專利名稱:氨基酸衍生物的制備方法及其應用的制作方法
本發(fā)明涉及新的氨基酸衍生物及其在藥物學方面可接受的鹽類。尤其是它涉及的新氨基酸衍生物及其在藥物學方面可接受的鹽類具有下列藥理活性諸如對于免疫缺損宿主的被抑制的骨髓細胞集落形成能力有恢復作用，對于免疫缺損宿主的被抑制的抗體形成能力有恢復作用，對腫瘤轉(zhuǎn)移或類似情況有抑制活性;敘述了它們的制備方法，和含有上述氨基酸及其鹽的藥物組合物。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供新氨基酸衍生物和其在藥物學方面可接受的鹽類。
本發(fā)明的另一目的是提供上述氨基酸衍生物和其在藥物學方面可以接受的鹽類的制備方法，包括制備上述氨基酸及其鹽的合成方法和用在一營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于雙毛殼孢屬(Discosia)菌株的制備在那些化合物中的一個特殊化合物的發(fā)酵方法。
本發(fā)明的目的化合物能用下式(Ⅰ)表示。

其中R1是氫，氨基或一保護的氨基，
R2是氫，羧基或一保護的羧基，
R3是氫，羧基或一保護的羧基，
R4是低級烷基，氨基(低級)烷基，保護的氨基(低級)烷基，氨甲?；?低級)烷基或保護的氨甲?；?低級)烷基，
R5是氫或低級烷基，和
R6是氫，或(低級)烷基它們可以有一個(或多個)合適的取代基或雜環(huán)(低級)烷基。
按照本發(fā)明，該新氨基酸衍生物(Ⅰ)能用各種方法制備。
〔用合成方法制備〕



R1a是一保護的氨基，
R2a是一保護的羧基，
R4a是保護的氨甲?；?低級)烷基和
R6b是氨甲?；?低級)烷基。
起始化合物(Ⅲa)能用下列方法制備。


其中R2，R3，R5和R6各定義如上，
R7是氨基或一保護的氨基，和
R7a是一保護的氨基。
本發(fā)明目的化合物的制備方法詳細說明如下。
方法Ⅰ
化合物(Ⅰ)或其鹽能用化合物(Ⅱ)或它的羧基活潑衍生物或其鹽和化合物(Ⅲa)或它的氨基活潑衍生物或其鹽反應來制備。
化合物(Ⅲa)在氨基上的合適的活潑衍生物可以包括將化合物(Ⅲa)和羰基化合物諸如醛，酮或類似物反應形成的席夫堿類型的亞胺或它的互變的烯胺型異構(gòu)體;將化合物(Ⅲa)和甲硅烷基化合物諸如N，O-雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，N-三甲基甲硅烷基乙酰胺，雙(三甲基甲硅烷基)脲或類似物反應形成的甲硅烷基衍生物;用化合物(Ⅲa)和三氯化磷或光氣，及類似物反應形成的衍生物。
化合物(Ⅱ)和(Ⅲa)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
化合物(Ⅱ)在羧基上的合適的活潑衍生物可包括酰鹵，酸酐，活性酰胺，活性酯，及類似物。合適的例子可以是酰氯，疊氮酸;混合酸酐可與下列酸形成諸如取代磷酸(例如，二烷基磷酸，苯基磷酸，二苯基磷酸，二芐基磷酸，鹵代磷酸等等)，二烷基亞磷酸亞硫酸，硫代硫酸，低級鏈烷磺酸(例如，甲磺酸，乙磺酸等等)，硫酸，烷基碳酸，脂肪族羧酸(例如，新戊酸，戊酸，異戊酸，2-乙基丁酸或三氯乙酸等等)或芳香族羧酸(例如苯甲酸，等等);對稱的酸酐;與咪唑，4-取代咪唑，二甲基吡唑，三唑或四唑形成的活性酰胺;或活性酯(例如，氰基甲基酯，甲氧基甲基酯，二甲基亞氨基甲基〔(CH3)2
＝CH-〕酯，乙烯基酯，塊丙基酯，對-硝基苯基酯，2，4-二硝基苯基酯，三氯苯基酯，五氯苯基酯，甲磺酰基苯基酯，苯基偶氮苯基酯，苯基硫代酯，對-硝基苯基硫代酯，對-羥甲苯基硫代酯，羧基甲基硫代酯，吡喃基酯，吡啶基酯，四氫吡啶基酯，8-喹啉基硫代酯，等等)，或與N-羥基化合物(例如，N，N-二甲基羥基胺，1-羥基-2-(1H)-吡啶酮，N-羥基琥珀酰亞胺，N-羥基鄰苯二甲酰亞胺，1-羥基-6-氯-1H-苯并三唑，等等)，及類似物形成的酯?？筛鶕?jù)所用化合物(Ⅱ)的類型任意選擇這些活性衍生物。
反應通常在常用溶劑中進行諸如水，丙酮，二噁烷，乙腈，氯仿，二氯甲烷，氯化乙烯，四氫呋喃，乙酸乙酯，N，N-二甲基甲酰胺，吡啶或?qū)Ψ磻獰o不利影響的任何其它有機溶劑。這些常用溶劑也可與水混合使用。
當化合物(Ⅱ)在反應中用游離酸或其鹽的形式使用時，反應最好在有常用的縮合劑存在時進行縮合劑有諸如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺，N-環(huán)己基-N′-嗎啉代乙基碳二亞胺，N-環(huán)己基-N′-(4-二乙基氨基環(huán)己基)碳二亞胺，N，N′-二乙基碳二亞胺，N，N′-二異丙基碳二亞胺，N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，N，N′-羰基雙-(2-甲基咪唑)，五亞甲基乙烯酮-N-環(huán)己基亞胺，二苯基乙烯酮-N-環(huán)己基亞胺，乙氧基乙炔，1-烷氧基-1-氯代乙烯，三烷基亞磷酸鹽，乙基多磷酸鹽，異丙基多磷酸鹽，氯化氧磷，三氯化磷，亞硫酰氯，草酰氯，三苯基膦，2-乙基-7-羥基苯并異噁唑鹽，2-乙基-5-(間-磺基苯基)異噁唑氫氧化物分子內(nèi)鹽，1-(對-氯苯磺?；?-6-氯-1H-苯并三唑;用N，N-二甲基甲酰胺與亞硫酰氯，光氣，氯化氧磷，等等反應制得的所謂維爾斯邁爾(Vilrmeier)試劑，或類似物。
反應也可以在無機或有機堿存在時進行諸如堿金屬碳酸氫鹽，三(低級)烷基胺，吡啶，N-(低級)烷基嗎啉，N，N-二(低級)烷基芐胺，或類似物。反應溫度并不緊要，反應常在冷卻或室溫中進行。
方法2
化合物(Ⅰb)或其鹽能用化合物(Ⅰa)或其鹽經(jīng)氨基保護基團的消去反應來制備。
化合物(Ⅰa)和(Ⅰb)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
消去反應按常規(guī)方法進行諸如水解，還原，用亞氨基鹵化試劑，亞氨基醚化試劑處理化合物(Ⅰa)(其中R1a為酰氨基)的一種方法，必要時，再將產(chǎn)物進行水解，或類似的反應。水解可包括用酸或堿或肼及類似的方法。這些方法可隨要消去的保護基團的類型來選擇。
在這些方法中，酸水解是一種最普通和最好的方法用來消去保護基團諸如取代的或未取代的烷氧基羰基，例如，叔-戊烷氧基羰基;低級鏈烷?；?例如，甲?；阴；?，等等);環(huán)烷氧基羰基;取代的或未取代的芳烷氧基羰基;芳烷基(例如，三苯甲基);取代的苯基硫代基取代的芳亞烷基;取代的亞烷基;取代的環(huán)亞烷基或類似基團。
合適的酸包括有機，無機酸或路易斯酸諸如甲酸，三氟乙酸，苯磺酸，對-甲苯磺酸。鹽酸，氫溴酸，三鹵化硼(例如，三氟化硼，三溴化硼，等等)，和類似物。
酸可根據(jù)要消去的保護基團的類型來選擇。當消去反應用酸進行時，可有溶劑或沒有溶劑。合適的溶劑包括水，常用的有機溶劑或其混合物。
用三氟乙酸的消去反應可在苯甲醚存在下進行。用肼水解通常用于消去鄰苯二甲酰，琥珀酰型的氨基保護基。
用堿的水解最好用于消去酰基。合適的堿可包括，例如，無機堿諸如堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，等等)，堿土金屬氫氧化物(例如氫氧化鎂，氫氧化鈣，等等)，堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉，碳酸鉀，等等)，堿土金屬碳酸鹽(例如碳酸鎂，碳酸鈣，等等)，堿金屬碳酸氫鹽(例如碳酸氫鈉，碳酸氫鉀，等等)，堿金屬醋酸鹽(例如醋酸鈉，醋酸鉀，等等)，堿土金屬磷酸鹽(例如磷酸鎂，磷酸鈣，等等)，堿金屬磷酸氫鹽(例如磷酸氫二鈉，磷酸氫二鉀，等等)，或類似物，和有機堿諸如三烷基胺(例如三甲基胺，三乙基胺，等等)，甲基吡啶，N-甲基吡咯烷，N-甲基嗎啉，1，5-二氮雜二環(huán)〔4，3，0)壬-5-烯，1，4-二氮雜二環(huán)〔2.2.2〕辛烷，1，5-二氮雜二環(huán)〔5，4，0〕+-烯-5-或類似物。用堿的水解常在水或親水的有機溶劑或其混合溶劑中進行。
還原消去一般用于消去的保護基團，例如，鹵代烷氧羰基(例如三氯乙氧羰基，等等)，取代的或未取代的芳烷氧羰基(例如芐氧羰基，等等)，2-吡啶基甲氧羰基，等等。合適的還原可包括，例如，用堿金屬氫硼化物還原(例如氫硼化鈉，等等)，用金屬(例如錫，鋅，鐵，等等)或上述金屬一起和金屬鹽化合物(例如氟化亞鉻，乙酸亞鉻，等等)和有機酸或無機酸(例如乙酸，丙酸，鹽酸，等等)共同還原;和催化還原。合適的催化劑包括常用的，例如，阮內(nèi)鎳，氧化鉑，鈀碳和類似物。
在保護基團中，?；话阌盟庀?。特殊的是，鹵素取代的烷氧羰基和8-喹啉基氧羰基基團通常用重金屬諸如銅，鋅，或類似物處理來消去。
在保護基團中，?；材苡脕啺被u化試劑(例如氯化氧磷，等等)和亞氨基醚化試劑諸如低級鏈烷醇(例如甲醇，乙醇，等等)處理來消去，如有必要，接著水解。
反應溫度不是緊要的可按照氨基保護基團的類型和上面提到的消去方法作適當?shù)倪x擇，反應最好是在溫和的條件如在冷卻下或稍微提高的溫度進行。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括下述情況，即在上面提到的消去反應過程中，或在反應混合物或反應產(chǎn)物的后處理中，將在R4中保護的氨基(低級)烷基和/或保護的氨甲?；?低級)烷基轉(zhuǎn)變成氨基(低級)烷基和/或氨甲?；?低級)烷基。
方法3
化合物(Ⅰd)或其鹽能用化合物(Ⅰc)或其鹽經(jīng)羧基保護基團的消去反應來制備。
化合物(Ⅰc)和(Ⅰd)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
本反應按常規(guī)方法諸如水解，還原或類似反應進行。
在保護基團是酯的情況中，保護基團能用水解消去。水解最好在有堿或酸存在時進行。合適的堿可包括無機堿和有機堿諸如堿金屬(例如鈉，鉀，等等)，堿土金屬(例如鎂，鈣，等等)，它們的氫氧化物或碳酸鹽或碳酸氫鹽，三烷基胺(例如三甲基胺，三乙基胺，等等)，甲基吡啶，1，5-二氮雜二環(huán)〔4.3.0〕壬-5-烯，1，4-二氮雜二環(huán)〔2，2，2〕辛烷，1，8-二氮雜二環(huán)〔5，4，0〕+-烯-7，或類似物。合適的酸可包括有機酸(例如甲酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，等等)和無機酸(例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，等等)。用三氟乙酸的酸水解常加入苯甲醚以促進反應。
反應通常在溶劑中進行，諸如水，二氯甲烷，醇(例如甲醇，乙醇，等等)，其混合物或?qū)Ψ磻獰o不利影響的任何其它溶劑。液體堿或酸亦能用作溶劑。反應溫度不是緊要的反應通常在冷卻到溫熱時進行。
最好用還原來消去的保護基團有諸如4-硝基芐基，2-碘乙基，2，2，2-三氯乙基，或類似基團。
還原以常規(guī)的方式進行，包括化學還原和催化還原。
化學還原中可用的合適的還原劑為金屬(例如錫，鋅，鐵，等等)或金屬化合物(例如氯化鉻，乙酸鉻，等等)和有機或無機酸(例如甲酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，對-甲基苯磺酸，鹽酸，氫溴酸，等等)合併應用。
催化還原中使用的合適的催化劑為常用的一些，諸如鉑催化劑(例如白金片，海綿鉑，鉑黑，膠態(tài)鉑，氧化鉑，鉑絲，等等)，鈀催化劑(例如海綿鈀，鈀黑，氧化鈀，鈀碳，膠態(tài)鈀，鈀硫酸鋇，鈀碳酸鋇，等等)，鎳催化劑(例如還原鎳，氧化鎳，阮內(nèi)鎳，等等)，鈷催化劑(例如還原鈷，阮內(nèi)鈷，等等)，鐵催化劑(例如還原鐵，阮內(nèi)鐵，等等)，銅催化劑(例如還原銅，阮內(nèi)銅，烏爾曼銅，等等)和類似物。
還原通常在溶劑中進行諸如水，醇(例如甲醇，乙醇，等等)，N，N-二甲基甲酰胺，四氫呋喃，它們的混合溶劑或?qū)Ψ磻獰o不利影響的任何其它溶劑。另外，在化學還原中當上面提到的使用的酸為液態(tài)的情況時，酸亦可用作溶劑。
該還原的反應溫度不是緊要的反應通常在冷卻到溫熱下進行。
方法4
化合物(Ⅰf)或其鹽能用化合物(Ⅰe)或其鹽經(jīng)氨甲?；Ｗo基團的消去反應來制備。
化合物(Ⅰe)和(Ⅰf)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
本消去反應能與方法2相似的方式進行。
制備起始化合物的方法詳細說明如下。
方法A
化合物(Ⅴ)或其鹽能用化合物(Ⅳ)或其鹽經(jīng)氧化反應來制備。化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
可適用于此反應的氧化方法包括，例如，用二甲基亞砜，N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺與酸(例如正磷酸，三氟乙酸，等等)相結(jié)合來氧化，用鉻酐吡啶復合物氧化，和類似的方法。
此反應通常在溶劑中進行諸如醇(例如甲醇，乙醇，等等)，二氯甲烷，苯，N，N-二甲基甲酰胺，四氫呋喃，乙醚或?qū)Ψ磻獰o不利影響的任何其它溶劑。
反應溫度不是關(guān)鍵的反應通常在冷卻到加熱下進行。
方法B
化合物(Ⅱ)或其鹽能用化合物(Ⅴ)或其鹽與化合物(Ⅵ)或其鹽反應，然后將產(chǎn)生的化合物經(jīng)還原反應來制備。
化合物(Ⅲ)和(Ⅵ)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽?？蛇m用于此反應的還原方法包括，例如，用硼烷衍生物還原(例如硼氫化鈉，氰基硼氫化鈉，等等)，用金屬(例如錫，鋅，鐵，等等)或所述金屬和金屬鹽化合物一起(例如氯化亞鉻，乙酸亞鉻，等等)和有機或無機酸(例如乙酸，丙酸，鹽酸，等等)合併應用來還原;和催化還原。合適的催化劑包括常用的，例如，阮內(nèi)鎳，氧化鉑，鈀碳和類似物。
此反應通常在溶劑中進行諸如醇(例如甲醇，乙醇，等等)，苯，N，N-二甲基甲酰胺，四氫呋喃，乙醚或?qū)Ψ磻獰o不利影響的任何其它溶劑。
反應溫度不是緊要的反應通常在冷卻到加熱時進行。
方法C
化合物(Ⅲa)及其鹽能用化合物(Ⅲb)或其鹽經(jīng)氨基保護基團的消去反應來制備?；衔?Ⅲb)和(Ⅲa)的合適的鹽可參看化合物(Ⅰ)例舉的那些鹽。
該消去反應實質(zhì)上可按方法2相同的方式進行。
本反應在其范圍內(nèi)包括下述情況，在上面提到的消去反應過程中，或在反應混合物或反應產(chǎn)物的后處理中，將R2和/或R3的保護羧基轉(zhuǎn)變成游離羧基。
〔用發(fā)酵方法制備〕
在本反明的目的化合物中，一個特殊化合物(后面稱為FR-900490)能用發(fā)酵制備。并且，所述FR-900490具有下列理化性質(zhì)
(a)外觀
白色粉末
(b)分解點
172-174℃
(c)光學旋光度
〔α〕23D＝+17.5°(C＝1.0，H2O)
(d)分子量
370〔次級離子質(zhì)譜m/z371(M+1)〕
(e)元素分析(%)
C40.55;H6.19;N20.45
(f)紫外吸收光譜
末端吸收(在H2O中)
(g)紅外吸收光譜
νKBrMax3400，2920，1680，1620，1390，1100cm-1
(h)1H核磁共振光譜(D2O)
δppm8.01(1H，s)，7.17(1H，s)，4.44(1H，d，J＝5.0Hz)，4.24(1H，dd，J＝4.95Hz and 7.91Hz)，3.99(1H，dd，J＝5.3Hz and 8.2Hz)，3.55(1H，m)，3.30(1H，dd，
J＝5.3Hz and 15.0Hz)，3.16(1H，dd，J＝8.2Hz and 15.0Hz)，2.96(1H，dd，J＝4.95Hz and 16.5Hz)，2.83(1H，dd，J＝7.91Hz and 16.5Hz)，1.16(3H，d，J＝6.6Hz)
s 單峰 d 雙峰 dd 二組雙峰
(i)13C核磁共振光譜(D2O)
δppm174.3(s)，174.3(s)，174.2(s)，171.1(s)，136.4(d)，131.7(s)，117.5(d)，60.2(d)，56.1(d)，53.6(d)，51.0(d)，36.7(t)，28.3(t)，12.5(q)
t 三重峰 q 四重峰
(j)溶解度
可溶的水
微溶的甲醇，乙醇
不溶的乙酸乙酯，氯仿，丙酮
(k)顏色反應
正茚三酮反應，與碘蒸氣反應，與硫酸鈰反應，與高錳酸鉀反應
負三氯化鐵反應，德拉根道夫試劑，摩立許反應，磷鉬酸反應
(l)物質(zhì)的性質(zhì)
兩性物質(zhì)
(m)薄層色譜(硅膠板)
溶劑 Rf值
正-丁醇∶乙酸∶水 0.27
(2∶1∶2)
正-丁醇∶乙醇∶氯仿∶28%氨水 0.22
(2∶2∶1∶2)
7070異丙醇水溶液 0.25
(含0.28%氨)
FR-900490能用在一營養(yǎng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一種屬于雙毛殼孢(Discosia)屬能產(chǎn)生FR-900490的菌株諸如雙毛殼孢sp.F-11809和類似物，以及從培養(yǎng)液中回收FR-900490來制備。
在屬于雙毛殼孢屬能產(chǎn)生FR-900490的菌株中，雙毛殼孢屬sp.F-11809是由本發(fā)明者從在日本京都府高雄山山腳下收集到的泥土樣品中新分離出來的。
新分離的雙毛殼孢屬sp.F-11809的冷凍干燥樣品于1985年1月25日以FERM P-8070號碼已存入日本茨城縣筑波郡谷田部町東No.1-1-3，工業(yè)科學與技術(shù)研究院發(fā)酵研究所，然后在1986年2月8日轉(zhuǎn)至同一存放處的布達佩斯條約線上，新存放號碼為FERM BP-982。
要知道新化合物FR-900490的產(chǎn)生并不限于用這里面描述的特定生物體，這里提出它只是用以說明。本發(fā)明也包括使用能夠產(chǎn)生FR-900490的任何突變體，包括天然的突變體和人工的突變體，后者能從所描述的生物體用常規(guī)方法，諸如X射線，紫外照射，用N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍，2-氨基嘌呤和類似物處理而產(chǎn)生。
雙毛殼孢屬sp.F-11809具有下列形態(tài)的，培養(yǎng)的和生理的特征。
當在各種培養(yǎng)基上無完整形態(tài)發(fā)育時，在玉米粉瓊脂上觀察到豐富的菌絲的分生孢子器，在一片用菌株F-11809的分生孢子接種的葉碎片上形成許多分生孢子器。分生孢子的發(fā)生是全裂的，分生孢子是單生的。
分生孢子器是沉浸的，分散或聚集的，扁平子座的，乳頭狀的，直徑200-400微米和高40-80微米。有一小孔的乳頭狀的小突起直徑為20-50微米，分生孢子器壁由幾層深棕色細胞組成。沒有分生孢子梗。在分生孢子器內(nèi)壁較低層處形成的分生孢子發(fā)生細胞是倒梨形狀到葫蘆狀的，長7-10微米和厚4-5微米逐漸縮減在頂點成2微米厚。分生孢子是近于透明的，光滑的，圓柱形到臘腸形的，有隔膜分隔為三，在底部截成平面，長15-22(-25)微米和厚2.5-3.5微米。它們的頂端細胞和基底細胞靠近隔膜處各有一細剛毛。細剛毛是不分枝的，絲狀的，長12-20(-30)微米和厚0.5-1微米。
生長型的菌絲是有隔膜分隔的，近于透明到深棕色，光滑且分枝。菌絲細胞呈圓筒形或桶形，厚1.5-4微米。不存在厚壁孢子，但由不規(guī)則細胞組成的子座的菌絲團在某些培養(yǎng)基上形成。
菌落在麥芽汁瓊脂上寬闊地擴展，在25℃2周后直徑達8.0厘米。菌落的表面呈平面，氈狀，在中心處有皺紋，一圈一圈的生長，淡橄欖灰色到橄欖灰色。分生孢子的構(gòu)造未展現(xiàn)。背面是橄欖黑色或深橄欖色。在相同條件下玉米粉瓊脂的培養(yǎng)物直徑達7.5厘米。表面呈平面，薄，氈狀，帶灰色的黃棕色到帶棕色的灰色。背面相同。在許多位置上分生孢子茂盛地形成，且在瓊脂培養(yǎng)基中間或面上產(chǎn)生深棕色菌絲團。
菌株F-11809生長的溫度范圍自2到34℃，在24到31℃為生長最適宜點。這些溫度數(shù)據(jù)是用一個有溫度梯度變化的細菌培養(yǎng)器東洋化學(Toyo Kagaku工業(yè)株式會社Sangyo Co.，Ltd，)在馬鈴薯葡萄糖瓊脂上測定的。此菌株能在pH3到9生長，在YM液體培養(yǎng)基(Difco)中pH6到7為生長最適宜點。
從上面提到的特征，看來菌株F-11809屬于絲孢菌屬雙毛殼孢屬。該屬分成五種已敘述過的品種加上三種由Subramanian和Chandra-Reddy(Kavaka 2∶57-89，1974)根據(jù)分生孢子的特性劃定的其它品種。
根據(jù)他們的標準，我們的菌株類似于Discosia Strobi-lina Libert，但它的分生孢子的特征(即分生孢子附件的位置等等)常隨培養(yǎng)條件變化。于是，我們確定菌株F-11809為雙毛殼孢屬的一個菌株，并命名為雙毛殼孢屬sp.F-11809。
一般，F(xiàn)R-900490能用在一含有可同化的碳和氣來源的營養(yǎng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一能產(chǎn)生FR-900490的菌株來制備，最好是在需氧條件(例如振蕩培養(yǎng)，深層培養(yǎng)，等等)下進行。
在營養(yǎng)培養(yǎng)基中最好的碳的來源是碳水化合物諸如葡萄糖，果糖，甘油和淀粉。其它來源可包括乳糖，阿刺伯糖，木糖，糊精，糖漿及類似物。
氮的最好來源是酵母膏，胨，谷蛋白粉，棉子粉，大豆粉，玉米漿，干酵母，等等，以及無機和有機氮化合物諸如銨鹽(例如硝酸銨，硫酸銨，磷酸銨，等等)，尿素，氨基酸和類似物。
碳和氮源，雖然合併使用是有利的，但不需要用它們的純品，因為不太純的材料含有痕跡量生長因子和相當量的礦物質(zhì)營養(yǎng)物亦是適用的。當需要時，可在培養(yǎng)基中加入無機鹽如碳酸鈣，磷酸鈉或磷酸鉀，碘化鈉或碘化鉀，鎂鹽，氯化鈷和類似物。如有必要，特別是當培養(yǎng)基顯著地起泡沫時，可加入消泡沫劑諸如液體石臘，高級醇，植物油，礦物油和聚硅酮。
作為大量生產(chǎn)的條件，對于FR-900490的生產(chǎn)，深層需氣培養(yǎng)條件是優(yōu)先的。對于小量制備，則用在燒瓶或瓶子內(nèi)振蕩或表面培養(yǎng)。此外，當培養(yǎng)在大罐中進行時，為了在FR-900490的生產(chǎn)過程中避免生長滯緩最好在生產(chǎn)罐中接種生長型的生物體。因此，首先要求將生物體的芽孢或菌絲體接種到較小量的培養(yǎng)基并培養(yǎng)該接種3的培養(yǎng)基來產(chǎn)生生物體的生長型菌種，然后無菌地把培養(yǎng)的生長型菌種轉(zhuǎn)移入大罐。作為生產(chǎn)生長型菌種用的培養(yǎng)基可以用與主要生產(chǎn)FR-900490使用的培養(yǎng)基實質(zhì)上相同的或有些不同的。
培養(yǎng)混合物的攪拌和通氣可用多種方法來完成。攪拌可用螺旋漿或類似的機械攪拌設備、旋攪或搖動發(fā)酵物，用不同的泵類設備或者使消毒空氣通過介質(zhì)。通氣則可用消毒空氣通過發(fā)酵混合物。
發(fā)酵通常是在溫度20℃至40℃，最好是在25～30℃之間進行，時間為50～100小時，時間可視發(fā)酵條件和規(guī)模而改變。
所產(chǎn)生的FR-900490可用常規(guī)方法從培養(yǎng)劑中回收到，這種常規(guī)方法常用來從其他發(fā)酵產(chǎn)物中回收產(chǎn)品，如抗生素。
一般來說，大多數(shù)FR-900490產(chǎn)物是在培養(yǎng)濾液中，因此FR-900490可以從濾液中分離出來。將液體培養(yǎng)基過濾或離心得到濾液，再用常規(guī)方法如減壓濃縮，冷凍干燥，用常用的溶劑提取，酸堿度pH的調(diào)節(jié)，用常用的樹脂(如陰離子或陽離子交換樹脂，非離子的吸附樹脂)處理，用常用的吸附劑(如活性炭，硅酸，硅膠，纖維素，氧化鋁)處理，結(jié)晶，重結(jié)晶等方法即可得到。
從以上物理和化學性質(zhì)的分析，以及進一步對化學結(jié)構(gòu)的鑒定研究結(jié)果，證明FR-400490的化學結(jié)構(gòu)如下

(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
適宜于目的物(Ⅰ)的藥物學方面可接受的鹽是一般無毒性的鹽。以及包括金屬鹽如堿金屬鹽(如鈉鹽，鉀鹽等)，及堿土金屬鹽(如鈣鹽，鎂鹽，等)，銨鹽，有機堿鹽(如三甲胺鹽，三乙胺鹽，吡啶鹽，甲基吡啶鹽，二環(huán)己胺鹽，NN′-二芐基乙二胺鹽等)，有機酸鹽(如醋酸鹽，順丁烯二酸鹽，酒石酸鹽，甲基磺酸鹽，苯磺酸鹽，甲酸鹽，甲苯磺酸鹽等)，無機鹽(如鹽酸鹽，溴氫酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽等)，或與氨基酸的鹽(如精氨酸，天門冬氨酸，谷氨酸等)，及類似物。
本說明書的上述及后來的描述中，適當?shù)睦蛹氨景l(fā)明所包括范圍內(nèi)的各種定義的說明詳細介釋于下。
“低級的”(“LOWer”)一詞意指1至6碳原子，除非有其他所指。
在名稱“保護的氨基(低級)烷基”中合適的“保護的氨基”及“保護的氨基基團”可包括酰氨基或用常規(guī)保護基取代的氨基如芳(低級)烷基，它只少有一個(或多個)合適的取代基(如芐基，三苯甲基等)等等。
在酰氨基(acylamino)名稱中適宜的?；鶊F可以包括氨甲?；?，脂肪?；约昂幸粋€芳香環(huán)或雜環(huán)的?；鶊F，所述的酰基的適宜的例子可以是低級烷鏈?；?如甲?；?，乙?；?，丙酰基，丁?；惗□；祯；?，異戊?；?，草?；牾；挛祯；?，低級烷氧羰基(如甲氧羰基，乙氧羰基，丙氧羰基，1-環(huán)丙基乙氧羰基，異丙氧羰基，丁氧羰基，叔-丁氧羰基，戊氧羰基，己氧羰基，等);低烷磺酰基(如甲磺?；一酋；酋；?，異丙磺?；?，丁磺酰基，等);
芳磺酰基(如苯磺?；?，甲苯磺?；?;
芳?；?如苯甲?；?，甲苯酰基，二甲苯?；?，萘?；彵锦；?，2二氫化茚羰基，等);
芳(低級)烷鏈?；?如苯乙?；?，苯丙?；?;芳(低級)烷氧羰基(如芐氧羰基，苯乙氧羰基，等)，等等
上述的?；鶊F可以至少有一個(或多個)適宜的取代基如鹵素(氯，溴，氟及碘)等等。
適宜的“保護的羧基”可包括一酯化了的羧基及類似物。
酯化基團在所述酯化的羧基中的適合例子可以是這些如低級烷基酯(如甲酯，乙酯，丙酯，異丙酯，丁酯，異丁酯，叔-丁酯，戊酯，己酯，1-環(huán)丙基乙酯，等，)他們可以至少有一個(或多個)適宜的取代基，例如低級烷鏈酰氧(低級)一烷酯〔如乙酰氧甲基酯，丙酰氧甲基酯，丁酰氧甲基酯，戊酰氧甲基酯，新戊酰氧甲基酯，己酰氧甲基酯，1(或2)-乙酰氧乙基酯，1(或2或3)-乙酰氧丙基酯，1(或2或3或4)-乙酰氧丁基酯，1(或2)-丙酰氧乙基酯，1(或2或3)-丙酰氧丙基酯，1(或2)一個酰氧乙基酯，1(或2)-異丁酰氧乙基酯，1(或2)-新戊酰氧乙基酯，1(或2)-己酰氧乙基酯，異丁酰氧甲基酯，2-乙基丁酰氧甲基酯，3，3-二甲基丁酰氧甲基酯，1(或2)-戊酰氧乙基酯，等)，低級烷基磺酰(低級)烷基酯(如2-甲磺酰乙基酯，等)，單(或二或三)-鹵代(低級)烷基酯(如2-碘乙基酯，2，2，2-三氯乙基酯，等)，低級烷氧羰基氧(低級)烷基酯(如甲氧羰基氧甲酯，乙氧羰基氧甲基酯，2-甲氧羰基氧乙基酯，1-乙氧羰基氧乙基酯，1-異丙氧羰基氧乙基酯，等)，或苯并〔C〕呋喃酮亞基(低級)烷基酯;低級烷烯酯(如乙烯基酯，丙烯基酯，等);低級炔酯(如乙炔酯，丙炔酯，等);
芳(低級)烷基酯(如單(或二或三)苯基-(低級)烷基酯，等)他們可以具有至少一個(或多個)適宜的取代基(如芐酯，4-甲氧基芐酯，4-硝基芐酯，苯乙基酯，三苯甲基酯，二苯甲基酯，雙(甲氧基苯基)甲基酯，3，4-二甲氧基芐酯，4-羥基-3，5-二-叔-丁基芐酯，等);
芳基酯可以有至少一個(或多個)適宜的取代基(如苯基酯，4-氯苯酯，甲苯酯，叔-丁基苯酯，二甲苯酯，三甲苯酯，異丙苯基酯，等)及類似物。
在名稱“氨基(低級)烷基”，“保護氨基(低級)一烷基”，“氨甲?；?低級)烷基”，“保護氨甲酰基(低級)烷基”，可以具有適宜取代基(或多個)”“的芳(低級)烷基”及“雜環(huán)(低級)烷基”中適宜的“低級烷基”及低級烷基基團”可以包含直鏈或支鏈飽和脂肪碳氫化合物殘基如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，新戊基，叔戊基，己基，及類似物。
氨甲?；倪m宜保護基可以包括若(低級)烷基酯，〔如，單(或二或三)-苯基(低級)烷酯等〕。他們可以有適宜的取代基(如2，4-二甲氧基芐酯，雙(甲氧基苯基)甲基酯，等)，及類似物。
適宜的“芳基團”在名稱“可有適宜取代基(或多個)的芳(低級)烷基”中可以包括苯，萘等等。
在名稱“雜環(huán)(低級)烷基”中適宜的“雜環(huán)基團”可包含至少有一個雜原子選自氮，硫及氧原子，以及可以包括飽和的或不飽和的，單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基團，最好的雜環(huán)基團可以是含N雜環(huán)基團如不飽和的3至6員含有1至4個氮原子的單雜環(huán)，例如，吡咯基，吡咯啉基，咪唑基，吡唑基，吡啶基及他們的N-氧化物，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基，三唑基(如4H-1，2，4-三唑，1H-1，2，3-三唑，2H-1，2，3-三唑，等)，四唑(如1H-四唑，2H-四唑，等)等等;
飽和的3至6員包含有1至4個氮原子的單環(huán)基團(如吡咯烷基，咪唑烷基，六氫吡啶基，哌嗪基，等);
不飽和含有1至5個氮原子的稠雜環(huán)基團例如，吲哚基，異吲哚基，中氮茚基，苯并咪唑基，喹啉基，異喹啉基，吲唑基，苯并三唑基，四唑并達嗪基(如四唑〔1，5-b〕達嗪基等)等等。
不飽和的3至6員含1至2個氨原子及1至3個氮原子的雜單環(huán)基團，例如，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基(如1，2，4-噁二唑，1，3，4-噁二唑，1，2，5-噁二唑等)，等等。
飽和的3至6員含1至2個氧原子及1至3個氮原子的雜單環(huán)基團(如嗎啡啉基，等);
不飽和含1至2個氧原子及1至3個氮原子的稠雜環(huán)基團(如苯并噁唑基，苯并噁二唑基，等);
不飽和的3至6員含1至2個硫原子及1至3個氮原子的雜單環(huán)基團，例如，噻唑基，噻二唑基(如1，2，4-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基等)，等等。
飽和的3至6員包含1至2個硫原子及1至3個氮原子的雜單環(huán)基團(如，噻唑烷基等);
不飽和的含1至2個硫原子及1至3個氮原子的稠雜環(huán)基團(如，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，等)及類似物。
目的化合物(Ⅰ)的好實施方案如下。
較好實施例為
R1是氫，氨基或保護的氨基(更好的是乙酰氨基，最好的是低級烷氧羰基氨基，芳(低級)烷氧羰基氨基或低級烷酰氨基〕，
R2是氫，羧基或保護的羧基團〔更好的是酯化了的羧基，最好的是低級烷氧羰基〕，
R3是氫或羧基
R4是低級烷基，氨基(低級)烷基，保護的氨基(低級)烷基〔更好的是乙酰氨基(低級)烷基，最好的是芳(低級)烷氧羰基氨基(低級)烷基〕，氨甲?；?低級)烷基或保護的氨甲?；?低級)烷基〔更好的是〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；?低級)烷基〕，
R5是氫或低級烷基，及
R6是氫，羧基苯(低級)烷基或雜環(huán)(低級)烷基〔更好的是咪唑基(低級)烷基或吲哚基(低級)烷基〕。
為了要說明目的化合物的有用性，有代表性化合物的一些生物性質(zhì)，由下列試驗詳細說明。
試驗化合物
(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸?！睩R-900490〕
試驗1
對免疫缺損宿主骨髓細胞的抑制集落形成能力的促恢復作用
BDF1小鼠(雌性，年令8星期)得自日本浜松Hamamatsu，靜岡Shizoka供應動物實驗室農(nóng)業(yè)合作聯(lián)合體，每天給小鼠腹膜內(nèi)注射絲裂霉素C(1毫克/千克)，共2天以及FR-900490也每天給小鼠腹膜內(nèi)注射，共5天。
在第一次給絲裂霉素后第9天，小鼠處死并測骨髓細胞的集落形成能力(CFu-C)。以上試驗列表于下。
給與絲裂霉素C

用補充有青霉素G(100單位/毫升)，鏈霉素100微克/毫升)及5%的牛胎血清(FBS)的α-最低必需培養(yǎng)基(α-MEM)沖洗小鼠骨腔以收集股骨骨髓。骨髓細胞經(jīng)離心(500X克，10分鐘)成顆粒狀并重新懸浮在強化的α-MEM中。單核細胞在血球計數(shù)器中計數(shù)，細胞稀釋至1×105個細胞/毫升。然后，1毫升骨髓細胞，1毫升FBS，2毫升2.2%甲基纖維素在α-MEM中，和1毫升L-929細胞調(diào)節(jié)好的培養(yǎng)基加入至一消毒3的管子中并用自動混合器混合。1毫升混合物平置于35毫米塑料陪替氏培養(yǎng)皿中在充分潮濕的含5%CO2的空氣中孵育7天。
每個實驗準備一式三份的盤子。
50個或更多細胞組成的集落在內(nèi)翻顯微鏡下記錄
結(jié)果如表1中所示

＊＊P＜0.01(n＝7-9)
＊對照組(1)的動物不給絲裂霉素也不給FR-900490
＊＊對照組(2)的動物不給絲裂霉素也不給FR-900490，在孵育骨髓細胞時亦未用L-929細胞調(diào)節(jié)好的培養(yǎng)基。
＊＊＊對照組(3)的動物不給FR-900490
試驗2
對腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用
B-16黑素瘤細胞生長在魯斯威爾Roswel派克Park紀念Memorial研究所Institute(RPMI)的-1640培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基已補充有青霉素G(100單位/毫升)，鏈霉素(100微克/毫升)及10%FB3至近于融合，單細胞層用胰蛋白酶水溶液沖洗。
將含有上面所描述的抗菌素的Hanks′平衡鹽(HBS)溶液(無鈣-鎂)加到單細胞層上，及和緩地用移液法移去單細胞層，用含上述抗菌素的HBS溶液用離心法洗細胞。細胞重新懸浮在含七述抗菌素的HBS溶液中，低溫保存。給BDF1小鼠(雌性，年令8星期)靜脈注射帶有B-16黑素瘤2×105個細胞的0.2毫升含上述抗菌素的HBS溶液。在注射B-16黑素瘤前一天及前二天以及注射后一天及四天給FR-900490，每天一次。在注射B-16黑素瘤后第14天小鼠處死，取出肺，用含有肝素的蒸餾水浸洗，在解剖顯微鏡下用表面集落計數(shù)來定腫瘤病灶的數(shù)目。
上面試驗的安排表列于下。

結(jié)果于表2所示。
表2

＊＊P＜0.01(n＝10)
試驗3
FR-900490的急性毒性
給ddY小鼠(雌性，年齡5星期)靜脈注射以進行FR-900490的急性毒性試驗，用1000毫克/千克的劑量時，沒有發(fā)現(xiàn)有小鼠死亡。
試驗4
對于免疫缺損宿主的被抑制的抗體形成能力的促恢復作用
BDF1小鼠(雌性，年齡8星期)在用5×108羊紅血細胞(SRBC)免疫前4天，每天腹腔注射絲裂霉素C(1毫克/千克)，共3天。
試樣也在小鼠免疫前4天，每天腹腔內(nèi)注射，共5天
在第9天，小鼠處死并用Cunningham改良方法測每個脾的直接空斑形成細胞的數(shù)目(空斑形成細胞-羊紅血細胞/脾
上述試驗的安排表如下。

結(jié)果于表3所示
表3

＊動物未給以絲裂霉素C
本發(fā)明的藥物組合物能用一般藥劑的制備形式，例如固體，半固體或液體，它包含目的化合物，作為活性成分與一種有機或無機的載體或賦形劑適宜于外用，內(nèi)用或不經(jīng)腸道應用。活性成分例如可以與常用的無毒的，藥物上可接受的載體混合做成片子，小丸，膠囊，栓劑，溶液，乳液，懸浮液以及其他適宜于應用的各種形式?？捎米鬏d體的有葡萄糖，乳糖，阿刺伯膠，明膠，甘露醇，淀粉糊，三硅酸鎂，滑石粉，谷類淀粉，角蛋白，膠體硅，土豆淀粉，尿素及其他適合生產(chǎn)成固體，半固體或液體形狀制品的載體，另外，輔助劑，穩(wěn)定劑，加厚劑及染色劑都可以應用，在藥物組合物中包括的目的化合物含量要足以能對疾病的進程或狀態(tài)產(chǎn)生所期望的作用。
目的化合物的劑量隨多種因素諸如疾病的種類，病人的體重和/或年齡，此外還有用藥途徑而改變。
目的化合物最好的劑量通常從劑量范圍0.1-100毫克/公斤/天中選擇。
給出下列制備法和實例目的是用以說明本發(fā)明。
制備1
將吡啶(212毫克)、三氟乙酸(152毫克)，NN′-二環(huán)己基碳酰二亞胺(1.65毫克)連續(xù)加入到(2S，3R)-3-羥基-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(1.00克)在苯(6毫升)和二甲基亞砜(6毫升)的混合液中去。所得溶液在室溫下攪拌過夜。將水(10毫升)及乙酸乙酯加入混合物中，并濾去不溶物。
分離出有機層并相繼用水及鹽水洗滌。溶液用硫酸鎂干燥，在硅膠(25克)柱上行色譜分離。用正己烷和乙酸乙酯(5∶1)的混合液作洗脫液，得到(2S)-3-氧-三苯甲基氨基丁酸甲酯(563毫克)為淡黃色的油。
核磁共振光譜(CDCl3，δ)1.98(3H，單峰)，3.50(3H，單峰)，4.17(1H，單峰)，7.1～7.6(15H，多重峰)
制備2
將氰基硼氫化鈉(66.7毫克)加入到含有(2S)-3-氧-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯和(2S)-2-氨基-3-(4-咪唑基)丙酸甲酯二鹽酸鹽(388毫克)的甲醇(10毫升)混合物中，溶液在室溫下攪拌過夜，將碳酸氫鈉(400毫克)的水(10毫升)溶液加入反應混合物中，用氯仿(40毫升)萃取所得的水溶液。用鹽水洗滌萃取液，以硫酸鎂干燥，在真空下蒸發(fā)。
殘渣在硅膠(20毫克)柱上用色譜分離，用氯仿和甲醇(50∶1)的混合液作為洗脫劑，得到(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-甲氧基羰基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(141毫克)為黃色無定形粉末。
熔點55-58℃
紅外光譜(石臘油)1720，1195，1180cm-1
核磁共振光譜(CDCl3，δ)0.97(3H，雙峰J＝6Hz)，2.6-3.1(3H，多重峰)，3.13(3H，單峰)，3.41(1H，多重峰)，3.58(1H，多重峰)，3.68(3H，單峰)，5.50(2H，寬峰)，6.13(1H，單峰)，7.1-7.6(16H，多重峰)
制備3
將氰基硼氫化鈉(360毫克)加入到含有(2S)-3-氧-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(2.00克)及(2S)-2-氨基-3-(3-吲哚基)丙酸甲酯單一對一甲苯磺酸鹽(3.13克)的甲醇(30毫升)混合液中，在室溫下攪拌混合物過夜。用氯仿稀釋混合并相繼用水和鹽水洗滌。分離有機層并用硫酸鎂干燥，在真空下蒸發(fā)溶劑。殘渣在硅膠(50克)柱上用色譜分離，用正己烷和乙酸乙酯(4∶1)的混合液進行洗。收集目的物部分并在真空下蒸發(fā)，得到(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-甲氧羰基-2-(3-吲哚基)乙基〕-氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(625毫克)為淡黃色油。
核磁共振光譜(CDCl3，δ)0.99(3H，雙峰，J＝6Hz)，2.93(1H，三重峰，6Hz)，3.06(3H，單峰)，3.20(2H，雙峰J＝6Hz)，3.3-3.6(1H，m)，3.58(3H，單峰)，3.77(1H，多重峰)7.1-7.7(20H，多重峰)，7.96(1H，多重峰)
制備4
用和制備2和3同樣的方法得到下列化合物。
(1)(2S，3R)-3-〔〔2-(4-咪唑基)乙基〕-氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯。
核磁共振光譜(CDCl3，δ)1.11(2H，雙峰，J＝6Hz)，2.6-3.1(5H，多重峰)3.17(3H，單峰)，3.48(1H，多重峰)，6.74(1H，單峰)，7.1-7.6(16H，多重峰)
(2)(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-乙氧基羰基-2-(4-羥基苯基)乙基〕氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯核磁共振光譜(CDCl3，δ)0.97(3H，雙峰，J＝6Hz)，1.18(3H，三重峰 J＝8Hz)，2.6-3.0(1H，多重峰)，2.93(2H，雙峰，J＝6Hz)，3.07(3H，單峰)，3.29(1H，多重峰)，3.60(1H，三重峰，J＝6Hz)，4.12(2H，四重峰，J＝8Hz)，6.66(2H，雙峰，J＝8Hz)，7.06(2H，雙峰，J＝8Hz)，7.1-7.6(15H，多重峰)
(3)甲基(2S，3R)-3-甲氧基羰基甲基氨基-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯。
核磁共振光譜(CDCl3，δ)1.07(3H，雙峰J＝6Hz)，3.07(1H，多重峰，3.14(3H，單峰)，3.37(2H，單峰)，3.41(1H，多重峰)，3.70(3H，單峰)，7.1-7.6(15H，多重峰)
制備5
將溶有三溴化硼(952毫克)的二氯甲烷(5毫升)的溶液滴入溶有(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-甲氧基羰基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(400毫克)的二氯甲烷(10毫升)溶液中，外用冰鹽浴。室溫攪拌混合液過夜。過濾收集由反應生成的淡黃色粉末沉淀物，用二氯甲烷洗滌，并溶于水中，將溶液用Dowex 50W×8(商品，Dow化學公司)柱(20毫升)，用2.8%的氨水洗脫。在真空下蒸發(fā)含目的物部分，殘留物從甲醇中結(jié)晶出，得到(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(55毫克)為白色粉末。
熔點226-230℃
紅外光譜(石臘油)1615，1560，1405，1245cm-1
核磁共振光譜(D2O-NaOD，δ)0.98(3H，雙峰，J＝6Hz)，2.57(1H，多重峰)，2.83(2H，雙峰，J＝7Hz)，2.97(1H，雙峰，J＝8Hz)，3.47(1H，三重峰，J＝7Hz)，6.84(1H，單峰)，7.53(1H，單峰)
制備6
溶于甲醇(10毫升)和1N鹽酸(2毫升)混合液中的(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-甲氧基羰基-2-(3-吲哚基)乙基〕氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(600毫克)溶液，在室溫下攪拌一小時，在真空下蒸去甲醇。用氯仿洗滌剩余的水溶液并加水(15毫升)稀釋。將氫氧化鈉(500毫克)加入該溶液中并將混合物在室溫攪拌過夜。用1N鹽酸調(diào)節(jié)混合液至pH3，將溶液用Dowex 50W×8(H+，20毫升)柱，用水洗柱子，用1.4%氨水進行洗脫，收集含目的物部分并冷凍干燥，得到(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基)-乙基〕氨基〕丁酸(260毫克)為白色粉末。
熔點159-163℃
核磁共振光譜(D2O，δ)1.00(3H，雙峰，J＝6Hz)，
3.20(1H，多重峰，3.4-3.8(1H，多重峰)，3.8-4.3(2H，多重峰)，7.2-7.4(3H，多重峰)，7.57(1H，多重峰)，7.76(1H，多重峰)
質(zhì)譜(次級離子質(zhì)譜SMIC)m/z306(M++1)
制備7
按照制備6方法處理(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-乙氧基羰基-2-(4-羥基苯基)乙基〕氨基〕-2-三苯甲基氨基丁酸甲酯(1.13克)得到(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-羥基苯基)乙基)氨基〕丁酸(375毫克)
核磁共振光譜(D2O，δ)0.99(3H，雙峰，J＝6Hz)，2.61(1H，多重峰)，2.72(2H，雙峰，J＝7Hz)，2.93(1H，雙峰，J＝8Hz)，3.41(1H，二組雙峰，J＝6，7Hz)，6.54(2H，雙峰，J＝8Hz)，7.00(2H，雙峰，J＝8Hz)
制備8
按照制備6同樣的方法得到下列化合物。
(2S，3R)-2-氨基-3-羧甲基氨基丁酸
核磁共振光譜(D2O，δ)1.50(3H，雙峰，J＝6Hz)，3.5-4.0(1H，多重峰)，3.76(2H，單峰)，4.16(1H，多重峰)
制備9
(1)將溶于甲醇(9.5毫升)和1N氫氧化鈉水溶液(9.1毫升)的(2S，3S)-3-甲基-1-甲苯磺酰基-2-氮丙啶羧酸甲酯(2.45克)溶液室溫攪拌30分鐘，將D-組氨酸鹽酸鹽(5.23克)及氫氧化鈉(2.55克)加入到混合液中。將溶液回流5小時，并在真空下蒸發(fā)溶劑。將殘渣溶于水中，用1N鹽酸調(diào)節(jié)到pH5。將溶液用Diaion HP-20柱中(商品由三菱Mitsubishi化學公司制備)(100毫升)，柱子以水洗。用甲醇與水(1∶1)混合溶液進行洗脫，得到(2S，3R)-3-〔〔(1R)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕-2-甲苯磺酰氨基丁酸及(2S，3R)-2-〔〔(1R-羧基)-2-(4-咪唑基)-乙基〕氨基〕-3-甲苯磺酰氨基丁酸的混合物(2.47克)。
(2)將鈉(1.25克)在-78℃加入到從制備9(1)所得到的混合產(chǎn)物(2.49克)和液氨(30毫升)的混合液中，在同樣溫度下攪拌混合物5小時。將氯化銨加入混合物中直至藍顏色消失，氨在室溫揮發(fā)掉。用水稀釋殘渣留物并用1N鹽酸調(diào)節(jié)至pH4，將溶液用Dowex 50W×8(30毫升)柱子并用水洗滌柱。然后，用2.8%氨水進行洗脫及在真空下蒸發(fā)洗脫液。將殘渣溶于吡啶-乙酸緩沖液(0.01克分子，pH4.5)并用Wbatmann CM52(300毫升)柱。將同樣的緩沖液洗柱并用吡啶-乙酸緩沖液(0.01-0.3克分子，pH4.5)進行洗脫，收集并在真空下蒸發(fā)含目的物的部分，殘留物用甲醇使之固化，得到(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1R)-1-羧基-2-(4咪唑基)氨基〕丁酸(584毫克)為黃棕色粉末。
熔點168-171℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.25(3H，雙峰，J＝7Hz)2.9-3.6(3H，多重峰)，3.03(2H，雙峰，J＝6Hz)，3.68(1H，雙峰，J＝3Hz)，7.26(1H，單峰)，8.46(1H，單峰)
質(zhì)譜(次級離子質(zhì)譜)m/z257(M++1)
實例1
將叔丁氧羰基-L-天門冬氨酸對-硝基苯酯(200毫克)加到含有(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(51毫克)和三乙胺(0.14毫升)混合物在水(1毫升)和二氧雜環(huán)己烷(1毫升)的混合液中，室溫攪拌混合物。15小時后，又加200毫克的叔丁氧羰基-L-天門冬氨酸對-硝基苯酯和三乙胺(0.14毫升)混合物在室溫攪拌4小時。然后，又加200毫克叔丁氧羰基-L-天門冬氨酸對-硝基苯酯和三乙胺(0.14毫升)，混合物在同樣溫度攪拌4小時。
反應混合物用水(5毫升)稀釋，用1N鹽酸中和，用乙酸乙酯(10毫升)洗，水相在真空蒸發(fā)。
殘留物溶于75%三氟酯酸水溶液(5毫升)中，溶液室溫攪拌3小時。真空蒸發(fā)溶劑后，殘留物溶于水(5毫升)用1N氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液至pH7。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物溶于吡啶-醋酸緩沖液(0.01克分子，pH5.0)。溶液用Whatman CM52(商標，Whatman)柱(50毫升)，柱子用同樣的緩沖液(70毫升)洗。用吡啶-醋酸緩沖液(0.01-0.1克分子，pH5.0)進行洗脫。收集含目的化合物的部分并真空蒸發(fā)溶劑。殘留物使用Amber-lite IRA400(商標，Rohm & Haas)(OH-，10毫升)柱，柱子用水(50毫升)洗滌，用4%醋酸水溶液(20毫升)進行洗脫。真空蒸發(fā)溶劑，殘留物在矽膠(3克)柱用氯仿，甲醇和濃氨水(5∶3∶1)做洗脫劑進行色譜分離，得到(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(19.8毫克)。
核磁共振光譜(D2O-HaoD，δ)1.14(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.78(1H，雙峰，J＝7Hz)，2.82(1H，雙峰，J＝6Hz)，3.19(1H，雙峰，J＝8Hz)，3.24(1H，雙峰，J＝6Hz)，3.54(1H，多重峰)，3.97(1H，二組雙峰，J＝6，8Hz)，4.08(1H，二組雙峰，J＝6，7Hz)，4.43(1H，雙峰，J＝5Hz)，7.15(1H，單峰)，7.93(1H，單峰)
這化合物和用雙毛殼孢屬sp.F11809培養(yǎng)制備的FR-900490是一致的。
實例2
叔丁氧羰基-L-丙氨酸N-羥基琥珀酰亞氨酯加到(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(700毫克)和三乙胺(1.29毫升混合物在水(10毫升)和二氧雜環(huán)己烷的混合液中，室溫攪拌混合物4小時，真空蒸去溶劑，殘留物溶于75%三氟酯酸水溶液(20毫升)。溶液室溫放置過夜并真空蒸去溶劑。殘留物用Dowex5W×8柱(30毫升)，柱用水洗。用2.8%氨水進行洗脫。收集和真空蒸發(fā)含目的物部分。殘留物用Whatman CM52柱(150毫升)，用吡啶-醋酸緩沖液(0.01克分子-0.14克分子pH4.9)進行洗脫。將含目的物部分收集并真空蒸發(fā)。殘留物溶于水經(jīng)冷凍干燥得(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基丙酰基〕氨基〕-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(580毫克)。
熔點155-157℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.14(3H，雙峰，J＝7Hz)，1.23(3H，雙峰，J＝6Hz)，3.27(2H，多重峰)，3.60(1H，多重峰)，3.9-4.3(2H，多重峰)，4.50(1H，雙峰，J＝5Hz)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z328(M++1)
實例3
將(2S)-6-芐氧羰基氨基-2-叔丁氧羰基氨基己酸(894毫克)在5°時加到含(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(400毫克)和三乙胺(0.70毫升)混合物的水(10毫升)和二氧雜環(huán)己烷(10毫升)的混合液中，混合物在冰浴中攪拌3小時。真空蒸去揮發(fā)性溶劑，殘留物用1N鹽酸調(diào)到pH4。將混合物用“Diaion HP-20”柱(80毫升)。用水洗柱后，用甲醇和水混合物(3∶7-8∶2)進行洗脫，收集目的物部分并真空蒸發(fā)。殘留物用甲醇和乙醚混合液使固化得白色粉末，為(2S，3R)-2-〔〔(2S)-6-芐氧羰基氨基-2-叔丁氧羰基氨基己酰基〕氨基〕-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)-乙基〕氨基〕丁酸(786毫克)。
核磁共振光譜(D2O，δ)1.26(3H，雙峰，J＝7Hz)，1.3-1.8(6H，多重峰)，1.41(9H，單峰)，3.0-3.3(2H，多重峰)，3.45(2H，雙峰，J＝7Hz)，3.7(1H，多重峰)，3.9-4.3(2H，多重峰)，4.5(1H，雙峰，J＝5Hz)，5.09(2H，單峰)，7.38(5H，單峰)，7.41(1H，單峰)，8.62(1H，單峰)。
實例4
將(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮酦-羥琥珀酰亞氨酯(560毫克)在5℃加到含有(2S，3R)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基乙基)氨基〕丁酸(207毫克)和三乙胺(0.33毫升)混合物的水(2毫升)和二氧雜環(huán)己烷(5毫升)的混合液中，在冰浴中攪拌這混合物2小時。真空蒸去揮發(fā)性溶劑，殘留溶液用1N鹽酸調(diào)到pH4。過濾收集沉淀物，得(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-(雙(4-甲氧苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基)乙基〕氨基〕丁酸(726毫克)為白色粉末。
實例5
將(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-(雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮酦-羥琥珀酰亞氨酯(586毫克)加到含有(2R，3S)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(200毫克)和三乙胺(0.38毫升)混合物的水(1.5毫升)和二氧雜環(huán)己烷(5毫升)混合液中，溶液室溫攪拌過夜。真空除去揮發(fā)性溶劑，殘留水溶液用1N鹽酸調(diào)到pH4。過濾收集和真空干燥得沉淀物為(2R，3S)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-吲哚基)乙基〕氨基〕丁酸(685毫克)為白色粉末。
實例6
在冰浴中將(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮酦-羥琥珀酰亞氨酯(771毫克)加到含有(2S)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-吲哚基)乙基〕氨基〕丙酸(265毫克)和三乙胺(0.53毫升)混合物的水(4毫升)和二氧雜環(huán)己烷(8毫升)的混合液中。室溫攪拌這混合物3.5小時，真空蒸發(fā)得白色殘留物，加水(40毫升)至殘留物。懸浮液在冰水浴中用6N鹽酸調(diào)到pH3-4。收集沉淀，用水(60毫升)洗，減壓干燥得(2S)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕-氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丙酸，為白色粉末(772毫克)。
實例7
下列化合物可按實例4-6的相同方法得到。
(1)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N〔雙-(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔(1R)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
(2)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸甲酯
(3)(3S，2R)-2-〔〔(2R)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
(4)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-羥苯基)乙基〕氨基〕丁酸
(5)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-羧甲基氨基丁酸
實例8
將(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧基羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；?丙酰基〕氨基〕-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基)乙基〕氨基〕丁酸(800毫克)的醋酸(20毫升)溶液，在10%鈀碳(120毫克)存在下室溫中壓(3大氣壓)氫化8小時。催化劑除去后，溶液真空蒸發(fā)，殘留物用水回化得到(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基)乙基〕氨基〕丁酸(460毫克)為黃棕色粉末。
實例9
將(2S，3R)-2-〔〔(2S)-6-芐氧基羰基氨基-2-叔丁氧羰基氨基己酰基〕氨基〕-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(720毫克)和30%溴氫酸醋酸溶液(20毫升)在室溫攪拌三小時，混合物傾入冰水(40毫升)中。水溶液用乙醚洗滌，用Dowex50W×8(H+，15毫升)柱。用水洗柱，用2.8%氨水進行洗脫。收集目的物部分，真空蒸發(fā)。殘留物溶于水，冷凍干燥得(2S，3R)-2〔〔(2S)-2，6-二氨基己?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(399毫克)為淺黃色粉末。
熔點175-179℃
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIHS)m/z385(M++1)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.10(3H，雙峰，J＝7Hz，1.3-2.0(6H，多重峰)，2.8-3.4(5H，多重峰)，3.6-3.8(2H，多重峰)，4.55(2H，雙峰，J＝7Hz)，7.06(1H，單峰)，7.83(1H，單峰)
實例10
將(2R，3S)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(635毫克)和30%溴氫酸醋酸溶液(5毫升)在室溫攪拌二小時，混合物傾入冰水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)混合液中。水相分出并用Dowex50W×8(H+，20毫升)柱。用水洗柱，用2.8%氨水進行洗脫。收集目的物部分并真空蒸發(fā)。殘留物溶于水(50毫升)和冷凍干燥得白色粉末狀的(2R，3S)-2〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸。
熔點120-123℃(分解)
質(zhì)譜(SIMS)m/z371(M++1)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.63(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.87(2H，雙峰，J＝7Hz)，3.0-3.3(2H，多重峰)，3.43(1H，多重峰)，3.9-4.4(2H，多重峰)，4.45(1H，雙峰，J＝4Hz)，7.21(1H，單峰)，8.07(1H，單峰)
實例11
在冰水浴中將30%溴氫酸酯酸溶液(4毫升)加到(2S)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)-乙基〕氨基〕丙酸(772毫克)中，混合物攪拌15分后，在室溫加入附加的一份(4毫升)的溴氫酸醋酸溶液。混合物攪拌2.5小時，傾入冰水(25毫升)和乙酸乙酯(25毫升)混合液中。水層分出后剩下的有機層用水(30毫升)提取。合併水層用Dowex50W×8(H+，20毫升)柱，用水(200毫升)和1.4%氨水(250毫升)進行洗脫。含有目的物部分合併并在真空蒸發(fā)。殘留物溶于水(30毫升)并過濾。濾液冷凍干燥得(2S)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丙酸的白色粉末(315毫克)
核磁共振光譜(D2O，δ)8.05(1H，單峰，7.19(1H，單峰，)3.7-4.6(3H，多重峰，2.7-3.4(6H，多重峰)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z357(M++1)
實例12
下列化合物是按實例10和11同樣的方法得到的。
(1)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1R)-1-羧基-2(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
熔點171-173℃
核磁共振光譜(D2O，δ)1.26(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.8-3.0(2H，多重峰)，3.0-3.3(2H，多重峰)，3.47(1H，多重峰)，3.9-4.3(2H，多重峰)，4.38(1H，雙峰，J＝4Hz)，7.20(1H，單峰)，8.04(1H，單峰)
質(zhì)譜(SIMS)m/z371(M++1)
(2)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲酰基丙?；嘲被?3-〔〔2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
熔點110-114℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.26(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.70(2H，多重峰)，2.8-3.3(3H，多重峰)，3.4-3.7(2H，多重峰)，3.92(1H，多重峰)，4.51(1H，雙峰，J＝4Hz)，7.11(1H，單峰)，7.80(1H，單峰)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z327(M++1)
(3)(2S，3R)-2-〔〔(2R)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
熔點181-185℃
核磁共振光譜(D2O，δ)1.15(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.90(2H，雙峰，J＝6Hz)，3.24(2H，多重峰)3.50(1H，二組雙峰，J＝6，5Hz)，4.01(1H，二雙峰，J＝6.7Hz)，4.28(1H，三重峰，J＝7Hz)，4.52(1H，雙峰，J＝5Hz)，7.19(1H，單峰)，8.04(1H，單峰)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z371(M++1)
(4)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲酰基丙?；嘲被?3-〔〔1S)-1-羧基-2-(4-羥苯基)乙基〕氨基〕丁酸
熔點170-173℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.11(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.8-3.0(3H，多重峰)，3.2(1H，多重峰)，3.53(1H，多重峰)，4.00(1H，多重峰)，4.24(1H，二組雙峰，J＝6，8Hz)，4.47(1H，雙峰，J＝5Hz)，6.93(2H，雙峰，J＝8Hz)，7.26(1H，雙峰，J＝8Hz)。
質(zhì)譜(SIMS)m/z397(M++1)
(5)(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲甲?；；嘲被?3-羧基甲基氨基丁酸
熔點146-150℃
核磁共振光譜(D2O，δ)1.33(3H，雙峰，J＝7Hz)，2.7-3.0(2H，多重峰)，3.40(2H，單峰)，4.03(1H，二組雙峰，J＝5，7Hz)，4.28(1H，多重峰)，4.55(1H，雙峰，J＝5Hz)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z291(M++1)
實例13
將溶有(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-(雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被?3-〔〔2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸甲酯(1.40克)的甲醇(50毫升)和1N氫氧化鈉水液(25毫升)的混合溶液在室溫攪拌30分鐘)混合液用1N鹽酸調(diào)到pH7。過濾收集沉淀得(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(1.16克)為白色粉末。
實例14
將溶有(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基)乙基〕氨基〕丁酸(427毫克)的三氟醋酸(3毫升)，苯甲醚(0.5毫升)和二硫醇乙烷(0.1毫升)混合溶液在室溫攪拌過夜，將這混合物傾入水(10毫升)和乙酸乙酯(10毫升)混合液中，分出水相用Dowex50W×8(H+，20毫升)柱。用水洗柱并用2.8%氨水進行洗脫。收集目的物部分并真空蒸發(fā)。往殘留物加水，混合物冷凍干燥，得淺棕色粉末的(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔1S)-1-羧基-2-(3-吲哚基〕乙基〕氨基〕丁酸(85毫克)。
熔點65-70℃
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z420(M++1)
核磁共振光譜(D2O，δ)0.90(3H，雙峰，J＝6Hz)，2.6-2.9(3H，多重峰)，3.50(1H，多重峰)，3.9-4.3(3H，多重峰)，4.35(1H，雙峰，J＝4Hz)，7.2-7.9(5H，多重
峰)
制備10
(1)將(2S)-1-甲苯碳?；?2-氮雜環(huán)丙烷基羧酸甲酯(1.04克)的甲醇溶液加到冰浴冷卻的1N氫氧化鈉水液(4.1毫升)中;在同樣溫度時攪拌混合物50分鐘。所得溶液中加L-組氨酸(2.11克)和氫氧化鈉(730毫克)，混合物迴流1.5小時。真空除去溶劑后，殘渣溶于水并用2N碳酸調(diào)到pH4。將溶液用“Diaion HP-20”(150毫升)柱并用水洗柱。洗脫是用水和甲醇(1∶1 400毫升)混合液進行的，洗脫液真空蒸發(fā)后，殘留物在矽膠(100克)柱用氯仿，甲醇和28%氨水(5∶3∶1)混合液作洗脫液進行色譜分離得(2S)-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕-2-甲苯磺?；被?485毫克)。
核磁共振光譜(D2O-NaoD，δ)2.21(3H，單峰)，1.7-2.1(4H，多重峰)，3.44(1H，三重峰，J＝6Hz)，3.74(1H，二組雙峰，J＝4，9Hz)，6.86(1H，單峰)7.41(2H，雙峰，J＝9Hz)，7.74(2H，雙峰，J＝9Hz)，7.84(1H，單峰)
(2)(2S)-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕-2-甲苯磺?；被?450毫克)按制備法9(2)同樣方法處理得到(2S)-2-氨基-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丙酸(265毫克)
熔點215-220℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)3.0-3.2(4H，多重峰)，3.52(1H，三重峰，J＝6，5Hz)，3.82(1H，二組雙峰，J＝5.5，6Hz)，7.26(1H，單峰)，8.47(1H，單峰)
實例15
將乙酸酐(0.13毫升)加到有(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(500毫克)和三乙胺(0.38毫升)混合物的甲醇(30毫升)和水(6毫升)的混合液中，室溫攪拌混合物20小時。真空除去溶劑后，殘留物溶于水并用1N鹽酸調(diào)到pH3。溶液用Dowex50W×8(H+型，10毫升)柱，用水洗柱。用2%氨水進行洗脫。收集目的物部分并真空蒸發(fā)，殘留物溶于醋酸(28.6毫升)和水(500毫升)混合液中，溶液冷凍干燥并用甲醇使固化得(2S，3R)-2-〔〔(2S)-2-乙酰氨基-3-氨甲酰基丙?；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸(500毫克)。
熔點205-208℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.24(3H，雙峰，J＝6Hz)，2.05(3H，單峰)，2.7-2.9(2H，多重峰)，3.4-3.5(3H，多重峰)，3.68(1H，多重峰)，4.12(1H，多重峰)，4.50(1H，雙峰，J＝4Hz)，7.38(1H，單
峰)，8.55(1H，單峰)
質(zhì)譜次級離子質(zhì)譜(SIMS)m/z.413(M++1)
制備11
在10-15℃時將三氧化鉻(7.32克)加到含吡啶(11.2毫升)的二氯甲烷(300毫升)溶液中，室溫攪拌1小時后，溶液冷至8℃，滴加入N-(叔丁氧羰基)乙醇胺(2.0克)的二氯甲烷溶液(20毫升)。同樣溫度攪拌混合物3小時，溶液通過硅藻土過濾。真空蒸發(fā)濾液得棕色油。
該油的甲醇(46毫升)溶液中加入碳酸氫鈉(2.11克)，(2S)-2-氨基-(4-咪唑基)丙酸甲酯雙氯化氫鹽(4.54克)和氰基硼氫化鈉(833毫克)，混合物室溫攪拌過夜。加碳酸氫鈉(3.15克)的水(50毫升)溶液到混合物中，溶液用氯仿(100毫升)提取。有機相用鹽水洗并用硫酸鎂干燥，溶劑真空蒸發(fā)，殘留物在硅膠(50克)上用氯仿和甲醇(10∶1)的混合物作洗脫劑進行色譜分離，得淺黃色油狀的N-(叔丁氧羰基-2-〔〔(1S)-1-甲氧基羰基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕乙胺(757毫克)。
核磁共振光譜(CDCl3，δ)2.62(2H，多重峰)，2.86(2H，多重峰)，3.20(2H，多重峰)，3.53(1H，多重峰)，3.72(3H，單峰)，6.83(1H，單峰)，7.57(1H，單峰)
制備12
N-(叔丁氧羰基)-2-〔〔(1S)-1-甲氧基羰基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕乙胺(750毫克)溶于甲醇(10毫升)，水(5毫升)和三氟醋酸(5毫升)混合液中，室溫攪拌溶液三小時。除去溶劑后，殘留物溶于水(5毫升)溶液用1N氫氧化鈉調(diào)至pH7。
另添加1N氫氧化鈉(8毫升)到溶液中，混合物于室溫攪拌24小時。得到的溶液用1N鹽酸調(diào)至pH3，用Dowex50W×8(120毫升)柱。柱用水洗，用2.8%氨水進行洗脫。收集目的物部分，真空蒸發(fā)得2-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕乙胺(448毫克)。
核磁共振光譜(D2O，δ)2.75(1H，三重峰，J＝6.5Hz)，2.8-3.0(2H，多重峰)，3.28(1H，三重峰，J＝5Hz)，3.37(1H，三重峰，J＝6.5Hz)
實例16
下列化合物按實例4-6相同的方法得到。
(1)N-〔〔(2S)-2-芐氧羰基氨基-3-〔N-(雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲酰基〕丙?；?2-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕乙胺
(2)(2S，3R)-3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基氨基〕-2-〔〔3-〔N-〔雙(4-甲氧基苯基)甲基〕氨甲?；潮；嘲被扯∷?br> 實例17
下列化合物按實例10和11相同的方法得到
(1)N-〔(2S)-2-氨基-3-氨甲?；；?2-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕乙胺
熔點105-111℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)2.66(2H，三重峰，J＝5Hz)，2.90(1H，二組雙峰，J＝4，7.5Hz)，3.05-3.20(2H，多重峰)，3.53(2H，三重峰，J＝5Hz)，3.82(2H，多重峰)，4.03(1H，二組雙峰，J＝4，7.5Hz)，7.04(1H，單峰)，7.85(1H，單峰)
(2)(2S，3R)-2-〔〔3-氨甲?；；嘲被?3-〔〔(1S)-1-羧基-2-(4-咪唑基)乙基〕氨基〕丁酸
熔點130-137℃(分解)
核磁共振光譜(D2O，δ)1.11(1H，雙峰，J＝7Hz)，2.5-2.8(4H，多重峰)，3.1-3.4(2H，多重峰)，4.07(1H，三重峰，J＝6Hz)，4.50(1H，雙峰，J＝5Hz)，7.30(1H，單峰)，8.24(1H，單峰)
實例18
三十個250毫升的三角燒瓶，每瓶中倒入含溶解淀粉(1%)，玉米淀粉(1%)，葡萄糖(1%)，棉子粗粉(0.5%)，干酵母(0.5%)，玉米漿(0.5%)和碳酸鈣(0.2%)的種子培養(yǎng)劑(80毫升，調(diào)到pH8)，在120℃滅菌30分鐘。一環(huán)的雙毛殼孢屬sp.F-11809的斜面培養(yǎng)物被接種到每一培養(yǎng)劑中，在行程為三英吋每分轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)的回轉(zhuǎn)搖動器中25℃培養(yǎng)72小時。
2400毫升的種子培養(yǎng)液接種到盛有和種子培養(yǎng)劑相同成分的產(chǎn)物培養(yǎng)劑(160升)，予先120℃滅菌30分鐘的200升發(fā)酵罐中，在通氣160升/分和攪拌300轉(zhuǎn)/分30℃培養(yǎng)96小時。
得到的培養(yǎng)液借助于硅藻土(4公斤)過濾。濾液流經(jīng)活性炭柱(30升)。用去離子水(90升)洗柱，用60%丙酮水溶液(90升)進行洗脫。洗脫液真空濃縮至體積為60升，流經(jīng)Dowex50W-X2柱(商標，Dow化學試劑廠制，H+型，6升)。用去離子水洗柱，用1.5%氨水進行洗脫。洗脫液在真空下濃縮至干，然后進行硅膠〔Kieselgel60，商標，Merck公司，70-230目，1.8升〕柱色譜分離。
用含0.28%氨的80%異丙醇水溶液(1.8升)和含0.28%氨的75%異丙醇水溶液(1.8升)洗柱，然后用含0.28%氨的70%異丙醇水溶液進行洗脫?；钚圆糠?2.5升)在真空濃縮至100毫升體積，然后進行硅膠〔Kieselgel60，70-230目，900毫升〕柱色譜分離。
用正丁醇，乙酸和去離子水(3∶1∶2)的混合液(1.8升)洗柱，用正丁醇，乙酸和去離子水(2∶1∶2)的混合液進行洗脫。活性部分用6N氫氧化鈉水溶液中和，真空濃縮至體積為100毫升。這溶液進行硅膠(600毫升)柱色譜分離。用正丁醇，乙醇。氯仿和28%氨水(2∶2∶1∶2)的混合液進行洗脫?；钚圆糠?700毫升)真空濃縮到體積為400毫升，然后通過活性炭柱。柱用去離子水(400毫升)洗，用60%丙醇水溶液(400毫升)洗脫，洗脫液濃縮至30毫升，冷凍干燥得到1.5gFR-900490的白色粉末。
權(quán)利要求
1、式
化合物的制備方法，
其中R1是氫，氨基或保護的氨基，
R2是氫，羧基或保護的羧基，
R3是氫，羧基或保護的羧基，
R4是低級烷基，氨基(低級)烷基，保護的氨基(低級)烷基，氨甲酰(低級)烷基或保護的氨甲酰(低級)烷基，
R5是氫或低級烷基和
R6是氫，可有合適取代基(一個或多個)的芳(低級)烷基或雜環(huán)(低級)烷基，或其鹽，
包括
(1)屬于雙毛殼孢Discosia種屬的產(chǎn)生FR-900490的菌株在營養(yǎng)劑中培養(yǎng)并從所得的有FR-900490的培養(yǎng)液中回收FR-900490。
(2)將式
化合物，其中R1和R4各如前規(guī)定，或其在羧基上活潑的衍生物或其鹽和式
的化合物，其中R2，R3，R5和R6各如前規(guī)定，或其在氨基上活潑的衍生物，或其鹽進行反應生成式
的化合物，其中R1，R2，R3，R4，R5和R6各如前規(guī)定，或其鹽，或
(3)將式
的化合物，其中R2，R3，R4，R5和R6各如前規(guī)定，和R1a是保護的氨基，或其鹽經(jīng)受氨基保護基的消去反應生成式
的化合物，其中R2，R3，R4，R5和R6各如前規(guī)定，或其鹽，或
(4)將式
的化合物，其中R1，R3，R4，R5和R6各如前規(guī)定，和R2a是一保護的羧基，或其鹽經(jīng)受羧基保護基的消去反應生成式
的化合物其中R1，R3，R4，R5和R6各如前規(guī)定，或其鹽，或
(5)將式
的化合物，其中R1，R2，R3，R5和R6各如前規(guī)定，和R4a是一保護的氨甲酰(低級)烷基，或其鹽經(jīng)受氨甲酰保護基的消去反應生成式
的化合物，其中R1，R2，R3，R5和R6各如前規(guī)定，和R4b是氨甲酰(低級)烷基，或其鹽。
2、微生物雙毛殼孢屬Discosia sp.F-11809的生物純培養(yǎng)物。
專利摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的新氨基酸衍生物及其可藥用鹽。式中R1，R2，R3，R4，R5和R6的含義如說明書所述。 本發(fā)明也介紹了所述氨基酸衍生物及其可藥用鹽的制備方法和應用。
文檔編號C07D207/20GK86101394SQ86101394
公開日1986年12月3日 申請日期1986年3月4日
發(fā)明者寺野, 鶴海泰久, 瀨戶井宏行, 橋本真志, 向阪正信 申請人:藤沢藥品工業(yè)株式會社導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan