本發(fā)明屬于微生物篩選，具體涉及一種富硒酵母菌的篩選方法。

背景技術(shù)：

1、硒(se)作為生物體內(nèi)不可或缺的微量元素，發(fā)揮重要的生理作用。發(fā)揮生理功能的硒大部分以硒蛋白的方式存在于生物體中。硒作用于生物體內(nèi)酶所催化的反應(yīng)，同時又可以保護生物膜。文獻報道硒具有的抗癌作用，硒對于侵入機體的有害金屬元素起拮抗的作用，并且硒還可以增強機體的免疫力和生殖能力。

2、酵母菌是人們試驗應(yīng)用最多、最安全有效的營養(yǎng)微生物，富含蛋白質(zhì)、微量元素等礦物質(zhì)，更是含有豐富的b族維生素(以維生素b1，b2居多)。

3、酵母菌在生長過程中可將有毒的無機硒轉(zhuǎn)化成無毒的有機硒。而通過富硒酵母補充硒是一種安全有效的途徑，在人用藥品營養(yǎng)補充劑及動物養(yǎng)殖方面應(yīng)用廣泛。

4、目前富硒酵母的硒含量一般是2000-3000mg/kg(即2000-3000ppm)，富硒酵母菌株對無機硒的吸收率為50-70％，大量無機硒殘留在發(fā)酵廢水中，需要進行環(huán)保處理，增加工藝運行成本同時對環(huán)境造成一定污染，因此通過菌種選育獲得對無機硒的吸收率高，減少發(fā)酵廢水中硒排放尤為必要?，F(xiàn)有菌種篩選方法，基本是采用誘變和高硒濃度馴化進行篩選，操作繁瑣，效率低。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對目前存在的富硒酵母菌株對無機硒吸收率不高，富硒酵母的篩選方法操作繁瑣，效率低的問題，本發(fā)明首次采用等離子誘變后用無硫含硒培養(yǎng)基進行富硒酵母的篩選，大幅提升篩選效率，篩選得到的菌株的無機硒吸收率達到91％以上，發(fā)酵制備得到的富硒酵母，硒含量達到6100mg/kg。

2、具體來說，本發(fā)明提出了如下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種富硒酵母菌的篩選方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

4、(1)出發(fā)菌株誘變；

5、(2)誘變菌株采用無硫含硒培養(yǎng)基進行梯度篩選；

6、(3)梯度篩選后的菌株進行純培養(yǎng)和菌體濃度檢測，獲取目標(biāo)菌株。

7、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(1)中，所述誘變選自等離子誘變；

8、優(yōu)選的，等離子誘變功率為60-180w；

9、和/或，等離子誘變氣流量為8-12l/min；

10、和/或，誘變時間為30-120s。

11、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的無硫含硒培養(yǎng)基包括：葡萄糖5-40g/l，氯化銨1-10g/l，磷酸二氫鉀0.1-2.0g/l，氯化鎂0.01-0.5g/l，氯化鉀0.02-0.8g/l，氯化鈣0.01-0.2g/l，葡萄糖酸鋅0.02-0.3g/l，氯化銅0.05-0.8mg/l，碘化鉀0.01-0.9mg/l，氯化亞鐵0.1-20mg/l，氯化錳0.02-0.9mg/l，四硼酸鈉0.02-1.5mg/l，生物素0.01-0.80mg/l，泛酸鈣0.1-10mg/l，肌醇0.01-15mg/l，核黃素(vb2)0.1-2mg/l，煙酸(vb3)0.2-10mg/l，吡哆醇(vb6)0.02-3mg/l和亞硒酸鈉60-3000mg/l。

12、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，所述無硫含硒培養(yǎng)基通過0.35-0.45μm濾膜過濾除菌。

13、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，誘變后的菌株轉(zhuǎn)接至無硫含硒培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并在轉(zhuǎn)接過程中提高亞硒酸鈉的濃度；

14、優(yōu)選的，每次培養(yǎng)24-48h后進行轉(zhuǎn)接；

15、進一步優(yōu)選的，最后一次轉(zhuǎn)接采用含硒固體培養(yǎng)基平板涂布，挑取單菌落后進行純培養(yǎng)。

16、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，培養(yǎng)溫度為28-33℃，轉(zhuǎn)速150-220rpm震蕩培養(yǎng)。

17、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中，將步驟(2)獲得的菌株培養(yǎng)后檢測od600值，選取od600大于1.5菌株為目標(biāo)菌株。

18、優(yōu)選的，所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中，培養(yǎng)時間為45-50h；

19、和/或，培養(yǎng)溫度為28-30℃，轉(zhuǎn)速150-220rpm震蕩培養(yǎng)。

20、第二方面，本發(fā)明提供了一種利用富硒酵母處理污染物的方法，其特征在于，將富硒酵母添加到污染物中吸收無機硒來處理污染物，其中，所述富硒酵母是所述的富硒酵母菌的篩選方法篩選得到的富硒酵母。

21、優(yōu)選的，所述的利用富硒酵母菌株處理污染物的方法，其特征在于，所述污染物為污水。

22、本發(fā)明的有益效果：

23、本發(fā)明利用釀酒酵母在不含硫元素的培養(yǎng)基中無法生長的特性，采用等離子誘變和無硫含硒培養(yǎng)基進行富硒酵母菌種的定向選育，獲得可以高效利用硒來替代硫合成胞內(nèi)功能產(chǎn)物的菌株，大幅提高了富硒酵母育種效率。富硒酵母新菌株對無機硒吸收率達到91％以上，相對于當(dāng)前行業(yè)平均50-70％的吸收率，提升顯著。減少發(fā)酵廢水中的硒殘留，減少工藝運行成本，保護了環(huán)境。篩選得到的富硒酵母菌株可添加到富硒污染物中吸收無機硒來處理污染物。

24、菌種保藏信息

25、本發(fā)明提供的釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)semcx2z1菌株于2023年11月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏編號為cctcc?no:m?20232369，保藏地址：中國，武漢，武漢大學(xué)，郵政編碼：430072；電話：027-68754052。

技術(shù)特征：

1.一種富硒酵母菌的篩選方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(1)中，所述誘變選自等離子誘變；

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的無硫含硒培養(yǎng)基包括：葡萄糖5-40g/l，氯化銨1-10g/l，磷酸二氫鉀0.1-2.0g/l，氯化鎂0.01-0.5g/l，氯化鉀0.02-0.8g/l，氯化鈣0.01-0.2g/l，葡萄糖酸鋅0.02-0.3g/l，氯化銅0.05-0.8mg/l，碘化鉀0.01-0.9mg/l，氯化亞鐵0.1-20mg/l，氯化錳0.02-0.9mg/l，四硼酸鈉0.02-1.5mg/l，生物素0.01-0.80mg/l，泛酸鈣0.1-10mg/l，肌醇0.01-15mg/l，核黃素(vb2)0.1-2mg/l，煙酸(vb3)0.2-10mg/l，吡哆醇(vb6)0.02-3mg/l和亞硒酸鈉60-3000mg/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，所述無硫含硒培養(yǎng)基通過0.35-0.45μm濾膜過濾除菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，誘變后的菌株轉(zhuǎn)接至無硫含硒培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并在轉(zhuǎn)接過程中提高亞硒酸鈉的濃度；

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中，培養(yǎng)溫度為28-33℃，轉(zhuǎn)速150-220rpm震蕩培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中，將步驟(2)獲得的菌株培養(yǎng)后檢測od600值，選取od600大于1.5菌株為目標(biāo)菌株。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中，培養(yǎng)時間為45-50h；

9.一種利用富硒酵母處理污染物的方法，其特征在于，將富硒酵母添加到污染物中吸收無機硒來處理污染物，其中，所述富硒酵母是權(quán)利要求1-8任一項所述的方法得到的富硒酵母。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用富硒酵母菌株處理污染物的方法，其特征在于，所述污染物為污水。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種富硒酵母菌的篩選方法，所述方法包括如下步驟：(1)出發(fā)菌株誘變；(2)誘變菌株采用無硫含硒培養(yǎng)基進行梯度篩選；(3)梯度篩選后的菌株進行純培養(yǎng)和菌體濃度檢測，獲取目標(biāo)菌株。本發(fā)明的篩選方法獲得可以高效利用硒來替代硫合成胞內(nèi)功能產(chǎn)物的菌株，大幅提高了富硒酵母育種效率。

技術(shù)研發(fā)人員：翟明,覃先武,張彥,馬燦,劉秀繼,陳暉,李武陽,宋璽,張方方
受保護的技術(shù)使用者：安琪酵母股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30