復(fù)合生物活菌制劑及其制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物菌種的應(yīng)用及其制作工藝，具體地說是一種可應(yīng)用于農(nóng)業(yè)種植、水產(chǎn)養(yǎng)殖、畜禽養(yǎng)殖、飼料加工、環(huán)境保護(hù)、污水處理等領(lǐng)域的新型復(fù)合生物活菌制劑及其制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]上世紀(jì)40年代末學(xué)者們第一次發(fā)現(xiàn)了四環(huán)素對(duì)畜禽生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，從而開創(chuàng)了抗生素作為飼料添加劑的時(shí)代。在這個(gè)時(shí)代里，人們廣泛使用亞治療劑量的抗生素及其他化學(xué)藥品用作飼料添加劑，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)或預(yù)防病原菌感染、疾病的發(fā)生，對(duì)飼料工業(yè)及養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展作出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。但隨著科學(xué)認(rèn)識(shí)的深人，人們?cè)讷@得經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，對(duì)這些抗生素、化學(xué)藥物所帶來的副作用有了更深刻的認(rèn)識(shí)。如濫用抗生素引起動(dòng)物內(nèi)源性或二重感染，產(chǎn)生耐藥茵株，動(dòng)物細(xì)胞免疫、體液免疫功能下降以及藥物在動(dòng)物產(chǎn)品中的殘留等等，基于這些原因，很多國(guó)家和飼養(yǎng)者反對(duì)抗生素作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑，甚至通過立法對(duì)愈來愈多的藥物品種加以禁止。
[0003]我國(guó)加入WTO后，對(duì)我國(guó)的整體經(jīng)濟(jì)發(fā)展非常有利，但也出現(xiàn)了不容忽視的問題，許多出口農(nóng)副產(chǎn)品，如肉、禽、蛋、奶、水產(chǎn)品等食品由于農(nóng)藥殘留等問題而被拒之門外，減少了我國(guó)的國(guó)際市場(chǎng)份額，面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)激烈的國(guó)際市場(chǎng)，擺在我們面前的重要任務(wù)是最大限度地減少農(nóng)藥殘留，生產(chǎn)無污染、無殘留的綠色農(nóng)副產(chǎn)品，使之在國(guó)際市場(chǎng)占有一席之地。
[0004]在這種背景下，人們紛紛把目光投向了具有多重功能的無毒、無副作用、無殘留的活菌制劑。以乳酸菌為例，據(jù)有關(guān)資料記載顯示普遍公認(rèn)的幾種乳酸菌，生理功效表現(xiàn)為:
嗜酸乳桿菌LA:有免疫增強(qiáng)作用，黏附在動(dòng)物腸道上皮細(xì)胞，平衡腸道菌群。
[0005]干酪乳桿菌Shirota:防治腸道紊亂平衡腸道細(xì)菌，降低糞便中毒性酶活性。
[0006]羅伊代乳桿菌:定植于腸道，對(duì)動(dòng)物疾病的防治效果很好，對(duì)人也有良好效果，如果將多種有益菌復(fù)合成制劑其功效會(huì)表現(xiàn)得更為全面更為突出。因此，開展復(fù)合生物活菌技術(shù)研究作用重大、意義深遠(yuǎn)、空間廣闊。
[0007]進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，菌種之間有著相互影響抑制作用與相互激發(fā)的積極作用。經(jīng)適當(dāng)搭配可以極大的提高單一存在時(shí)的作用和效率，從而使應(yīng)用范圍和應(yīng)用價(jià)值成倍提高。復(fù)合菌種的市場(chǎng)價(jià)值是為提高農(nóng)副產(chǎn)品質(zhì)量，生產(chǎn)綠色食品提升農(nóng)副產(chǎn)品國(guó)際地位提供了有啟發(fā)意義的思路，也是我們開展這一技術(shù)研究的重要依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明以復(fù)合生物活菌制劑產(chǎn)品為目的，以多批次的實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)為基礎(chǔ)，在常用、多見的益生菌種中篩選出經(jīng)濟(jì)適用的種屬、比例的組合，可以經(jīng)濟(jì)、靠效率誘導(dǎo)復(fù)合生物活菌制劑的二次發(fā)酵生產(chǎn)出更加適用于農(nóng)業(yè)種植、畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖、飼料添加和城市污水生活垃圾處理等領(lǐng)域的眾多產(chǎn)品。以綜合解決化學(xué)、激素殘留、城市環(huán)境生活垃圾污染等問題。有益于循環(huán)農(nóng)業(yè)、如無公害蔬菜、糧油、肉蛋食品，維護(hù)生態(tài)平衡。產(chǎn)生有益人民健康，提高經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益的多方面效果。借助適應(yīng)性培養(yǎng)基相匹配，可以形成新型復(fù)合生物活菌制劑二次產(chǎn)品及其生產(chǎn)工藝。
[0009]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
一、復(fù)合生物活菌制劑
本發(fā)明的試劑中有效活菌總數(shù)不少于108cfu/ml。該制劑是借助混合菌種在裝有配套培養(yǎng)基的試管中激活，經(jīng)搖床培育，在發(fā)酵罐中生成，再經(jīng)過濾、濃縮、配比形成活菌制劑，該制劑中所含各種菌種的有效活菌數(shù)的百分比為:
光合菌22?25%，
酵母菌21?24%，
枯草芽孢桿菌15?20%
乳酸片球菌15?20%，
糞鏈球菌12?16%，
嗜酸乳桿菌12?16%。
[0010]二、復(fù)合生物活菌制劑的制備工藝該工藝中包括以下步驟:
A、菌種選取與活化:
按照上述所選定的菌種種類、分別選取健康的菌株和配套的活化培養(yǎng)基在試管中進(jìn)行斜面激活培養(yǎng)，
B、搖瓶培養(yǎng)基的確定和液體菌種的培育:
按如下體積份數(shù)比關(guān)系制得所需的搖瓶培養(yǎng)基:復(fù)合維生素水溶液2份、微量元素水溶液I份、與菌種配套的活化培養(yǎng)基1.5份混配搖勻分散植入燒瓶，然后加入激活后的菌種、在28-33°C無菌室內(nèi)的搖床上培養(yǎng)24-48小時(shí)生成液體菌種，
C、菌種罐培養(yǎng)基的配比和混合菌種的發(fā)酵培育:
參照以下的組份重量比配置菌種罐培養(yǎng)基:35%硫酸lg、7水硫酸鎂2g、氯化鈉lg、磷酸二氫鉀0.5g、蘋果酸鈉2g、2水氯化鈣0.5g、酵母浸出液0.5g、7水硫酸亞鐵0.lg、微量元素水溶液1ml、復(fù)合維生素水溶液1ml、瓊脂10g、蔗糖5g、蛋白胨5g、加入純凈水IL形成液體培養(yǎng)基，
在菌種罐中植入液體培養(yǎng)基后，調(diào)整復(fù)合液體菌種中各菌種有效活菌總數(shù)達(dá)到106CfU/ml-107CfU/ml，并參照各菌種活菌數(shù)量的如下百分比組成進(jìn)行調(diào)整成為混合菌種:光合菌20?22%，
酵母菌18?22%，
枯草芽孢桿菌17?20%
乳酸片球菌18?21%，
糞鏈球菌22?24%，
嗜酸乳桿菌22?18%，
然后按照體積比100:7?10加入到液體培養(yǎng)基中攪拌均勻，調(diào)整PH7.0、保持溫度28-30°C，培養(yǎng)時(shí)間28天得到液體菌種。
[0011]以上所述微量元素水溶液由以下成分混合而成:
EDTA-2Na:19(T210mg，2水鑰酸鈉:18?22mg，7水硫酸亞鐵:8(Tl20mg，6水氮化鎳8?12mg:硼酸 8(Tl20mg，2 水氯化銅:8(Tl20mg，氯化鋅:8(Tl20mg，4 水氯化錳:8(Tl20mg，蒸餾水:0.8?1.2L。
[0012]以上所述的復(fù)合維生素水溶液由以下成分混合而成:
維生素B1:480?520g，對(duì)氨基苯甲酸:28(T320g，維生素B3:480?520mg，維生素B1240?60mg,維生素B6:80?120mg、維生素B7:40?60mg、蒸懼水0.8?1.2L。
[0013]三、復(fù)合生物活菌粉劑。
[0014]四、在以上工藝步驟中C步驟完成之后，得到復(fù)合生物活菌液體劑。
[0015]再將液體制劑經(jīng)干燥至水分< 15%的固留物，再經(jīng)粉碎，過60目篩，包裝，形成有效活菌總數(shù)不少于17Cfu/克的粉狀制劑。
[0016]以上所述的復(fù)合菌種液體或粉劑產(chǎn)品，將分別直接或借助于二次發(fā)酵應(yīng)用于農(nóng)業(yè)種植、畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖、飼料添加和城市污水生活垃圾處理等領(lǐng)域，以解決化學(xué)、激素殘留和城市環(huán)境污染等問題，生產(chǎn)綠色、無公害蔬菜、糧油、肉蛋食品，維護(hù)生態(tài)平衡，有益人民健康，提高經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
[0017]在本發(fā)明設(shè)計(jì)中首先考慮的是有益菌種的選擇。首先是根據(jù)它的生產(chǎn)工藝環(huán)境、二次發(fā)酵產(chǎn)品的應(yīng)用環(huán)境、發(fā)酵產(chǎn)品的技術(shù)性能特征出發(fā)，從它們各自的過程特點(diǎn)所決定的生物學(xué)特性去認(rèn)識(shí)、比較，以找出優(yōu)異健康的菌種。再把挑選到的每類菌種，按各菌種所需的條件要求，選擇出適合生長(zhǎng)繁殖的各級(jí)培養(yǎng)基。需要經(jīng)初步選擇、到分類型擴(kuò)大培養(yǎng)個(gè)類活性菌進(jìn)行混合培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)它們共生增殖、互相依存的所需要的條件中選擇共生特征，再將它們有機(jī)的結(jié)合在一起進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)的條件篩選出來。通過多次培養(yǎng)試驗(yàn)、反復(fù)篩選后確定的混合發(fā)酵罐中所需要的共生培養(yǎng)基配方，才能最終實(shí)施混合發(fā)酵培養(yǎng)、生成本發(fā)明所需要的復(fù)合菌種試劑。
[0018]本發(fā)明產(chǎn)生的有益效果是:直接應(yīng)用或二次發(fā)酵產(chǎn)品可以應(yīng)用到農(nóng)牧水產(chǎn)領(lǐng)域產(chǎn)生積極地低成本高附加值的經(jīng)濟(jì)效益和充分利用生物質(zhì)廢料實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)循環(huán)經(jīng)濟(jì)和改善環(huán)境效益:
1、本發(fā)明的復(fù)合生物活菌制劑能夠直接應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面:施用到水體或添加到餌料中，可使動(dòng)物的消化道內(nèi)及水體環(huán)境中建立有益菌群、抑制有害微生物的生長(zhǎng)和繁殖。正常菌群可為養(yǎng)殖品種提供大量的營(yíng)養(yǎng)素，增強(qiáng)其抗病能力，其菌體作用還能殺死或抑制病原微生物，消除有害物質(zhì)，促進(jìn)有益藻類的生長(zhǎng)，為水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物提供良好的生長(zhǎng)環(huán)境。
[0019]2、本發(fā)明的復(fù)合生物活菌制劑應(yīng)用在畜禽養(yǎng)殖方面:可調(diào)節(jié)動(dòng)物微生態(tài)平衡、防止和克服微生態(tài)失調(diào)，提高畜禽免疫功能、增強(qiáng)其抗病能力，降低發(fā)病率和死亡率，進(jìn)而少用或不用獸藥，提高飼料轉(zhuǎn)化率，抑制、消除圈舍有害氣體，促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)發(fā)育。
[0020]3、本發(fā)明的復(fù)合生物活菌制劑應(yīng)用在種植業(yè)方面:能促進(jìn)土壤有機(jī)質(zhì)的分解，提高肥效；能改善土壤的理化性質(zhì)，使之松軟、透水、透氣，從而促進(jìn)種植作物的新陳代謝，預(yù)防和減少病蟲害的發(fā)生，改善作物品質(zhì)。
【具體實(shí)施方式】
[0021]本發(fā)明中的各益生菌均選用由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保存的菌種，其中，光合菌(Inoculant of photosynthetic