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Syn-CAR-T細胞的制備方法及其細胞和應用與流程

文檔序號:40556797發(fā)布日期:2025-01-03 11:16閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.syn-car-t細胞的制備方法,其特征在于,所述方法包括:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,所述syn?car逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的質(zhì)粒是靶向cd19分子,bcma分子,cd38分子,或gpc3分子的psr.synnotch載體的質(zhì)粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,所述syn?car逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的質(zhì)粒是靶向cd19分子的psr.synnotch載體的質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟1中,在所述piggybac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的pb轉(zhuǎn)座子5’itr和3’itr序列之間順序地插入sin-γ-rv載體的5’ltr,5’utr,和3’sin-ltr序列;所述非編碼區(qū)utr包括為病毒載體包裝信號的ψ元件和為剪切供體位點的sd,所述3’sin-ltr序列中u3區(qū)刪除,只保留r區(qū)和u5區(qū)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,5’utr刪除所有g(shù)ag和pol編碼區(qū)序列以及起始密碼子atg。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,5’ltr和3’sin-ltr之間分別插入synnotch系統(tǒng)的效應分子uas?tagbfp和誘導受體sffv_scfv?notch?gal4vp64,誘導受體蛋白由sffv啟動子啟動表達。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,在gal4vp64蛋白下游添加p2a-egfp熒光蛋白,作為載體受體蛋白cd19?scfv、bcma?scfv、cd38?scfv或gpc3?scfv的檢測標簽。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述方法構(gòu)建的syn-car-t細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的syn-car-t細胞是靶向cd19的syn-car-t細胞。

10.權(quán)利要求8所述的syn-car-t細胞在制備腫瘤藥物中的應用。

11.一種用于治療腫瘤的藥物組合物,其特征在于,所述藥物組合物含有權(quán)利要求8所述的car-t細胞,以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

12.一種體外抑制腫瘤細胞的方法,其特征在于,包括將腫瘤細胞與如權(quán)利要求8所述的car-t細胞或如權(quán)利要求11所述的藥物組合物接觸,從而抑制所述腫瘤細胞。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供Syn?CAR?T細胞的制備方法及其細胞和應用,所述方法包括利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SIN?γ?RV載體,即PSR載體,制備Syn?CAR質(zhì)粒載體:用所述PSR載體表達SynNotch系統(tǒng),將所述SynNotch系統(tǒng)的GAL4誘導載體和UAS效應載體合并在一個所述PSR載體上,使得所述SynNotch系統(tǒng)由一個所述PSR載體進行遞送,構(gòu)建Syn?CAR逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的質(zhì)粒;和將上述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的質(zhì)粒轉(zhuǎn)導T細胞,制備得到所述Syn?CAR?T細胞。本發(fā)明結(jié)果表明,靶點BCMA,CD38,GPC3的誘導效率極低,不適合本發(fā)明的SynNotch系統(tǒng);靶點CD19誘導效率最高,最適合應用于本發(fā)明的SynNotch系統(tǒng)。

技術(shù)研發(fā)人員:王建勛,陳靜,張野,王文娟,馮婭茹
受保護的技術(shù)使用者:廣東君厚生物醫(yī)藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/2
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