1.一種用于在甜菜植物細胞中遺傳修飾的方法,所述方法包含步驟(a)和(b)
2.權利要求1所述的方法,其中所述基因組工程化組分(i)和/或所述第二化合物(ii)在所述甜菜植物細胞中是瞬時有活性的和/或是瞬時存在的。
3.權利要求1所述的方法,其中所述基因組工程化組分包含
4.權利要求3所述的方法,其中所述雙鏈dna斷裂誘導酶識別所述細胞的基因組中的預定位點。
5.權利要求3所述的方法,其中所述單鏈dna或rna斷裂誘導酶識別所述細胞的基因組中的預定位點。
6.權利要求3所述的方法,其中在c中,所述解除武裝的雙鏈dna斷裂誘導酶或單鏈dna或rna斷裂誘導酶識別所述細胞的基因組中的預定位點。
7.權利要求3所述的方法,其中在d中,所述解除武裝的雙鏈dna斷裂誘導酶或單鏈dna或rna斷裂誘導酶識別所述細胞的基因組中的預定位點。
8.權利要求1所述的方法,其中所述基因組工程化組分包含選自以下的雙鏈dna斷裂誘導酶或單鏈dna或rna斷裂誘導酶:crispr/cas內切核酸酶,鋅指核酸酶,歸巢內切核酸酶,大范圍核酸酶和tal效應物核酸酶。
9.權利要求8所述的方法,其中所述crispr/cas內切核酸酶是crispr/cpf1內切核酸酶。
10.權利要求2所述的方法,其中步驟(b)中的所述基因組工程化組分的瞬時活性包含在所述甜菜植物細胞的基因組中誘導一個或多個雙鏈斷裂,在所述甜菜植物細胞的基因組中誘導一個或多個單鏈斷裂,在所述甜菜植物細胞的基因組中誘導一個或多個堿基編輯事件,或在所述甜菜植物細胞的基因組中誘導一個或多個dna甲基化、組蛋白乙?;?、組蛋白甲基化、組蛋白泛素化、組蛋白磷酸化、組氨酸sumo化、組蛋白核糖基化或組蛋白瓜氨酸化。
11.權利要求10所述的方法,其中在誘導一個或多個雙鏈斷裂或一個或多個單鏈斷裂之后為非同源末端連接和/或通過同源重組機制對斷裂的同源性定向修復。
12.權利要求1所述的方法,其中在步驟(b)中所述基因組的修飾選自
13.權利要求1的所述方法,其中步驟(a)中的所述甜菜植物細胞是衍生自愈傷組織、未成熟或成熟的胚、葉、芽、根、花、小孢子、胚性組織或分生組織的細胞。
14.權利要求1所述的方法,其還包含將待用于步驟(a)的甜菜植物細胞預處理的步驟,所述預處理包含在含有所述曲古抑菌素、所述植物激素、所述引起甜菜植物再生得以改善的蛋白質的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述甜菜植物細胞或包含所述甜菜植物細胞的甜菜植物材料。
15.權利要求1所述的方法,其中共同導入是通過粒子轟擊、顯微注射、農桿菌屬介導的轉化、電穿孔、借助納米顆?;蚣毎┩鸽牡奈锢磉f送、或真空滲入來進行的。
16.權利要求1所述的方法,其中所述共同導入是通過農桿菌滲入來進行的或基于物理遞送。
17.權利要求16所述的方法,其中所述物理遞送為粒子轟擊、顯微注射、或電穿孔。
18.權利要求15所述的方法,其中所述共同導入是通過粒子轟擊。
19.權利要求1所述的方法,其中所述方法包含另一個步驟(c),其獲得和/或選擇經遺傳修飾的甜菜植物細胞或甜菜植物或其部分,所述甜菜植物或其部分包含經遺傳修飾的甜菜植物細胞或衍生自經遺傳修飾的甜菜植物細胞,并且在至少一個細胞中包含基因組的遺傳修飾。
20.權利要求19所述的方法,其中選擇是通過檢測遺傳修飾的手段來進行的。
21.權利要求20所述的方法,其中所述選擇是通過基于pcr的方法,通過表型特征或通過形態(tài)特征來進行的。
22.權利要求21所述的方法,其中所述表型特征為除草劑抗性或顏色標志物。
23.權利要求21所述的方法,其中所述表型特征為熒光標志物。
24.權利要求23所述的方法,其中所述熒光標志物是tdtomato或mneongreen。
25.一種通過微彈轟擊來對甜菜植物基因組遺傳修飾的微粒,其用至少以下包被
26.一種通過微彈轟擊來對甜菜植物基因組遺傳修飾的試劑盒,其包含
27.一種產生經遺傳修飾的甜菜植物的方法,其包含以下步驟:
28.權利要求27所述的方法,其中所產生的甜菜植物不含有在步驟(a)中共同導入的所述基因組工程化組分和所述第二化合物中的任一項。
29.曲古抑菌素,或植物激素,或引起甜菜植物再生得以改善的蛋白質或包含編碼所述蛋白質的核酸的表達盒在權利要求1-24、27或28中任一項的方法中的用途,所述植物激素選自2,4-二氯苯氧基乙酸、6芐基氨基嘌呤、或玉米素,