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單菌轉錄組測序方法與流程

文檔序號:40606645發(fā)布日期:2025-01-07 20:47閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.單菌轉錄組測序方法,其特征在于,包括如下步驟:

2.如權利要求1所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,包括如下步驟:

3.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述可逆多孔材料具有可逆特性,在不同條件下可以呈現固態(tài)或液體;且所述可逆多孔材料內部多孔隙,允許生物大分子通過。

4.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述天然生物高分子選自瓊脂糖、明膠、海藻酸鈉、透明質酸中的至少一種;所述人工合成材料選自聚乙二醇或聚丙烯酰胺中的至少一種。

5.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s3步驟中,通過逆轉錄酶實現對微生物樣本的rna進行標記,具體是通過添加逆轉錄酶、核苷酸鏈、反應緩沖液進行rna標記,通過添加末端轉移酶和一種脫氧核糖核苷三磷酸進行捕獲接頭添加。

6.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s4步驟中,采用微流控液滴系統(tǒng)進行單菌分割步驟如下:將微生物樣本、延伸反應試劑、編碼微球、油相分別與微流控芯片的對應入液口連接,形成包含單菌、單個編碼微球、延伸反應試劑的油包水單液滴,收集單液滴,形成單個腔室包含單個細菌的分隔。

7.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s5步驟中,將收集的單液滴進行延伸反應,以在單液滴中合成帶條形碼標記的cdna第二條鏈;延伸反應結束后將單液滴破碎,純化提取管中的cdna,進行pcr擴增;

8.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述清洗不需要離心,優(yōu)選地,所述清洗是用緩沖液進行清洗,防止試劑殘留對后續(xù)反應的影響;具體操作是用pbst清洗2-4次。

9.如權利要求7所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,還包括數據分析步驟,具體是對檢測的微生物數據進行分群聚類。

10.如權利要求1至9任一項所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述微生物樣本是環(huán)境微生物樣本或生物體排泄物、體液中的微生物樣本。


技術總結
本發(fā)明公開單菌轉錄組測序方法。首先將微生物和包裹材料混合,凝固形成果凍狀半固體,使用溶菌酶對細胞壁進行消化,透化細菌;加入逆轉錄試劑和隨機引物,對細菌內的總RNA進行捕獲合成cDNA;將包裹材料溶解,釋放出單菌,使用微流控裝置將單個細菌與標記微珠封裝到液滴中;通過酶切消化細菌中的RNA使cDNA從細菌中釋放出來,破乳后收集純化cDNA,擴增并添加測序接頭構建測序文庫,消解rRNA的cDNA產物,富集mRNA的cDNA產物。對處理后的樣本進行高通量測序,分析單個微生物的轉錄組信息。本發(fā)明使用可逆凝固多孔材料將微生物包裹起來,無需離心清洗,本發(fā)明可以對起始量較少的微生物樣本進行單細菌分析。

技術研發(fā)人員:陳海德,馮暢,董靈,劉炯
受保護的技術使用者:杭州躍真生物科技有限公司
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/1/6
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