雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化工藝，屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雄烯二酮是從精巢或尿中提取出的具有雄性激素作用的一種留類(lèi)化合物，單 純的依靠化學(xué)方法生產(chǎn)雄烯二酮遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到市場(chǎng)的需求。通過(guò)微生物選擇性降解甾醇 側(cè)鏈，可得到制備留體激素類(lèi)藥物的重要中間體雄烯二酮（雄留-4-烯-3，17-二酮， androst-4-ene-3, 17-dione，簡(jiǎn)稱AD)。因此采用微生物發(fā)酵生產(chǎn)AD具有產(chǎn)品純度高、生 產(chǎn)成本低、周期短等特點(diǎn)，是當(dāng)前雄烯二酮生產(chǎn)的一大趨勢(shì)。
[0003] 但目前雄烯二酮發(fā)酵生產(chǎn)中還存在一定的弊端，發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的泡沫多，成本 高，提取工藝?yán)щy等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的泡沫少，成本低，能夠有效地降低發(fā) 酵染菌率，易于提取的雄烯二酮發(fā)酵新配方。
[0005] 本發(fā)明的內(nèi)容與要點(diǎn)分述如下 一.根據(jù)更適宜發(fā)酵生產(chǎn)的原則進(jìn)行優(yōu)化 優(yōu)化后的種子配方為（g/L):丙三醇2. 5,氯化銨2. 5,磷酸二氫鉀0.08,七水硫酸鎂 〇.1，酵母粉20，？!1值7.0; 優(yōu)化后的發(fā)酵配方為（g/L):丙三醇25,黃豆餅粉45,硫酸銨4,七水硫酸鎂3,磷酸氫 二鉀2,酵母粉3,氯化錳0. 004,碳酸鈣15,植物甾醇30,卵磷脂3, pH值7. 0。
[0006] 二.培養(yǎng)工藝與原工藝基本相同 (1)搖瓶工藝 種子瓶培養(yǎng)條件為：轉(zhuǎn)速200r/min，培養(yǎng)48±6h，培養(yǎng)溫度為30 土 1°C，濕度30%-60%。 發(fā)酵瓶培養(yǎng)條件為：轉(zhuǎn)速220r/min，培養(yǎng)5-7d，培養(yǎng)溫度為30±1°C，濕度30%-60%。
[0007] 與原工藝不同點(diǎn)：在發(fā)酵瓶培養(yǎng)48h后，每隔24h補(bǔ)加甘油和硫酸銨溶液：35%甘 油溶液，20%硫酸銨溶液，單獨(dú)滅菌后，取4ml20%硫酸銨溶液加入到50ml35%甘油溶液中，混 合均勻，從48h后，每隔24h補(bǔ)加 I. 5ml上述混合溶液。
[0008] (2)罐上工藝 種子罐工藝：溫度30 ± I °C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速130-150rpm，空氣流量1:1， 培養(yǎng)周期24h。
[0009] 移種條件：pH值升至7. 5以上，無(wú)菌正常，菌體量大，菌體染色較深，粗壯可移入發(fā) 酵罐，接種量10%。
[0010] 發(fā)酵瓶培養(yǎng)工藝為：溫度30 ±1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速根據(jù)溶氧情況調(diào) 節(jié)，溶氧> 30%，空氣流量1:1，轉(zhuǎn)速：150-260rpm， pH值用10%濃度氨水溶液控制在6. 6-7. 0,培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加甘油控制在5-10g/L。
[0011] 培養(yǎng)周期為160-170小時(shí)，放罐。
[0012] 與原工藝不同點(diǎn)：優(yōu)化后的配方需要在發(fā)酵罐培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加甘油，將甘油控制 在 5-10g/L。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果是： 1.丙三醇為液體碳源，更有利于菌體吸收利用。
[0014] 2.丙三醇是油性物質(zhì)，能夠有效的減少發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的泡沫。
[0015] 3.卵磷脂對(duì)甾醇的助溶效果優(yōu)于吐溫-80。
[0016] 4.卵磷脂能夠組成細(xì)胞膜，使細(xì)胞活化，能夠促進(jìn)菌體對(duì)甾醇的轉(zhuǎn)化。 5. 樹(shù)脂的去除，有利于后期提取，降低生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面通過(guò)50L罐實(shí)驗(yàn)例子對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，下述實(shí)例是說(shuō)明性的，不是限 定性的，不能以下述實(shí)例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0018] 一.種子制備： 將成熟斜面接種到一級(jí)種子瓶中，裝量為l〇〇ml/500ml，30 ± I °C，濕度30%-60%培 養(yǎng)48±6h，菌體量大，pH值達(dá)到7. 5左右，接種到二級(jí)種子瓶中，裝量為200ml/1000ml， 30± 1°C，濕度30%-60%培養(yǎng)48±6h，菌體量大，pH值達(dá)到7. 5左右，接種到5L種子罐中。
[0019] 二.種子罐培養(yǎng)： 種子罐培養(yǎng)工藝為：溫度30 土 1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速130-150rpm，空氣流 量1:1，培養(yǎng)周期24h。
[0020] 移種條件：pH值升至7. 5以上，無(wú)菌正常，菌體量大，菌體染色較深，粗壯可移入發(fā) 酵罐，接種量10%。
[0021] 三.發(fā)酵培養(yǎng)： 發(fā)酵瓶培養(yǎng)工藝為：溫度30 土 1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速根據(jù)溶氧情況調(diào)節(jié)， 溶氧> 30%，空氣流量1:1，轉(zhuǎn)速：150-260rpm， pH值用10%濃度氨水溶液控制在6. 6-7. 0,培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加甘油控制在5-10g/L。
[0022] 培養(yǎng)周期為160-170小時(shí)，放罐。
[0023] 四.以原配方工藝為對(duì)照，修改后的配方為試驗(yàn)，對(duì)比兩種配方的效果，結(jié)果如 下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化，其特征在于： 優(yōu)化后的種子配方為（g/L):丙三醇2. 5,氯化銨2. 5,磷酸二氫鉀0.08,七水硫酸鎂 〇.1，酵母粉20，？!1值7.0; 優(yōu)化后的發(fā)酵配方為（g/L):丙三醇25,黃豆餅粉45,硫酸銨4,七水硫酸鎂3,磷酸氫 二鉀2,酵母粉3,氯化錳0. 004,碳酸鈣15,植物甾醇30,卵磷脂3, pH值7. 0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化，其特征在于：發(fā)酵配方中所用的 助溶解劑為卵磷脂，其用量為3 g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化，其特征在于：種子配方中所用的 營(yíng)養(yǎng)劑為丙三醇，其用量為2.5 g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化，其特征在于：優(yōu)化后的配方需要 在發(fā)酵罐培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加甘油，將甘油控制在5?10g/L。
【專利摘要】本發(fā)明涉及雄烯二酮生產(chǎn)配方的優(yōu)化，營(yíng)養(yǎng)劑為丙三醇，助溶解劑為卵磷脂，優(yōu)化后的配方，發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的泡沫少，成本低，能夠有效地降低發(fā)酵染菌率，發(fā)酵后易于提取的雄烯二酮發(fā)酵新配方，更適宜發(fā)酵生產(chǎn)。
【IPC分類(lèi)】C12P33-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104561212
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310490547
【發(fā)明人】李瑾, 于新令, 劉祎禎
【申請(qǐng)人】山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月19日