量3.7%，灰分6.0% ;小鼠免疫功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)于環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠模型，以全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉按照400mg/kg小鼠體重劑量灌胃小鼠，全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的致敏程度為4.21%顯著高于模型組的致敏程度為1.23% (p〈0.05)，則遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的半數(shù)溶血值(HC5tl)-54.32顯著高于模型組的半數(shù)溶血值(HC5(i)-16.19 (p〈0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉血清溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率為6.98%顯著高于模型組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率3.32% (p〈0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉的NK細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；以上三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉具有增強(qiáng)免疫力功能作用。
[0013]實(shí)施例3
將經(jīng)過(guò)活化和擴(kuò)增的產(chǎn)朊假絲酵母(CICC1769，購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心)工作種子接種到普通YPD (Yeast extract peptone dextrose medium)培養(yǎng)基中，在溫度30°C，培養(yǎng)18h，培養(yǎng)結(jié)束后在7500r/min離心15min，得酵母渣；取酵母渣1000g，加入1kg水中，在高壓均質(zhì)機(jī)中，60MPa下均質(zhì)3次使酵母破壁，制成酵母乳液；酵母乳液置于微波反應(yīng)藎中，用濃度為lmol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值8.5，加入5g葡聚糖酶和1g堿性蛋白酶，微波功率為750w，溫度為50°C，進(jìn)行第一次微波輔助酶解18min ;第一次酶解完成后，加醋酸調(diào)節(jié)PH值為6.5，加入5g核酸酶，微波功率為750w，溫度為70°C，進(jìn)行第二次微波輔助酶解ISmin ;將酶解后的酵母乳液通過(guò)蒸汽迅速升溫至95-100°C，保溫I小時(shí)，使酶滅活；將上述滅活后的酶解液直接噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)口溫度控制在160-200°C，出風(fēng)口溫度控制在80-100°C，獲得粉狀全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母。本實(shí)施例制得的全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母為淡黃色粉末，具有濃厚的酵香味；酵母破壁率99.7% (酶解后測(cè)定);粗蛋白含量58.5%，蛋白水解度54.2%，核苷酸含量10.8%，水分含量4.0%，灰分5.7% ;小鼠免疫功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)于環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠模型，以全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉按照800mg/kg小鼠體重劑量灌胃小鼠，全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的致敏程度為6.43%顯著高于模型組的致敏程度為1.43% (p〈0.05)，則遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的半數(shù)溶血值(HC5tl)-67.34顯著高于模型組的半數(shù)溶血值(HC5(i)-17.14(p〈0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉血清溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率為9.25%顯著高于模型組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率3.99% (p〈0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉的NK細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；以上三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉具有增強(qiáng)免疫力功能作用。
[0014]實(shí)施例4
將經(jīng)過(guò)活化和擴(kuò)增的產(chǎn)朊假絲酵母(CICC1769，購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心)工作種子接種到普通YPD (Yeast extract peptone dextrose medium)培養(yǎng)基中，在溫度32°C，培養(yǎng)12h，培養(yǎng)結(jié)束后在7500r/min離心15min，得酵母渣；取酵母渣350g，加入3kg水中，在高壓均質(zhì)機(jī)中，50MPa下均質(zhì)3次使酵母破壁，制成酵母乳液；酵母乳液置于微波反應(yīng)釜中，用濃度為lmol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值8.0，加入1.5g葡聚糖酶和3g堿性蛋白酶，微波功率為550w，溫度為50°C，進(jìn)行第一次微波輔助酶解1min ;第一次酶解完成后，加醋酸調(diào)節(jié)PH值為6.0，加入1.5g核酸酶，微波功率為550w，溫度為50°C，進(jìn)行第二次微波輔助酶解1min ;將酶解后的酵母乳液通過(guò)蒸汽迅速升溫至95-100°C，保溫I小時(shí)，使酶滅活；將上述滅活后的酶解液直接噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)口溫度控制在160-200°C，出風(fēng)口溫度控制在80-100°C，獲得粉狀全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母。本實(shí)施例制得的全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母為淡黃色粉末，具有濃厚的酵香味；酵母破壁率99.0% (酶解后測(cè)定)；粗蛋白含量54.3%，蛋白水解度48.6%，核苷酸含量10.0%，水分含量4.4%，灰分6.2% ;小鼠免疫功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)于環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠模型，以全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉按照200mg/kg小鼠體重劑量灌胃小鼠，全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的致敏程度為3.13%顯著高于模型組的致敏程度為1.24% (p〈0.05)，則遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組的半數(shù)溶血值(HC5tl)-44.36顯著高于模型組的半數(shù)溶血值(HC5(i)-15.03(p<0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉血清溶血素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母實(shí)驗(yàn)組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率為5.33%顯著高于模型組對(duì)原代脾細(xì)胞NK殺傷性百分率3.35% (p〈0.05)，則全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉的NK細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性；以上三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母粉具有增強(qiáng)免疫力功能作用。
[0015]以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法，其特征在于包含以下步驟:(1)酵母液體發(fā)酵:酵母發(fā)酵，離心，得到酵母渣；(2)高壓均質(zhì)破壁:將上述酵母渣混入水中，采用高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)破壁，制成酵母乳液；(3)第一次微波輔助酶解:將上述酵母乳液置于微波反應(yīng)釜中，調(diào)節(jié)PH值，加入葡聚糖酶和堿性蛋白酶，微波輔助酶解；(4)第二次微波輔助酶解:第一次酶解完成后，調(diào)節(jié)PH值，加入核酸酶，微波輔助酶解，達(dá)到快速破壁及酶解酵母蛋白和核酸的目的；(5)酶滅活:將上述酶解后的酵母乳液通過(guò)蒸汽迅速升溫至95-100°C，保溫I小時(shí)；(6)干燥:將上述酶水解液直接噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)口溫度控制在160-200°C，出風(fēng)口溫度控制在80-100 °C，獲得飼用全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法，其特征在于，步驟(I)所述的酵母為產(chǎn)朊假絲酵母(CICC1769，購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心)，液體發(fā)酵培養(yǎng)基為普通YPD (Yeast extract peptone dextrose medium)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的組分包括蛋白胨1.9，酵母浸膏0.95%，葡萄糖1.9%，水95.25%，發(fā)酵條件是溫度28_33°C，時(shí)間.12_24h，離心條件是 7500r/min，離心 15min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法，其特征在于，步驟(2)所述的加水量為1.0-10.0ml/g酵母渣，破壁條件為:用高壓均質(zhì)機(jī)在50-60MPa壓力下，均質(zhì)破壁2-3次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法，其特征在于，步驟(3)所述的調(diào)節(jié)PH值為使用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5-8.5，加入葡聚糖酶的量為底物量的0.01-0.5%，加入堿性蛋白酶的量為底物量的0.05-1%，微波輔助酶解的條件為:微波功率為550-750w，溫度為50-55°C，酶解時(shí)間為8_18min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法，其特征在于，步驟(4)所述的調(diào)節(jié)PH值為使用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.5，加入核酸酶的量為底物量的.0.01-0.5%，微波輔助酶解的條件為:微波功率為550-750W，溫度為50-70°C，酶解時(shí)間為.8-18min。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種制備全營(yíng)養(yǎng)破壁酵母的方法。該方法包括酵母液體發(fā)酵，高壓均質(zhì)破壁，兩次微波輔助酶解，滅活，噴霧干燥等步驟。所得產(chǎn)品破壁完全，并保留了酵母全部的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高了酵母蛋白質(zhì)和核酸的可利用程度，風(fēng)味良好，具有顯著的免疫增強(qiáng)作用。本發(fā)明采用物理破壁與酶解破壁相結(jié)合的工藝，與傳統(tǒng)的方法相比，高壓均質(zhì)及酶解破壁可以顯著提高酵母細(xì)胞的破壁率；同時(shí)采用微波輔助酶解，可顯著提高酶解速度，縮短酶解時(shí)間。本發(fā)明設(shè)備要求低，操作工藝簡(jiǎn)單，節(jié)約能耗，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類(lèi)】C12R1-72, C12N1-06
【公開(kāi)號(hào)】CN104805014
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510225795
【發(fā)明人】張連水, 張君, 張青松, 宋建, 葉國(guó)香, 劉會(huì)嬌, 丁軍, 王春國(guó), 張旺林, 楊俊芬
【申請(qǐng)人】滄州旺發(fā)生物技術(shù)研究所有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2015年5月6日