本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，特別是涉及一種具有偏向性的組胺h3受體蛋白截短體、基因及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、基因編輯技術(shù)，尤其是crispr-cas9技術(shù)，在治療某些遺傳性疾病色體隱性遺傳病，導(dǎo)致紅細胞形態(tài)異常，呈現(xiàn)鐮刀狀?；颊呖赡艹霈F(xiàn)貧血、嚴重疼痛、免疫缺陷和多器官衰竭等癥狀。最近，crispr-cas9基因編輯技術(shù)在治療鐮狀細胞病方面取得了突破。2023年，圣美國圣裘德兒童研究醫(yī)院骨髓移植和細胞治療科的a.sharma博士團隊領(lǐng)銜在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》上發(fā)表了相關(guān)研究。他們利用crispr-cas9技術(shù)編輯了hbg1和hbg2啟動子，以治療鐮狀細胞病。臨床試驗表明(nct04443907)，自體otq923藥物在治療重度鐮狀細胞病患者方面表現(xiàn)出了安全性和有效性。

2、組胺h3受體(h3r)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中分布廣泛，它被證明參與阿爾茨海默病、注意力缺陷多動癥、癲癇、應(yīng)激、焦慮、帕金森氏病等神經(jīng)行為失調(diào)有關(guān)。此外還發(fā)現(xiàn)h3r的激動劑與拮抗劑對哮喘、高血壓、感染性休克、心力衰竭、急性心肌梗死、睡眠失調(diào)、肥胖和疼痛等疾病可能有治療作用。

3、最近有研究表明，h3r拮抗劑減少腦缺血后急性期的神經(jīng)元凋亡及腦梗死體積，但其作用與組胺能神經(jīng)元無關(guān)。同時，h3r拮抗劑可促進局灶性腦缺血后的血管新生，這與組胺能神經(jīng)元無關(guān)，但與血管內(nèi)皮細胞中的h3r有關(guān)，涉及到annexin?a2(anxa2)的調(diào)控。因此，h3r有潛力成為缺血性腦卒中治療的新靶點。由于h3r主要分布在中樞，相關(guān)藥物的外周副作用少，因此組胺h3受體是非常具有臨床應(yīng)用前景的靶點。

4、h3r可以分別介導(dǎo)下游gi蛋白和阻遏蛋白信號通路。目前的研究表明，不同信號通路可分別參與不同的生理功能。如ntsr1的阻遏蛋白通路介導(dǎo)降低成癮性的治療作用，而其g蛋白通路介導(dǎo)了低溫、低血壓和運動障礙的副作用。因此，開發(fā)出具有偏向性的h3r受體，將有利于進一步區(qū)分h3r不同信號通路的功能，并且有利于高療效、低毒副作用的藥物開發(fā)。同時，偏向性受體也具有通過基因編輯技術(shù)臨床應(yīng)用的潛力，具有極高的基因治療潛力。

5、如果研究人員通過分子生物學(xué)方法對h3r進行人工改造，開發(fā)出一種具有偏向性的外源蛋白，將具有極其重要的藥用價值。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、基于此，本發(fā)明提供了一種具有偏向性的人工改造外源蛋白，通過體外擴增得到含有該外源蛋白基因的表達載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法使得腫瘤細胞表達該蛋白，從而通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗來檢測證明該外源蛋白的下游信號具有偏向性。

2、具體來說，本發(fā)明提供了一種具有偏向性的組胺h3受體蛋白截短體，所述組胺h3受體蛋白截短體的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

3、本發(fā)明還提供了編碼所述組胺h3受體蛋白截短體的基因。

4、優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

5、本發(fā)明還提供了一種含有所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系。

6、本發(fā)明還提供了一種表達載體，所述表達載體包含所述的基因。在本發(fā)明實施例中選擇質(zhì)粒pcdna3.1作為示例。

7、本發(fā)明還提供了所述組胺h3受體蛋白截短體、或所述基因、或含有所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系在制備偏向性h3受體藥物中的應(yīng)用。

8、在應(yīng)用時，將所述基因?qū)爰毎麅?nèi)表達出所述組胺h3受體蛋白截短體。

9、本發(fā)明還提供了一種偏向性h3受體藥物，所述偏向性h3受體藥物的活性成分包括所述組胺h3受體蛋白截短體、或所述基因、或含有所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系。

10、本發(fā)明利用h3受體蛋白下游獨立的信號通路，通過人工改造，構(gòu)造了g蛋白偏向性的變異型h3受體h3r339。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗表明，改造后的蛋白表現(xiàn)出良好的g蛋白偏向性，可用于研究組胺h3受體偏向性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機制，并為開發(fā)靶向h3受體藥物提供理論基礎(chǔ)和模型。在醫(yī)藥領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種具有偏向性的組胺h3受體蛋白截短體，其特征在于，所述組胺h3受體蛋白截短體的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述組胺h3受體蛋白截短體的基因。

3.如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

4.一種含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系。

5.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體包含權(quán)利要求2或3所述的基因。

6.如權(quán)利要求1所述組胺h3受體蛋白截短體、或權(quán)利要求2或3所述基因、或含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系在制備偏向性h3受體藥物中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，在應(yīng)用時，將所述基因?qū)爰毎麅?nèi)表達出所述組胺h3受體蛋白截短體。

8.一種偏向性h3受體藥物，其特征在于，所述偏向性h3受體藥物的活性成分包括權(quán)利要求1所述組胺h3受體蛋白截短體、或權(quán)利要求2或3所述基因、或含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達盒、重組載體、重組微生物或轉(zhuǎn)基因細胞系。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種具有偏向性的組胺H3受體蛋白截短體、基因及應(yīng)用。所述組胺H3受體蛋白截短體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明檢測了組胺H3受體兩條獨立的下游信號通路G蛋白和阻遏蛋白，通過人工改造，構(gòu)造了具有完全G蛋白偏向性的受體H3R339。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗表明，改造后的蛋白表現(xiàn)出良好的G蛋白偏向性，可用于研究組胺H3受體偏向性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機制，并為開發(fā)靶向H3受體藥物提供理論基礎(chǔ)和模型。在醫(yī)藥領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：張巖,陳忠,胡薇薇,沈慶亞,唐新顏,蔣磊
受保護的技術(shù)使用者：良渚實驗室
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23