用于抑制蛋白激酶3表達的方法
【專利說明】用于抑制蛋白激酶3表達的方法
[0001] 本申請是國際申請?zhí)朠CT/EP2007/006492，國際申請日2007年7月20日，進入中 國國家階段日期為2009年1月16日，中國申請?zhí)?00780026982.X，發(fā)明名稱為"用于抑制 蛋白激酶3表達的方法"的分案申請。
[0002] 本發(fā)明涉及適合于抑制蛋白激酶3(PKN3)表達的雙鏈核酸及其應(yīng)用。
[0003] F〇UldS(F〇Ulds，1958)將瘤發(fā)生描述為多級生物學(xué)過程，目前已知其通過累積 遺傳損害而發(fā)生。在分子水平上，該多級腫瘤發(fā)生過程包括破壞陽性和陰性調(diào)節(jié)效應(yīng)子 (Weinberg，1989)。Vogelstein及同事（Fearon和Vogelstein，1990)推定人類結(jié)腸癌的分 子基礎(chǔ)涉及許多癌基因、腫瘤抑制基因和修復(fù)基因。類似地，已將導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā) 展的缺陷與另一種腫瘤抑制基因聯(lián)系起來（Lee等，1987)。在多種其它惡性腫瘤中還識別 了其他癌基因和腫瘤阻抑基因。不幸地，僅有少量能夠治療的癌癥，且癌癥的影響是災(zāi)難性 的僅美國每年有超過50萬人死亡。
[0004] 癌癥從根本上是遺傳疾病，其中對細胞DNA的損傷導(dǎo)致控制細胞增殖的正常機制 的破壞。腫瘤阻抑基因維持基因組完整性的兩種作用機制是通過細胞停滯，由此容許修復(fù) 損傷的DNA，或通過程序性細胞死亡去除損傷的DNA(Ellisen和Haber，1998)。程序性細胞 死亡，另外稱為"程序性細胞死亡（programmedcelldeath)"，是小心地受到調(diào)節(jié)的生物化 學(xué)事件網(wǎng)絡(luò)，它起到以去除不可逆轉(zhuǎn)地受損細胞為目的的細胞自殺程序作用。程序性細胞 死亡能夠由許多方法觸發(fā)，包括結(jié)合腫瘤壞死因子，DNA損傷，生長因子的取消、和與Fas受 體的抗體交聯(lián)。盡管已經(jīng)識別了若干在程序性細胞死亡過程中起作用的基因，但是尚未完 全闡明引起程序性細胞死亡的途徑。許多研究者試圖以這樣的目標識別新型程序性細胞死 亡-促進基因，所述目標是該基因應(yīng)該提供選擇性地在腫瘤細胞中誘導(dǎo)程序性細胞死亡方 法，從而治療患者體內(nèi)的癌癥。
[0005] 治療癌癥的備選方法涉及用試劑，諸如Endostatin?或抗-VEGF抗體抑制血管發(fā) 生。在該方法中，目標是防止原發(fā)腫瘤的進一步血管化，并且潛在地，將轉(zhuǎn)移性病灶的尺寸 限制為在無充分血管生長的條件下能夠支持腫瘤細胞的存活。
[0006] 癌癥疾病的特殊組是在腫瘤生長速率、向正常組織中的入侵、對化學(xué)療法或其他 常規(guī)治療的抗性和形成遍及全身的轉(zhuǎn)移方面積極的那些癌癥疾病。在更積極的癌癥情形 中，癌癥組織更加不同于正常組織，且腫瘤更易于擴散。因此，當(dāng)前癌癥研究中的一個目的 是開發(fā)這樣的試劑，其抑制腫瘤生長和/或減少癌癥細胞遍及全身的擴散。
[0007] 對什么是積極癌癥疾病的定義可以從國家癌癥研究所主頁，即http://www. cancer.gov/Templates/dbalpha,aspx?CdrID= 46053獲得。此夕卜，為了描述癌癥疾病 的積極性，典型地使用分級，所述分級是這樣的系統(tǒng)，即根據(jù)在顯微鏡下檢查時它們表現(xiàn)出 的異常來分類癌癥細胞。分級系統(tǒng)的目的是提供關(guān)于腫瘤可能的生長速率的信息，及其擴 散趨勢。用于分級腫瘤的系統(tǒng)隨著各種類型的癌癥而變化。分級在治療決定中起作用。
[0008] 所述分級系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。其中之一是Gleason分數(shù)，即基于顯 微鏡下形態(tài)分級前列腺癌癥組織的系統(tǒng)。Gleason分數(shù)在2-10的范圍內(nèi)變化，并指示腫瘤 將擴散的可能性。低Gleason分數(shù)意味著該癌癥組織與正常前列腺組織類似，且該腫瘤具 有較低的擴散可能性；高Gleason分數(shù)意味著該癌癥組織與正常的非常不同，且該腫瘤更 可能擴散。
[0009]PKN3,也稱為蛋白激酶NP或PKNP，是與癌癥和腫瘤相關(guān)的有價值靶標。如在國 際專利申請W0 2004/019973中所述，蛋白激酶NP是PI-3激酶/PTEN通路的下游靶標，所 述通路與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)。特別地，后者作用似乎強烈地與抑制基因功能相關(guān)，更特別 地，與PTEN腫瘤抑制基因功能的喪失相關(guān)。如W0 2004/019973中所示，蛋白激酶卵在這 樣的條件下會受到上調(diào)作用，在所述條件中PTEN，即PI-3激酶通路的抑制劑，是無活性的。 由于蛋白激酶NP的上調(diào)作用，其中發(fā)生所述上調(diào)作用的細胞會顯示出轉(zhuǎn)移行為和遷移行 為的增加。這意味著蛋白激酶NP的抑制劑是用于控制細胞轉(zhuǎn)移和遷移行為的合適方法， 和用于治療腫瘤和癌癥，更特別地轉(zhuǎn)移的和其細胞顯示出轉(zhuǎn)移和/或遷移行為的那種腫瘤 和癌癥的合適方法。
[0010] 本領(lǐng)域中現(xiàn)在正需要用于治療腫瘤疾病的方法。更特別地，需要適合于積極的并 表現(xiàn)出入侵行為的那種腫瘤疾病的方法。
[0011] 還需要適合于影響血管形成，更特別地，在解釋腫瘤疾病的病理機制中所涉及的 血管形成的方法。這些需要定義了本發(fā)明待解決的問題。
[0012] 通過附加的獨立權(quán)利要求的主題解決了本發(fā)明待解決的問題?？梢詮膹膶贆?quán)利要 求獲得優(yōu)選的實施方案。
[0013] 通過雙鏈核酸分子解決了本發(fā)明待解決的問題，
[0014] -其中，所述雙鏈結(jié)構(gòu)包括第一鏈和第二鏈，
[0015] -其中，所述第一鏈包括連續(xù)核苷酸的第一段序列，并且所述第一段序列至少部分 地與靶核酸互補，和
[0016] -其中，所述第二鏈包括連續(xù)核苷酸的第二段序列，并且所述第二段序列至少部分 地與所述第一段序列互補，和
[0017] 其中，所述靶核酸是編碼PKN3的mRNA。
[0018] 更特別地，在第一方面中，通過包含雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸分子解決了本發(fā)明待解決的 問題，
[0019] 其中，所述雙鏈結(jié)構(gòu)包括第一鏈和第二鏈，
[0020] 其中，所述第一鏈包括連續(xù)核苷酸的第一段序列，并且所述第一段序列至少部分 地與靶核酸互補，和
[0021] 其中，所述第二鏈包括連續(xù)核苷酸的第二段序列，并且所述第二段序列至少部分 地與所述第一段序列互補，
[0022] 其中，所述第一段序列包括這樣的核酸序列，所述核酸序列至少部分地與按照 SEQ.ID.No. 1(NM_013355)的核酸序列的核苷酸核心序列或其一部分互補，
[0023] 其中，所述核苷酸核心序列包括來自下列各項的核苷酸序列：
[0024] 來自SEQ.ID.No. 1 的核苷酸位置 482-500 (SEQ.ID.No. 2);
[0025] 來自 SEQ.ID.No. 1 的核苷酸位置 1555-1573 (SEQ. ID.No. 4);
[0026] 來自 SEQ.ID.No. 1 的核苷酸位置 1556-1574 (SEQ. ID.No. 6);
[0027] 來自 SEQ.ID.No. 1 的核苷酸位置 1559-1577 (SEQ. ID.No. 8);
[0028] 來自 SEQ.ID.No. 1 的核苷酸位置 1566-1584 (SEQ. ID.No. 10);
[0029] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2094-2112 (SEQ.ID.No. 12);
[0030] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2102-2120 (SEQ.ID.No. 14);
[0031] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2286-2304 (SEQ.ID.No. 16);
[0032] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2761-2779 (SEQ.ID.No. 18);
[0033] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2763-2781 (SEQ.ID.No. 20);
[0034] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2764-2782 (SEQ.ID.No. 22);
[0035] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2843-2861 (SEQ.ID.No. 24);
[0036] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2844-2862 (SEQ.ID.No. 26);或
[0037] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 2846-2864 (SEQ.ID.No. 28);
[0038] 優(yōu)選地，所述核苷酸核心序列包括來自下列各項的核苷酸序列：
[0039] 來自 SEQ. ID.No. 1 的核苷酸位置 1