本發(fā)明屬于植物生物，具體涉及到水稻os04g0650800基因啟動子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、水稻是人類重要的糧食作物之一，在我國有著悠久的耕種與食用歷史。據(jù)統(tǒng)計，我國水稻的種植面積占糧食作物種植面積的35％左右，產(chǎn)量占國內(nèi)糧食總產(chǎn)量的30％。由水稻黃單胞菌水稻致病變種xanthomonas?oryzae?pv.oryzae(xoo)引起的白葉枯病(ricebacterial?blight)是世界范圍內(nèi)水稻栽培中一種常見的重要病害。由于抗病品種的利用，我國白葉枯病曾銷聲匿跡了一段時間。但是近年來，該病又呈現(xiàn)連年加重趨勢，尤其在一些局部地區(qū)。防控水稻白葉枯病害最經(jīng)濟(jì)有效的手段是利用水稻自身的抗病性。

2、實(shí)驗(yàn)室前期通過分析大量水稻受白葉枯病菌(xoo)和稻瘟病菌(mor)侵染的基因芯片數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)水稻os04g0650800基因強(qiáng)烈響應(yīng)xoo和mor侵染而上調(diào)表達(dá)。依據(jù)此結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，水稻os04g0650800基因劇烈響應(yīng)xoo誘導(dǎo)而上調(diào)表達(dá)。已有研究報道，其同源基因編碼的蛋白是植物絲氨酸合成的第一個關(guān)鍵酶，絲氨酸又是細(xì)胞代謝中一種重要的中間產(chǎn)物，與植物的抗逆性息息相關(guān)。

3、然而，目前關(guān)于絲氨酸合成途徑與水稻抗病性的關(guān)系未見有報道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本部分的目的在于概述本發(fā)明的實(shí)施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實(shí)施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發(fā)明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。

2、鑒于上述和/或現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提出了本發(fā)明。

3、因此，本發(fā)明的目的是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種水稻os04g0650800基因啟動子。

4、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種水稻os04g0650800基因啟動子，所述水稻os04g0650800基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

5、作為本發(fā)明所述啟動子的一種優(yōu)選方案，其中：擴(kuò)增水稻os04g0650800基因啟動子的引物的核苷酸序列如seq?id?no.2和seq?id?no.3所示。

6、本發(fā)明的再一個目的是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種含有所述水稻os04g0650800基因啟動子的重組載體。

7、作為本發(fā)明所述重組載體的一種優(yōu)選方案，其中：所述重組載體為seq?id?no.1所示水稻os04g0650800基因啟動子與限制性內(nèi)切酶bamh?i、hind?iii酶切后的prhecyfp質(zhì)粒通過同源重組酶連接所得。

8、本發(fā)明的另一個目的是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種水稻os04g0650800基因啟動子在轉(zhuǎn)基因水稻響應(yīng)白葉枯病菌誘導(dǎo)目的基因表達(dá)中的應(yīng)用。

9、本發(fā)明有益效果：

10、(1)通過克隆os04g0650800啟動子序列，成功構(gòu)建了該啟動子驅(qū)動yfp表達(dá)的重組載體ppgdh-yfp，通過農(nóng)桿菌侵染日本晴水稻，篩選陽性植株，對t0代陽性植株苗期葉片進(jìn)行xoo接種，運(yùn)用共聚焦顯微鏡觀察植株葉片，發(fā)現(xiàn)xoo侵染陽性植株可誘導(dǎo)yfp表達(dá)，其中，yfp表達(dá)是指可以使重組載體內(nèi)的yfp相關(guān)標(biāo)簽序列成功翻譯形成黃色熒光蛋白，并可在水稻葉片組織內(nèi)觀察到黃色熒光信號，表明該啟動子序列受xoo高度誘導(dǎo)，證明了啟動子具有xoo誘導(dǎo)啟動子的表達(dá)活性與特征。

11、(2)本發(fā)明的啟動子具有病原物(xoo)誘導(dǎo)啟動子的表達(dá)活性與特征，并可以作為病原物誘導(dǎo)型表達(dá)啟動子應(yīng)用于水稻基因工程研究中。

12、(3)本發(fā)明啟動子受水稻白葉枯病菌強(qiáng)烈誘導(dǎo)，在該啟動子后添加相關(guān)抗病基因構(gòu)建載體并由農(nóng)桿菌介導(dǎo)形成的轉(zhuǎn)基因植株，可以實(shí)現(xiàn)水稻對水稻白葉枯病的抗性表征，從而增加水稻稻粒品質(zhì)與產(chǎn)量。

技術(shù)特征：

1.一種水稻os04g0650800基因啟動子，其特征在于：所述水稻os04g0650800基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.如權(quán)利要求1所述的啟動子，其特征在于：擴(kuò)增水稻os04g0650800基因啟動子的引物的核苷酸序列如seq?id?no.2和seq?id?no.3所示。

3.一種含有權(quán)利要求1所述水稻os04g0650800基因啟動子的重組載體。

4.如權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于：所述重組載體為seq?id?no.1所示水稻os04g0650800基因啟動子與限制性內(nèi)切酶bamh?i、hind?iii酶切后的prhecyfp質(zhì)粒通過同源重組酶連接所得。

5.權(quán)利要求1或2所述的水稻os04g0650800基因啟動子在轉(zhuǎn)基因水稻響應(yīng)白葉枯病菌誘導(dǎo)目的基因表達(dá)中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了水稻Os04g0650800基因啟動子及其應(yīng)用，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，通過克隆Os04g0650800基因的啟動子序列，成功構(gòu)建了該基因的啟動子驅(qū)動黃色熒光蛋白基因重組表達(dá)載體pPGDH?YFP。通過農(nóng)桿菌侵染日本晴水稻，篩選到陽性水稻植株。對T<subgt;0</subgt;代陽性稻苗接種水稻白葉枯病菌（Xanthomonas?oryzae?pv.?oryzae,Xoo），運(yùn)用共聚焦顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)Xoo侵染陽性稻株可誘導(dǎo)YFP表達(dá)。通過該啟動子對水稻進(jìn)行基因工程改造，如通過該啟動子調(diào)控目標(biāo)基因高效表達(dá)，將獲得響應(yīng)Xoo侵染的水稻植株；若使用該啟動子驅(qū)動抗病相關(guān)基因在水稻中表達(dá)，將獲得抗白葉枯病的水稻植株。

技術(shù)研發(fā)人員：孔維文,楊晨希,丁立,王益平,吳瑩瑩
受保護(hù)的技術(shù)使用者：揚(yáng)州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23