本發(fā)明涉及甲減和亞甲減模型構(gòu)，尤其涉及一種甲減模型小鼠和亞甲減模型小鼠的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、甲減或亞甲減模型的現(xiàn)有的主要技術(shù)包括：化學(xué)誘導(dǎo)，低碘飲食，放射性131ⅰ誘導(dǎo)，手術(shù)誘導(dǎo)等。

2、(1)化學(xué)誘導(dǎo)即抗甲狀腺藥物，主要包括甲硫咪唑(mmi)和丙基硫氧嘧啶(ptu)，此方法簡單，成本較低。但藥物本身毒性會對機(jī)體及關(guān)注的疾病的產(chǎn)生干擾性影響，比如mmi作為抗甲狀腺藥物本身就具有很強(qiáng)的肝臟毒性；時(shí)間周期長；模型不穩(wěn)定，停藥后會快速恢復(fù)正常，不利于長期研究。

3、(2)低碘飲食，碘缺乏是甲狀腺功能減退癥最為常見的原因，此造模方法簡單，避免了復(fù)雜手術(shù)和侵入性操作，且與真實(shí)的臨床情況相似度高，主要被用于研究碘缺乏相關(guān)疾病。但可獲得性低,商品化的低碘食物制作復(fù)雜且價(jià)格很高,動物處理時(shí)間長,因此成本較高；在實(shí)驗(yàn)期間難以準(zhǔn)確控制其用量和時(shí)間(可控性較差)。

4、(3)放射性131ⅰ誘導(dǎo)，此造模方法較簡便，成功率高，周期較短，經(jīng)濟(jì)易行。但該方法對于造模設(shè)備要求較高，且存在放射性物質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)，在一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較少。

5、(4)手術(shù)誘導(dǎo),包括甲狀腺全切術(shù)和次全切術(shù)，術(shù)后補(bǔ)充左旋甲狀腺素可建立亞甲減模型，此造?？焖俜€(wěn)定，主要用于大鼠。但操作難度較高，手術(shù)可能損傷附近的器官，包括胸腺和大血管等，動物因出血過多、術(shù)后感染等并發(fā)癥而死亡，所以其致死率較高，術(shù)后存活率較低，使造模成功率大大降低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種甲狀腺tshr敲除小鼠模型的構(gòu)建方法及利用該小鼠構(gòu)建甲減模型和亞甲減模型的方法，可以安全、快速、高效且穩(wěn)定的構(gòu)建甲減及亞甲減小鼠模型。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種甲減模型小鼠和亞甲減模型小鼠的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

4、(1)取tshrflox/floxtg-creert2小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥12～16天后，篩選得到甲減小鼠模型；

5、(2)取tshrflox/floxtg-creert2小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥6～8天后，給予lt46～8天，篩選得到亞甲減小鼠模型。

6、作為優(yōu)選，步驟(1)和(2)中所述tshrflox/floxtg-creert2小鼠為7～9周齡雄性spf級小鼠。

7、作為優(yōu)選，步驟(1)和(2)中所述他莫昔芬的用量獨(dú)立的為30～50mg/kg/d，所述他莫昔芬注射時(shí)以玉米油溶劑為載體，腹腔注射。

8、作為優(yōu)選，步驟(1)中所述甲減小鼠模型的篩選方法為：檢測小鼠血清中tsh和ft4的水平，tsh水平較正常小鼠顯著升高，ft4水平較正常小鼠顯著下降，甲減模型構(gòu)建成功。

9、作為優(yōu)選，步驟(2)中所述lt4的用量獨(dú)立的為4～6ug/kg/d，所述lt4注射時(shí)以玉米油溶劑為載體，腹腔注射。

10、作為優(yōu)選，步驟(2)中所述亞甲減小鼠模型的篩選方法為：檢測小鼠血清中tsh和ft4的水平，tsh水平較正常小鼠顯著升高，ft4水平較正常小鼠沒有顯著差異，亞甲減模型構(gòu)建成功。

11、本發(fā)明提供了一種甲減模型小鼠和亞甲減模型小鼠的構(gòu)建方法，包括如下步驟：(1)取tshrflox/floxtg-creert2小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥12～16天后，篩選得到甲減小鼠模型；(2)取tshrflox/floxtg-creert2小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥6～8天后，給予lt46～8天，篩選得到亞甲減小鼠模型。本發(fā)明能夠基于cre-loxp重組原理，利用tshrflox/floxtg-creert2小鼠誘導(dǎo)甲狀腺tshr敲除即tshrtko小鼠模型，可以安全、快速、高效且穩(wěn)定的構(gòu)建甲減及亞甲減小鼠模型。

12、本發(fā)明的動物模型是基于cre-loxp重組原理，利用tshrflox/floxtg-creert2小鼠誘導(dǎo)甲狀腺tshr敲除，可以安全、快速、高效且穩(wěn)定的構(gòu)建甲減及亞甲減小鼠模型，避免了其他造模方式的的不足，比如耗時(shí)長、不穩(wěn)定、造模成功率低等。尤其亞甲減小鼠模型的構(gòu)建，是該領(lǐng)域的一個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)。

13、前期基因敲除鼠(tshrflox/floxtg-creert2小鼠)造模程序復(fù)雜，耗時(shí)耗力，成本高；他莫昔芬具有毒副作用，所以，合適的藥物濃度和注射時(shí)間，是該模型成功的關(guān)鍵之一。

14、總之，任何一種造模方式都存在其優(yōu)缺點(diǎn)，但每種造模方式也都具有其針對性，選擇合適的造模方式是必要的。本專利提供了一種全新的甲減及亞甲減小鼠造模方式，為該領(lǐng)域的研究提供了參考。

技術(shù)特征：

1.一種甲減模型小鼠和亞甲減模型小鼠的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)和(2)中所述tshrflox/floxtg-creert2小鼠為7～9周齡雄性spf級小鼠。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)和(2)中所述他莫昔芬的用量獨(dú)立的為30～50mg/kg/d，所述他莫昔芬注射時(shí)以玉米油溶劑為載體，腹腔注射。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)中所述甲減小鼠模型的篩選方法為：檢測小鼠血清中tsh和ft4的水平，tsh水平較正常小鼠顯著升高，ft4水平較正常小鼠顯著下降，甲減模型構(gòu)建成功。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2)中所述lt4的用量獨(dú)立的為4～6ug/kg/d，所述lt4注射時(shí)以玉米油溶劑為載體，腹腔注射。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2)中所述亞甲減小鼠模型的篩選方法為：檢測小鼠血清中tsh和ft4的水平，tsh水平較正常小鼠顯著升高，ft4水平較正常小鼠沒有顯著差異，亞甲減模型構(gòu)建成功。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及甲減和亞甲減模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種甲減模型小鼠和亞甲減模型小鼠的構(gòu)建方法，包括如下步驟：(1)取試驗(yàn)用的小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥12～16天后，篩選得到甲減小鼠模型；(2)取試驗(yàn)用的小鼠給予他莫昔芬4～6天，停藥6～8天后，給予LT46～8天，篩選得到亞甲減小鼠模型。本發(fā)明能夠基于基于Cre?loxP重組原理，利用TSHR<supgt;flox/flox</supgt;TG?CreERT2小鼠誘導(dǎo)甲狀腺TSHR敲除即TSHR<supgt;Tko</supgt;小鼠模型，可以安全、快速、高效且穩(wěn)定的構(gòu)建甲減及亞甲減小鼠模型。

技術(shù)研發(fā)人員：田利民,路瀟,劉珊珊,邵菲菲,韓子琦
受保護(hù)的技術(shù)使用者：四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2