本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種單克隆抗體及其應用。

背景技術：

1、引起手足口病的病毒屬于小rna病毒科（picornavirus）腸道病毒屬（enteroviruse），包括柯薩奇病毒a組的2、4、5、6、7、9、10、16型等，b組的1、2、3、4、5、6、13型等，腸道病毒71型（human?enterovirus?71,?ev71），?？刹《荆╡choviruses）等。自ev71疫苗上市接種后，手足口病開始轉變?yōu)閏va5與cva4、cva6、cva10、cva16、ev71共流行的趨勢，成為六大流行血清型。根據(jù)多個流行病學研究不同血清型之間不或極少產生交叉中和活性，因此單價ev-a71不能保護由其他血清型引起的手足口病。因此研發(fā)包括cva5在內的多價手足口病疫苗十分重要。構象中和抗體更能反應病毒的含量和功能，因此，開發(fā)靶向構象表位、特異性識別cva5的中和活性單克隆抗體對疫苗研發(fā)的質控、臨床樣本的檢測和實驗室病毒鑒別，cva5基礎功能的研究具有重要意義。

技術實現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明提供了一種單克隆抗體及其應用，可以特異性識別cva5，不識別其他的腸道病毒。

2、為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種單克隆抗體，所述單克隆抗體為4d6單克隆抗體，其中，所述4d6單克隆抗體的重鏈互補決定區(qū)vhcdr1、互補決定區(qū)vhcdr2和互補決定區(qū)vhcdr3，所述vhcdr1的氨基酸序列如seq?id?no:1所示，所述vhcdr2的氨基酸序列如seq?id?no:2所示，所述vhcdr3的氨基酸序列如seq?id?no:3所示；所述4d6單克隆抗體的輕鏈互補決定區(qū)vlcdr1、互補決定區(qū)vlcdr2和互補決定區(qū)vlcdr3，所述vlcdr1的氨基酸序列如seq?id?no:4所示，所述vlcdr2的氨基酸序列如seq?id?no:5所示，所述vlcdr3的氨基酸序列如seq?idno:6所示。

4、具體地，所述vhcdr1的氨基酸序列具體為sgyywn，所述vhcdr2的氨基酸序列具體為yisydgsnnynpslkn，所述vhcdr3的氨基酸序列具體為ggtgtgyfdy；所述vlcdr1的氨基酸序列具體為kasddiynrla，所述vlcdr2的氨基酸序列具體為gatsles，所述vlcdr3的氨基酸序列具體為qqywstyt。

5、優(yōu)選地，所述4d6單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:7所示，具體為：dvqlqesgpglvkpsqslsltcsvtgysitsgyywnwirqfpgnklewmgyisydgsnnynpslknrisitrdtsknqfflklnsvttedtityfcarggtgtgyfdywgqgttltvss；和/或，

6、所述4d6單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:8所示，具體為diqmtqssssfsvslgdrvsitckasddiynrlawyqlkpgnaprllisgatslesgvpsrfsgsgsgkdytlsitslqtedvatyycqqywstytfgggtkleikr。

7、優(yōu)選地，所述4d6單克隆抗體為igm型抗體。

8、優(yōu)選地，所述4d6單克隆抗體識別cv-a5-vp1線性表位第21號肽段155vppgapvptgrdtfq169。

9、第二方面，本發(fā)明提供一種編碼所述的單克隆抗體的多核苷酸分子。

10、優(yōu)選地，編碼所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核酸分子為以下幾種中的任一種：

11、具體地，seq?id?no:9所示的核苷酸序列為：gatgtacagcttcaggagtcaggacctggcctcgtgaaaccttctcagtctctgtctctcacctgctctgtcactggctactccatcaccagtggttattactggaactggatccggcagtttccaggaaacaaactggaatggatgggctacataagctacgacggtagcaataactacaacccatctctcaaaaatcgaatctccatcactcgtgacacatctaagaaccagtttttcctgaagttgaattctgtgactactgaggacacaattacatatttctgtgcaagagggggtactgggacggggtactttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca。

12、b、與seq?id?no:9所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；

13、c、與a和b的核苷酸序列編碼相同蛋白質，但因遺傳密碼的簡并性而與其不同的核苷酸序列；

14、和/或，

15、編碼所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核酸分子為以下幾種中的任一種：

16、e、具有如seq?id?no:10所示的核苷酸序列；

17、具體地，seq?id?no:10所示的核苷酸序列為gacatccagatgacacaatcttcatcctccttttctgtatctctaggagacagagtcagcattacttgcaaggcaagtgacgacatatataatcggttagcctggtatcagctgaaaccaggaaatgctcctaggctcttaatatctggtgcaaccagtttggaaagtggggtaccttcaagattcagtggcagtggatctggaaaggattacactctcagcattaccagtcttcagactgaagatgttgctacttattactgtcaacagtattggagtacgtacacgttcggaggggggaccaaactggaaataaaacgg。

18、f、與seq?id?no:10所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；

19、g、與e和f的核苷酸序列編碼相同的蛋白質，但因遺傳密碼的簡并性而與其不同的核苷酸序列。

20、第三方面，本發(fā)明提供一種表達載體，包括編碼所述的單克隆抗體的多核酸分子。

21、第四方面，本發(fā)明提供一種宿主細胞，含有所述的多核酸分子，或含有所述的表達載體。

22、第五方面，本發(fā)明提供一種所述的單克隆抗體或所述的多核苷酸分子編碼的單克隆抗體在制備檢測柯薩奇病毒a5試劑或試劑盒中的應用。

23、最后，本發(fā)明提供一種所述的單克隆抗體或所述的多核苷酸分子編碼的單克隆抗體在制備抑制、預防和治療柯薩奇病毒a5藥物中的應用。

24、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：

25、（1）本發(fā)明提供的單克隆抗體是柯薩奇病毒a組5型（cva5）病毒免疫小鼠，制備篩選雜交瘤細胞，從而制備得到的，其為igm亞型中和抗體，可以特異性識別cva5，不識別其他的腸道病毒。

26、（2）本發(fā)明的單克隆抗體能夠靶向構象表位、能夠識別cva5空心顆粒和實心顆粒且具有中和活性，可用于cva5病毒定量，且反應病毒的含量和功能，與免疫原性相關，對疫苗研發(fā)的質控至關重要。

27、（3）本發(fā)明的單克隆抗體可與偶聯(lián)物（辣根過氧化酶或異硫氰酸熒光素等）結合用于直接或間接檢測、快速診斷，如可用于開發(fā)檢測由cva5感染引起的臨床樣品的檢測試劑或試劑盒，也可用于臨床病毒分離株實驗室鑒定抗體，同時還可用于制備預防性疫苗生產中間品及產品含cva5抗原的定量檢測試劑。