本發(fā)明涉及生物化工，尤其涉及一類對硝基苯胺疏水半抗原及其合成方法和應用。

背景技術(shù)：

1、對硝基苯胺?(p-nitroaniline)?屬于苯胺類化合物，被廣泛應用于農(nóng)藥、獸藥、橡膠、染料及藥物等化學品的生產(chǎn)過程中。該類化合物的過度使用與排放已經(jīng)對環(huán)境（特別是水體）造成了很大程度的污染。對硝基苯胺具有很高的化學毒性，可以通過吸入、口服、皮膚接觸等多種方式產(chǎn)生毒害作用，誘發(fā)缺氧、黃疸、貧血等疾病。對硝基苯胺作為突發(fā)環(huán)境事件高發(fā)類和特征污染物類化學品，是環(huán)境風險防控的重點。

2、抗體是免疫分析方法的核心試劑。制備小分子抗體的關(guān)鍵步驟之一是合理設(shè)計和合成半抗原。半抗原的性質(zhì)對其免疫原性具有重要影響，直接決定了所產(chǎn)生抗體的特異性和效力。在傳統(tǒng)的半抗原設(shè)計中，疏水性通常是一個重要的考量因素，因為它可以顯著影響抗原-抗體相互作用的穩(wěn)定性和親和力。在蛋白質(zhì)和納米疫苗相關(guān)領(lǐng)域，有研究表明增強免疫原的疏水性可誘導更強的免疫應答；但在小分子化合物抗體制備領(lǐng)域，半抗原疏水性對免疫應答的影響尚不可知。由于對硝基苯胺屬于分子量較小的小分子化合物，因此其單克隆抗體制備方面存在特異性和靈敏度差、難篩選等問題。

3、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一類對硝基苯胺疏水半抗原及其合成方法和應用。

2、具體的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一類對硝基苯胺半抗原，所述對硝基苯胺半抗原含有疏水性間隔臂，其結(jié)構(gòu)式為如下所示結(jié)構(gòu)式中的任意一種：

4、i；

5、ⅱ；

6、ⅲ；

7、ⅳ。

8、本發(fā)明基于對硝基苯胺靶標物結(jié)構(gòu)，通過從間隔臂引入極性原子（f，n或o）調(diào)節(jié)靶標物的疏水性，最終篩選了在疏水性及增強免疫應答反應中有較為出色表現(xiàn)的上述4種半抗原結(jié)構(gòu)。

9、第二方面，本發(fā)明提供了對硝基苯胺人工抗原，其包括所述對硝基苯胺半抗原以及與所述對硝基苯胺半抗原偶聯(lián)的載體蛋白。

10、優(yōu)選地，所述對硝基苯胺半抗原與所述載體蛋白通過酰胺鍵偶聯(lián)。

11、優(yōu)選地，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、鑰孔血藍蛋白、甲狀腺蛋白和人血清白蛋白。

12、優(yōu)選地，采用活潑酯法將載體蛋白偶聯(lián)于所述對硝基苯胺半抗原的羧基上。

13、優(yōu)選地，對硝基苯胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)摩爾比為4.75~13.38：1。

14、本發(fā)明將半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，評價人工抗原的免疫原性。一方面，探究了半抗原疏水性增加對免疫原性影響，為半抗原合理設(shè)計提供理論支持。另一方面，為制備對硝基苯胺的高親和力抗體提供物質(zhì)材料基礎(chǔ)。

15、第三方面，本發(fā)明提供所述對硝基苯胺半抗原或者所述對硝基苯胺人工抗原的以下任一應用：

16、用于評價半抗原疏水性對免疫原性的影響；

17、用于制備對硝基苯胺特異性抗體中的應用；

18、用于檢測對硝基苯胺特異性抗體中的應用；

19、所述應用為非疾病診斷目的。

20、本發(fā)明提供的4種半抗原針對免疫分析技術(shù)中半抗原疏水性對單克隆抗體制備的影響而特別制備，為小分子化合物半抗原合理設(shè)計、高親和力抗體制備提供了一種新思路、新方法。

21、第四方面，本發(fā)明提供了所述人工抗原制備的特異性抗體，所述特異性抗體為多克隆抗體和/或單克隆抗體。

22、本發(fā)明提供的特異性抗體具有相較更高的親和力。

23、第五方面，本發(fā)明提供了所述特異性抗體制備的對硝基苯胺藥物檢測試劑或試劑盒。

24、第六方面，本發(fā)明提供了所述特異性抗體的以下任一應用：

25、在檢測對硝基苯胺藥物的熒光偏振檢測試劑盒中的應用；

26、在制備對硝基苯胺藥物的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中的應用；

27、在制備對硝基苯胺藥物的側(cè)流層析檢測試紙條中的應用；

28、所述應用為非疾病診斷目的。

29、有益效果：

30、本發(fā)明提供了一類對硝基苯胺疏水半抗原及其合成方法和應用，具體是以對硝基苯胺為基礎(chǔ)，通過從間隔臂引入極性原子（f，n或o）調(diào)節(jié)靶標物的疏水性。隨后，半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，評價人工抗原的免疫原性。本發(fā)明探究半抗原疏水性變化對免疫原性影響，一方面為半抗原合理設(shè)計提供理論支持；另一方面為制備對硝基苯胺的高親和力抗體提供物質(zhì)材料基礎(chǔ)。本發(fā)明為小分子化合物半抗原合理設(shè)計、高親和力抗體制備提供了一種新思路。

技術(shù)特征：

1.對硝基苯胺半抗原，其特征在于，所述對硝基苯胺半抗原含有疏水性間隔臂，其結(jié)構(gòu)式為如下所示結(jié)構(gòu)式中的任意一種：

2.對硝基苯胺人工抗原，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述對硝基苯胺半抗原以及與所述對硝基苯胺半抗原偶聯(lián)的載體蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述對硝基苯胺人工抗原，其特征在于，所述對硝基苯胺半抗原與所述載體蛋白通過酰胺鍵偶聯(lián)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述對硝基苯胺人工抗原，其特征在于，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、鑰孔血藍蛋白、甲狀腺蛋白和人血清白蛋白。

5.權(quán)利要求2-4任意一項所述對硝基苯胺人工抗原的制備方法，其特征在于，采用活潑酯法將載體蛋白偶聯(lián)于所述對硝基苯胺半抗原的羧基上。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，對硝基苯胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)摩爾比為4.75~13.38：1。

7.權(quán)利要求1所述對硝基苯胺半抗原或者權(quán)利要求2-4任意一項所述對硝基苯胺人工抗原的以下任一應用：

8.由權(quán)利要求2-4任意一項所述人工抗原制備的特異性抗體，所述特異性抗體為多克隆抗體和/或單克隆抗體。

9.由權(quán)利要求8所述特異性抗體制備的對硝基苯胺藥物檢測試劑或試劑盒。

10.權(quán)利要求8所述特異性抗體的以下任一應用：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物化工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一類對硝基苯胺疏水半抗原及其制備方法和應用。本發(fā)明具體是以對硝基苯胺為基礎(chǔ)，通過從間隔臂引入極性原子（F，N或O）調(diào)節(jié)靶標物的疏水性。隨后，半抗原與載體蛋白偶聯(lián)，評價人工抗原的免疫原性。本發(fā)明探究半抗原疏水性變化對免疫原性影響，一方面為半抗原合理設(shè)計提供理論支持；另一方面為制備對硝基苯胺的高親和力抗體提供物質(zhì)材料基礎(chǔ)。本發(fā)明為小分子化合物半抗原合理設(shè)計、高親和力抗體制備提供了一種新思路。

技術(shù)研發(fā)人員：王戰(zhàn)輝,溫凱,沈建忠,于雪芝,劉睿,江海洋,張英杰,潘彥彤
受保護的技術(shù)使用者：中國農(nóng)業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30