1.單菌轉錄組測序方法,其特征在于,包括如下步驟:
2.如權利要求1所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,包括如下步驟:
3.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述可逆多孔材料具有可逆特性,在不同條件下可以呈現固態(tài)或液體;且所述可逆多孔材料內部多孔隙,允許生物大分子通過。
4.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述天然生物高分子選自瓊脂糖、明膠、海藻酸鈉、透明質酸中的至少一種;所述人工合成材料選自聚乙二醇或聚丙烯酰胺中的至少一種。
5.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s3步驟中,通過逆轉錄酶實現對微生物樣本的rna進行標記,具體是通過添加逆轉錄酶、核苷酸鏈、反應緩沖液進行rna標記,通過添加末端轉移酶和一種脫氧核糖核苷三磷酸進行捕獲接頭添加。
6.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s4步驟中,采用微流控液滴系統(tǒng)進行單菌分割步驟如下:將微生物樣本、延伸反應試劑、編碼微球、油相分別與微流控芯片的對應入液口連接,形成包含單菌、單個編碼微球、延伸反應試劑的油包水單液滴,收集單液滴,形成單個腔室包含單個細菌的分隔。
7.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,s5步驟中,將收集的單液滴進行延伸反應,以在單液滴中合成帶條形碼標記的cdna第二條鏈;延伸反應結束后將單液滴破碎,純化提取管中的cdna,進行pcr擴增;
8.如權利要求2所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述清洗不需要離心,優(yōu)選地,所述清洗是用緩沖液進行清洗,防止試劑殘留對后續(xù)反應的影響;具體操作是用pbst清洗2-4次。
9.如權利要求7所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,還包括數據分析步驟,具體是對檢測的微生物數據進行分群聚類。
10.如權利要求1至9任一項所述的單菌轉錄組測序方法,其特征在于,所述微生物樣本是環(huán)境微生物樣本或生物體排泄物、體液中的微生物樣本。