本發(fā)明涉及海洋藻類生物，具體涉及紅毛藻抗氧化肽及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、生物活性肽(bioactivepeptides)是來源于細(xì)菌、真菌或動(dòng)植物的具有重要生理功能的一類生物活性物質(zhì)。生物活性肽不僅具有多種顯著的生理功能，如神經(jīng)調(diào)節(jié)、激素作用、兔疫調(diào)節(jié)、抗血栓、抗高血壓、降膽固醇、抑菌、抗病毒、抗癌、抗氧化作用等；而且具結(jié)構(gòu)簡單，穩(wěn)定性強(qiáng)，容易被人體直接吸收和安全的特性，因此近年來成為生物活性物質(zhì)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

2、目前，制備活性肽的方法主要有酶解法、微生物發(fā)酵法、化學(xué)合成法等。酶解法因生產(chǎn)條件溫和、安全性較高、且可得到特定功能的活性肽等優(yōu)點(diǎn)，己成為從蛋白質(zhì)中釋放生物活性肽的最常用方法。酶法制備生物活性肽的研究多見于動(dòng)物源多肽，植物源多肽的研究相對(duì)較少。萬海霞等選用胃蛋白酶對(duì)多管藻水溶性和鹽溶性蛋白進(jìn)行酶解，所得多肽對(duì)dpph自由基清除活性較強(qiáng)。國內(nèi)外對(duì)植物多肽抗氧化的研究多局限于陸生植物，而對(duì)水生植物如藻類多肽的研究甚少。藻類生活于海洋之中，生活條件更為復(fù)雜，可能形成與陸生植物不一樣的蛋白結(jié)構(gòu)和生物活性。因此，藻類多肽具有更多潛在的研究價(jià)值，對(duì)其研究有利于深入開發(fā)利用藻類，改變?cè)孱惖纳a(chǎn)結(jié)構(gòu)和運(yùn)用價(jià)值。

3、紅毛藻(bangiafusco-purpurealyngb.)，屬紅藻門、紅毛菜綱、紅毛菜目，是中國東南沿海的特產(chǎn)。它營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量高達(dá)45％，有利于酶解多肽的研究和制備。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供紅毛藻抗氧化肽及其制備方法。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明的第一方面提供了一種紅毛藻抗氧化肽，所述紅毛藻抗氧化肽選自下述任一種：氨基酸序列為ypcw的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為gypyk的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為vlpyak的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為nklssy的紅毛藻抗氧化肽。

4、本發(fā)明的第二方面提供了上述一種紅毛藻抗氧化肽的制備方法，包括以下步驟：

5、s1：將紅毛藻清洗去除雜物后，60℃干燥12h，粉碎過80目篩，得紅毛藻粉；

6、s2：向紅毛藻粉中加入純水，充分?jǐn)嚢枞苊?，調(diào)節(jié)ph至9，超聲輔助提取20min，再50℃攪拌提取3h，離心，棄沉淀、取上清液調(diào)節(jié)ph至4.2，4℃靜置12h后離心，棄上清液、取沉淀冷凍干燥，得紅毛藻蛋白；

7、s3：將紅毛藻蛋白用純水溶解，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，滅酶，得紅毛藻蛋白酶解液；將紅毛藻蛋白酶解液在60℃減壓濃縮，加入無水乙醇靜置醇沉，離心，棄沉淀、取上清液，得紅毛藻多肽液；

8、s4：將紅毛藻多肽液用超濾膜截留分子量<2kd的組分，依次經(jīng)deae-52陰離子柱sephadex?lh-20柱分離純化，收集抗氧化活性最高的組分；將紅毛藻多肽液用超濾膜截留分子量為2kd～10kd的組分，依次經(jīng)deae-52陰離子柱、sephadex-g75柱分離純化，收集抗氧化活性最高的組分；

9、s5：對(duì)收集的抗氧化活性最高的組分所包含的肽段進(jìn)行氨基酸序列測(cè)定，對(duì)測(cè)定得到的氨基酸序列進(jìn)行固相合成，得紅毛藻抗氧化肽；

10、步驟s2中，所述紅毛藻粉：純水的質(zhì)量體積比為1：25；

11、步驟s3中，所述紅毛藻蛋白：純水的質(zhì)量體積比為1：20；所述酶解的條件為：木瓜蛋白酶的加入量為3000u/g紅毛藻蛋白，酶解溫度為50℃，酶解ph為6，酶解時(shí)間為2h；

12、步驟s4中，所述deae-52陰離子柱的分離純化條件為：以0～2mol/l的nacl溶液線性梯度洗脫，流速為3ml/min；所述sephadex?lh-20柱的分離純化條件為：去離子水洗脫，流速為3ml/min；所述sephadex-g75柱的分離純化條件為：去離子水洗脫，流速為3ml/min。

13、本發(fā)明的第三方面提供了上述一種紅毛藻抗氧化肽在制備抗氧化功能產(chǎn)品中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

15、(1)本發(fā)明提供了紅毛藻抗氧化肽，所述紅毛藻抗氧化肽選自下述任一種：氨基酸序列為ypcw的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為gypyk的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為vlpyak的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為nklssy的紅毛藻抗氧化肽?？寡趸钚詼y(cè)定結(jié)果顯示，本發(fā)明提供的紅毛藻抗氧化肽ypcw、gypyk、vlpyak和nklssy具有優(yōu)異的抗氧化功能。

16、(2)本發(fā)明采用堿性法超聲輔助提取紅毛藻蛋白，含鹽量低，蛋白提取率高。等電點(diǎn)法分離蛋白，獲得的蛋白含小分子化合物少，純度高，使用木瓜蛋白酶制備紅毛藻抗氧化肽，采用超濾膜制備紅毛藻多肽，為下一步色譜分離獲得更純的紅毛藻抗氧化肽提供了方便條件，根據(jù)紅毛藻多肽分子量大小的不同采用不同的色譜分離方式，所得到的紅毛藻多肽純度更高。

技術(shù)特征：

1.一種紅毛藻抗氧化肽，其特征在于：所述紅毛藻抗氧化肽選自下述任一種：氨基酸序列為ypcw的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為gypyk的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為vlpyak的紅毛藻抗氧化肽，氨基酸序列為nklssy的紅毛藻抗氧化肽。

2.如權(quán)利要求1所述的紅毛藻抗氧化肽的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟s2中，所述紅毛藻粉：純水的質(zhì)量體積比為1：25。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟s3中，所述紅毛藻蛋白：純水的質(zhì)量體積比為1：20；所述酶解的條件為：木瓜蛋白酶的加入量為3000u/g紅毛藻蛋白，酶解溫度為50℃，酶解ph為6，酶解時(shí)間為2h。

5.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟s4中，所述deae-52陰離子柱的分離純化條件為：以0~2mol/l的nacl溶液線性梯度洗脫，流速為3ml/min；所述sephadexlh-20柱的分離純化條件為：去離子水洗脫，流速為3ml/min；所述sephadex-g75柱的分離純化條件為：去離子水洗脫，流速為3ml/min。

6.如權(quán)利要求1所述的紅毛藻抗氧化肽在制備抗氧化功能產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供紅毛藻抗氧化肽及其制備方法。所述紅毛藻抗氧化肽為YPCW、GYPYK、VLPYAK、NKLSSY，其制備方法為：將紅毛藻清洗除雜，干燥，粉碎過篩，用純水溶脹，調(diào)pH至9，超聲提取20min，再50℃攪拌提取3h，離心，取上清液調(diào)pH至4.2，4℃靜置12h后離心，取沉淀冷凍干燥，得紅毛藻蛋白；將紅毛藻蛋白用純水溶解，加木瓜蛋白酶酶解，滅酶，得紅毛藻蛋白酶解液；將紅毛藻蛋白酶解液減壓濃縮，醇沉，離心，取上清液得紅毛藻多肽液；將紅毛藻多肽液超濾，經(jīng)DEAE?52陰離子柱分離純化，再經(jīng)Sephadex?LH?20柱或Sephadex?G75柱分離純化，收集抗氧化活性最高的組分，進(jìn)行氨基酸序列測(cè)定及固相合成，得紅毛藻抗氧化肽。本發(fā)明提供的紅毛藻抗氧化肽具有優(yōu)異的抗氧化功能。

技術(shù)研發(fā)人員：王芳,戴聰杰,董樂
受保護(hù)的技術(shù)使用者：泉州師范學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6