氧量為48-52%、pH為7、 溫度為28-30°C、消泡劑體積濃度2%〇。
[0023] 可選的，在步驟5)中，所述深層發(fā)酵培養(yǎng)的時間為8-12天。
[0024] 可選的，在步驟5)之后，還包括：將所述蜜環(huán)菌菌劑接種到枝條上，培養(yǎng)28-32天， 得到能夠人工栽培的菌枝。
[0025] 可選的，所述枝條選自桃樹、山楂樹、柳樹、海棠樹、樓桃樹、橡樹、柿子樹、榛樹、杏 樹、榆樹、小葉楊、山丁子樹、樺樹、苦櫟、板栗中的一種或多種。
[0026] 上述的制備方法制成的蜜環(huán)菌菌劑。
【附圖說明】
[0027] 為了更清楚地說明本發(fā)明【具體實施方式】或現(xiàn)有技術中的技術方案，下面將對具體 實施方式或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的 附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前 提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0028] 圖1為本發(fā)明實施例一提供的蜜環(huán)菌菌劑的制作方法的制備流程示意圖。
【具體實施方式】
[0029] 為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明的技術方案進行 清楚、完整的描述，基于本發(fā)明中的【具體實施方式】，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性 勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬于本發(fā)明所保護的范圍。
[0030] 實施例一
[0031] 請參考圖1，本發(fā)明提供的這種蜜環(huán)菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：
[0032] 步驟101 :將蜜環(huán)菌原菌的菌索段接入菌株保藏培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，待所述菌索 段的尖端長至所述菌株保藏培養(yǎng)基深度的1/2時，置于22-25?的溫度下放置3天，得到待 活化菌種；
[0033] 步驟101為菌株保藏的階段，在該步驟中，于菌株保藏培養(yǎng)基中接入需要保藏的 蜜環(huán)菌原菌的菌索段（優(yōu)選源于相伴生的豬苓或天麻專用菌株）。
[0034] 另外，按照重量份數(shù)計，所述菌株保藏培養(yǎng)基