額外的組成型表達(dá)的Scldil 拷貝。
[0202] 圖21分析EYS1934 (對照）和EYS2206 (EasC)中環(huán)棒麥角素（CCL)和狐茅麥角堿 (MW241)的產(chǎn)量，并且顯示因基因 AjEasC的額外拷貝的表達(dá)而導(dǎo)致的EYS2206中產(chǎn)量的增 加。
[0203] 圖22 :來自EYS2124(來自日本曲霉的EasE)和EYS2125(來自N. Iolii的EasE) 的培養(yǎng)上清液的分析結(jié)果，顯示這些菌株產(chǎn)生的環(huán)棒麥角素和狐茅麥角堿（MW241)的相對 量（曲線下面積）。
[0204] 圖23顯示來自具有全長環(huán)棒麥角素途徑的酵母株的培養(yǎng)上清液的分析結(jié)果，每 種酵母株各具有DNA密碼子使用不同的EasE基因，但是均編碼來自日本曲霉的相應(yīng)酶。不 同的密碼子使用導(dǎo)致這些菌株產(chǎn)生不同量（如曲線下面積所示）的環(huán)棒麥角素和狐茅麥角 堿（MW241)。
[0205] 圖24 !EYS2006分別在無甘油（對照）或存在2. 5%、5%和10%甘油時(shí)生長。環(huán) 棒麥角素和狐茅麥角堿（MW241)的產(chǎn)量隨甘油濃度增加而增加。
[0206] 圖25 :與EYS2209(左側(cè)）相比EYS1934中以及與EYS2297相比EYS2209中環(huán)棒 麥角素的產(chǎn)量。
[0207] 圖26 :補(bǔ)料分批發(fā)酵中CCL和FCL的產(chǎn)量。相對于發(fā)酵持續(xù)時(shí)間，顯示化合物的 濃度（mg/L)和實(shí)測0D600。
[0208] 圖27 :遺傳背景不同的7個(gè)酵母株（釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae))中 CCL和FCL的產(chǎn)量（參見表58)。
[0209] -般定義
[0210] 術(shù)語"環(huán)棒麥角素"意指式（I)化合物。
[0211]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 重組微生物，包含： a) 至少一種EasH活性，或 b) 至少一種EasH和EasD活性，或 c) 至少一種EasH和EasA還原酶活性，或 d) 至少一種EasH、EasD和EasA活性，或 e) 至少一種EasH和EasD、EasA還原酶及EasG活性，或 f) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasH、EasA 和 EasG 活性，或 g) 至少一種EasD、EasA和EasG活性，或 h) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasA 還原酶和 EasG 活性，或 i) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasA 異構(gòu)酶和 EasG 活性，或 j) 至少一種 DmaW、EasF、EasE 和 EasC 活性，或 k) a)至j)中至少兩者的組合， 其中重組微生物不是天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物。
2. 重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物，具有至少一種上調(diào)的選自以下活性的活性： DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasH、EasA 和 EasG 活性，其中 EasA 活性是 EasA 還原酶、EasA 異構(gòu)酶、或EasA還原酶和EasA異構(gòu)酶活性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2中所述的重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物，其中至少一種上調(diào)的活 性選自以下一個(gè)或多個(gè)組的活性： a) 至少一種EasH活性，或 b) 至少一種EasH和EasD，或 c) 至少一種EasH和EasA還原酶活性，或 d) 至少一種EasH、EasD和EasA活性，或 e) 至少一種EasH和EasD、EasA還原酶及EasG活性，或 f) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasH、EasA 和 EasG 活性，或 g) 至少一種EasD、EasA和EasG活性，或 h) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasA 還原酶和 EasG 活性，或 i) 至少一種 DmaW、EasF、EasE、EasC、EasD、EasA 異構(gòu)酶和 EasG 活性，和 j) 至少一種 DmaW、EasF、EasE 和 EasC 活性。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3中所述的重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物，具有至少一種下調(diào) 的選自EasD、EasH、EasA還原酶、EasA異構(gòu)酶和EasG活性的活性。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生 物，包含擴(kuò)大的DMPP供應(yīng)量和/或擴(kuò)大的Me-DMT供應(yīng)量，優(yōu)選地包含至少一種下調(diào)的 ERG9或ERG20活性、或至少一種上調(diào)的HMG-CoA還原酶活性，或包含至少一種下調(diào)的ERG9 或ERG20活性和至少一種上調(diào)的HMG-CoA還原酶活性。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生 物，包含至少一個(gè)重組多核苷酸，所述重組多核苷酸編碼： a) 至少一種EasH活性，或 b) 至少一種EasH和EasD活性，或 c) 至少一種EasA還原酶或至少一種EasA異構(gòu)酶活性，或 d) 至少一種EasD、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 e) 至少一種EasD、EasA還原酶和EasG活性，或 f) 至少一種EasH、EasD、EasA還原酶、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 g) 至少一種EasH、EasD、EasA還原酶和EasG活性，或 h) 至少一種EasH、EasD、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 i) 至少一種 DmaW、EasF、EasE 和 EasC 活性，或 j) a)至i)中至少兩者的組合。
7. 重組多核苷酸，編碼： a) 至少一種EasH活性，或 b) 至少一種EasH和EasD活性，或 c) 至少一種EasA還原酶或至少一種EasA異構(gòu)酶活性，或 d) 至少一種EasD、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 e) 至少一種EasD、EasA還原酶和EasG活性，或 f) 至少一種EasH、EasD、EasA還原酶、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 g) 至少一種EasH、EasD、EasA還原酶和EasG活性，或 h) 至少一種EasH、EasD、EasA異構(gòu)酶和EasG活性，或 i) 至少一種 DmaW、EasF、EasE 和 EasC 活性，或 j) a)至i)中至少兩者的組合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物堿生產(chǎn)生 物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中DmaW活性歸因于 a) 包含與SEQ ID NO: 145和146具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽； b) 包含與SEQ ID NO: 147和/或190具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽， 或 c) 包含與SEQ ID勵(lì)：1、19、20、179和/或180具有至少40%序列同一性的氨基酸序 列的多肽，或 d) 包含與 SEQ ID N0:l、19、20、21、22、23、24、25、26、27 和 / 或 28 具有至少 90%序列 同一性的氨基酸序列的多肽，或 e) 由與SEQ ID N0:102、122、123具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽，或 f) 由與SEQ ID NO: 129和/或137具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 g) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID勵(lì)：102、122、123、129和/或137所示序列的多核苷酸序列的至少15 個(gè)連續(xù)核苷酸，或 h) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID勵(lì)：102、122、123、129和/或137雜交的多核苷酸編碼的 多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少b)和c)的多肽，或 j) 根據(jù)a)至i)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物堿生產(chǎn) 生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasF活性歸因于 a) 包含與SEQ ID NO: 154具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 b) 包含與SEQ ID N0:6、75和/或76具有至少40%序列同一性的氨基酸序列的多肽， 或 c) 包含與 SEQ ID 勵(lì):6、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84和/或85具有至少90%序 列同一性的氨基酸序列的多肽，或 d) 由與SEQ ID NO: 107和/或120具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 e) 由與SEQ ID NO: 134和/或142具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 f) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID NO: 107、120、134和/或142所示序列的多核苷酸序列的至少15個(gè) 連續(xù)核苷酸，或 g) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 107、120、134和/或142雜交的多核苷酸編碼的多 肽，或 h) 根據(jù)a)至g)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少a)和b)的多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8或9中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物 堿生產(chǎn)生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasE活性歸因于 a) 包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 153、185和/或191具有至 少90%序列同一性，優(yōu)選地與SEQ ID NO: 191具有至少90%序列同一性， b) 包含與SEQ ID N0:5和/或64具有至少40%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 c) 包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID N0:5、64、65、66、67、68、69、70、 71、72、73 和 / 或 74 具有至少 90%序列同一性，或與 SEQ ID N0:5、64、175、66、67、68、69、 176、71、177、73和/或178具有至少90%序列同一性，或 d) 由與SEQ ID NO: 106具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽，或 e) 由與SEQ ID NO: 133和/或141具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 f) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID NO: 106、133或141所示序列的多核苷酸序列的至少15個(gè)連續(xù)核苷 酸，或 g) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 106、133或141雜交的多核苷酸編碼的多肽，或 h) 根據(jù)a)至g)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少a)和b)的多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8至10中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物 堿生產(chǎn)生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasC活性歸因于 a) 包含與SEQ ID NO: 151和/或192具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽， 或 b) 包含與SEQ ID N0:3和/或41具有至少40%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 c) 包含與 SEQ ID 勵(lì):3、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51和/或52具有至少90% 序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 d) 由與SEQ ID NO: 104具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽，或 e) 由與SEQ ID NO: 131和/或139具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或， f) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID NO: 104、131和/或139所示序列的多核苷酸序列的至少15個(gè)連續(xù) 核苷酸，或 g) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 104、131和/或139雜交的多核苷酸編碼的多肽，或 h) 根據(jù)a)至g)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少a)和b)的多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8至11中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物 堿生產(chǎn)生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasD活性歸因于 a) 包含與SEQ ID NO: 152具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 b) 包含與SEQ ID N0:4和/或53具有至少40%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 c) 包含與 SEQ ID 勵(lì):4、53、54、55、56、57、58、59、60、62和/或63具有至少90%序列 同一性的氨基酸序列的多肽，或 d) 由與SEQ ID NO: 105具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽，或 e) 由與SEQ ID NO: 132和/或140具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 f) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID NO: 105、132和/或140所示序列的多核苷酸序列的至少15個(gè)連續(xù) 核苷酸，或 g) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 105、132和/或140雜交的多核苷酸編碼的多肽，或 h) 根據(jù)a)至g)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少a)和b)的多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8至12中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物 堿生產(chǎn)生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasH活性歸因于 a) 包含與SEQ ID NO: 156具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 b) 包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID N0:8和/或95具有至少60%序 列同一性，并且與 SEQ ID N0:156 具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或100%序列同一性，或 c) 包含與SEQ ID N0:8和/或95具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的多肽，或 d) 由與SEQ ID NO: 109和/或157具有至少70%序列同一性的多核苷酸編碼的多肽， 或 e) 由與SEQ ID N0:109、136或144和/或157具有至少70%序列同一性的多核苷酸 編碼的多肽，或 f) 由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸可以通過使用兩個(gè)PCR引物獲得，其中每個(gè) 引物包含選自SEQ ID勵(lì)：109、136、144和/或157所示序列的多核苷酸序列的至少15個(gè) 連續(xù)核苷酸，或 g) 由在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 109、136、144和/或157雜交的多核苷酸編碼的多 肽，或 h) 根據(jù)a)至g)中至少兩者、優(yōu)選地根據(jù)至少a)和b)的多肽，或 i) 根據(jù)a)至h)中至少之一的多肽，所述多肽可從天然麥角類生物堿生產(chǎn)生物獲得。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至6或8至13中任一項(xiàng)所述的重組微生物或重組天然麥角類生物 堿生產(chǎn)生物、或根據(jù)權(quán)利要求7中所述的重組多核苷酸，其中EasA還原酶活性歸因于 a) 包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID N0:148、149和150具有至少 90%序列同一性并且在SEQ ID NO: 149的氨基酸位置18處具有酪氨酸，或 b) 包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ ID N0:193、194