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高產(chǎn)β-石竹烯的重組解脂耶氏酵母菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

文檔序號(hào):40652919發(fā)布日期:2025-01-10 19:00閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.高產(chǎn)β-石竹烯的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的重組解脂耶氏酵母菌表達(dá)了異源基因;所述的異源基因?yàn)辄S花蒿artemisia?annua來源的β-石竹烯合成酶或其e353d突變體的編碼基因;

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的重組解脂耶氏酵母菌表達(dá)了1-3個(gè)拷貝數(shù)的異源基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的重組解脂耶氏酵母菌同時(shí)表達(dá)了3-羥基-3-甲基戊二酰coa還原酶編碼基因thmg1、異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶編碼基因idi和法尼基焦磷酸合酶編碼基因erg20中的任意一種或多種的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的3-羥基-3-甲基戊二酰coa還原酶編碼基因thmg1的genbank登錄號(hào)為xp_503558.1,所述的異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶編碼基因idi的genbank登錄號(hào)為yali0f04015g,所述的法尼基焦磷酸合酶編碼基因erg20的genbank登錄號(hào)為yali0e05753g。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的重組解脂耶氏酵母菌同時(shí)將脂肪酶編碼基因tgl4的內(nèi)源啟動(dòng)子ptgl4替換為pyat1;所述的pyat1的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

6.一株高產(chǎn)β-石竹烯的重組解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述的重組解脂耶氏酵母菌表達(dá)了2個(gè)拷貝數(shù)的黃花蒿artemisia?annua來源的β-石竹烯合成酶e353d突變體的編碼基因,同時(shí)表達(dá)了3-羥基-3-甲基戊二酰coa還原酶編碼基因thmg1、異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶編碼基因idi和法尼基焦磷酸合酶編碼基因erg20,并將脂肪酶編碼基因tgl4的內(nèi)源啟動(dòng)子ptgl4替換為pyat1;

7.權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的重組解脂耶氏酵母菌的構(gòu)建方法,其特征在于,將所述的β-石竹烯合成酶或其e353d突變體的編碼基因以基因表達(dá)盒的形式整合在酵母基因組上。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法,其特征在于,包括如下步驟:

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述的構(gòu)建方法包括步驟(3),所述的步驟(3)為,構(gòu)建thmg1表達(dá)盒、idi表達(dá)盒、erg20表達(dá)盒和啟動(dòng)子替換表達(dá)盒中的任意一種或幾種,并整合在步驟(2)構(gòu)建得到的解脂耶氏酵母的基因組上。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟(3)中,所述的啟動(dòng)子替換表達(dá)盒,包含脂肪酶編碼基因tgl4啟動(dòng)子上游同源臂、啟動(dòng)子pyat1和脂肪酶編碼基因tgl4起始密碼子下游同源臂。

11.權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的重組解脂耶氏酵母菌在發(fā)酵生產(chǎn)β-石竹烯中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域,本發(fā)明提供了一株高產(chǎn)β?石竹烯的重組解脂耶氏酵母菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述高產(chǎn)β?石竹烯的重組解脂耶氏酵母菌,命名為解脂耶氏酵母(Yarrowia?lipolytica)XJ?CAP株,所述的重組解脂耶氏酵母XJ?CAP株經(jīng)過補(bǔ)料分批發(fā)酵后能夠生產(chǎn)6.27g/L的β?石竹烯,實(shí)現(xiàn)了植物來源天然產(chǎn)物β?石竹烯在解脂耶氏酵母中的高效合成。本發(fā)明重組解脂耶氏酵母菌的構(gòu)建方法操作簡(jiǎn)單,能夠?qū)崿F(xiàn)β?石竹烯的高效合成。

技術(shù)研發(fā)人員:王凱峰,紀(jì)曉俊,孫美莉,林璐,黃和
受保護(hù)的技術(shù)使用者:南京工業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/9
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