背景技術(shù)：

1、白細(xì)胞介素-2(il-2)是一種在維持免疫耐受中起作用的細(xì)胞因子；調(diào)節(jié)t輔助性(th)細(xì)胞功能，尤其是th2功能；foxp3+cd4+調(diào)節(jié)性t(treg)細(xì)胞的分化、存活和功能；并與先天淋巴細(xì)胞(ilc)相互作用。

2、白細(xì)胞介素-33(il-33)是一種細(xì)胞因子，其野生型在其n末端含有核定位信號(hào)(nuclear?localization?signal)。蛋白酶切割產(chǎn)生18kda的c末端片段，其在本文中可以被稱為截短的il-33。截短的il-33可以刺激先天淋巴細(xì)胞(ilc)、th2細(xì)胞、treg細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，由此上調(diào)il-2、il-4、il-5和il-13的表達(dá)，并降低促炎性th1和th17應(yīng)答。

3、本領(lǐng)域已經(jīng)描述了包含il-2結(jié)構(gòu)域和截短的il-33結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。參見例如wo2018/140504、us2019/0365714、us?9,840,545、us10,851,145和us20210261640，其公開內(nèi)容特此通過(guò)引用并入。此類融合蛋白可以治療如自身免疫性疾病和病癥、炎癥等疾病。然而，已經(jīng)觀察到許多此類融合蛋白具有一種或多種不期望的特性，如聚集、體內(nèi)快速清除或隨時(shí)間推移喪失il-33活性。

4、因此，需要包含il-2結(jié)構(gòu)域和截短的il-33結(jié)構(gòu)域而沒(méi)有一種或多種不期望特性的融合蛋白。il-33由于某些殘基的自發(fā)氧化而失去其活性。還需要此類融合蛋白，其易于由重組生物體表達(dá)，易于純化，并且分別具有與野生型il-2和野生型il-33相當(dāng)?shù)膇l-2和il-33活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開提供了組合物，所述組合物包含與seq?id?no:13具有至少90％同一性的白細(xì)胞介素-2(il-2)和截短的白細(xì)胞介素-33(il-33)，所述截短的il-33包含與seq?id?no:1具有至少90％同一性的序列。

2、本公開還提供了一種融合蛋白，所述融合蛋白包含與seq?id?no:13具有至少90％同一性的白細(xì)胞介素-2(il-2)結(jié)構(gòu)域和包含與seq?id?no:1具有至少90％同一性的序列的截短的白細(xì)胞介素-33(il-33)結(jié)構(gòu)域。

3、在所述截短的il-33多肽或結(jié)構(gòu)域中，seq?id?no:1的n60、c97、c116、c121和c148中的至少一個(gè)可以被單個(gè)氨基酸取代。例如，seq?id?no:1的n60可以被ser或asp取代，seqid?no:1的c97可以被gly取代，和/或seq?id?no:1的c116可以被phe取代。截短的il-33多肽或結(jié)構(gòu)域可以具有選自由seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6、seq?idno:7和seq?id?no:8組成的組；或選自由seq?id?no:3、seq?id?no:4或seq?id?no:7組成的組的序列。

4、所述融合蛋白可以進(jìn)一步包含任選的接頭，如寡肽接頭。例如，接頭可以包含ggggs(seq?id?no:9)。所述接頭可以具有序列g(shù)gggsggggsggggs(seq?id?no:10)。

5、所述il-2多肽或結(jié)構(gòu)域可以具有seq?id?no:13、seq?id?no:14、seq?id?no:15或seq?id?no:16的序列。

6、所述融合蛋白可以進(jìn)一步包含任選的信號(hào)肽。所述信號(hào)肽可以具有seq?id?no:11的序列。

7、在所述融合蛋白中，所述結(jié)構(gòu)域可以按從n末端到c末端的順序?yàn)槿芜x的信號(hào)肽；所述白細(xì)胞介素-2(il-2)結(jié)構(gòu)域；任選的接頭；以及所述截短的白細(xì)胞介素-33(il-33)結(jié)構(gòu)域。

8、本公開還包含一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如本文所描述的組合物或融合蛋白。

9、所述藥物組合物可以進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載劑和任選地另外的治療劑。

10、本公開包含一種多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼本文所描述的融合蛋白的至少一部分的核酸序列。

11、另一方面，本公開包含一種載體，所述載體包含與啟動(dòng)子可操作地連接的多核苷酸。

12、在又另一方面，本公開包含一種重組宿主細(xì)胞，所述重組宿主細(xì)胞包含多核苷酸或載體。

13、本公開包含一種用于治療疾病或病癥的方法，所述方法包括向有需要的對(duì)象施用有效量的本文所描述的藥物組合物。

14、所述疾病或病癥可以是急性腎損傷、強(qiáng)直性脊柱炎、自身免疫性心肌病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性淋巴增生綜合征、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多內(nèi)分泌綜合征、自身免疫性蕁麻疹、自身免疫性葡萄膜炎、克羅恩氏病(crohn'sdisease)、皮肌炎、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、移植物抗宿主(gvh)病、橋本氏甲狀腺炎(hashimoto's?thyroiditis)、特發(fā)性炎性腸病(ibd)、炎性脫髓鞘疾病、炎性神經(jīng)病、胰島炎、間質(zhì)性膀胱炎、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、紅斑狼瘡、狼瘡性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎、皮膚狼瘡、iga腎病、膜性腎病(mpgn)、顯微鏡下結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無(wú)力、肥胖癥、胰腺炎、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化(pbc)、原發(fā)性硬化性膽管炎、進(jìn)行性炎性神經(jīng)病、腎缺血再灌注損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征(sjogren'ssyndrome)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、移植排斥、1型糖尿病、2型糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、血管炎、銀屑病、特應(yīng)性皮炎、尋常型天皰瘡或韋格納氏肉芽腫病(wegener's?granulomatosis)。

15、所述疾病或病癥可以是癌癥。所述癌癥可以是急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性髓樣白血病(aml)、急性髓細(xì)胞性白血病、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、附件癌、星形細(xì)胞瘤、基底細(xì)胞癌、b細(xì)胞淋巴瘤、腦癌、膽道癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、支氣管腫瘤、原發(fā)原因不明的癌、心臟腫瘤、宮頸癌、脊索瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、顱咽管瘤、導(dǎo)管癌、胚胎腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、室管膜瘤、食管癌、鼻腔神經(jīng)膠質(zhì)瘤、纖維組織細(xì)胞瘤、尤文氏肉瘤(ewing?sarcoma)、眼癌、生殖細(xì)胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、組織細(xì)胞增多病、霍奇金淋巴瘤(hodgkin?lymphoma)、下咽癌、眼內(nèi)黑素瘤、胰島細(xì)胞瘤、卡波西肉瘤(kaposisarcoma)、腎癌、朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、喉癌、嘴唇和口腔癌、肝癌、原位小葉癌、肺癌、巨球蛋白血癥、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、黑色素瘤、默克爾細(xì)胞癌、間皮瘤、隱性原發(fā)性轉(zhuǎn)移性鱗狀頸部癌、牽涉nut基因的中線呼吸道癌、口腔癌、多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、蕈樣真菌病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生異常/骨髓增生性腫瘤、鼻腔和鼻旁鼻竇癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳頭瘤病、副神經(jīng)節(jié)瘤、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細(xì)胞瘤、垂體瘤、胸膜肺母細(xì)胞瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、腎細(xì)胞癌、腎盂和輸尿管癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌樣瘤、唾液腺癌、塞扎里綜合征(sezary?syndrome)、皮膚癌、小細(xì)胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、脊髓瘤、胃癌、t細(xì)胞淋巴細(xì)胞性白血病、t細(xì)胞淋巴瘤、畸胎瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、陰道癌、外陰癌和威爾姆斯瘤(wilms?tumor)。

16、所述癌癥可以是黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、腎癌、胃癌、結(jié)腸癌、睪丸癌、頭頸癌、胰腺癌、腦癌、b細(xì)胞淋巴瘤、急性髓細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、t細(xì)胞淋巴細(xì)胞性白血病、膀胱癌或肺癌。

17、取決于il-2結(jié)構(gòu)域，所述方法可以刺激t調(diào)節(jié)(treg)細(xì)胞、t輔助2(th2)細(xì)胞、先天淋巴細(xì)胞(ilc)、細(xì)胞毒性t細(xì)胞、自然殺傷(nk)細(xì)胞、nk-t細(xì)胞、st2+細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞的增殖和/或活化。

18、取決于il-2結(jié)構(gòu)域，所述方法可以促進(jìn)抗炎性m2巨噬細(xì)胞并且抑制促炎性m1巨噬細(xì)胞，或者激活m1巨噬細(xì)胞以誘導(dǎo)炎癥。m2巨噬細(xì)胞可以抑制選自由以下組成的組的組織或器官中的炎癥：胰腺、肝臟、腎臟、脂肪組織、唾液腺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)和相關(guān)器官。m1巨噬細(xì)胞可以促進(jìn)全身或局部抗腫瘤免疫應(yīng)答。

19、取決于所述il-2結(jié)構(gòu)域，所述方法可以上調(diào)或下調(diào)共刺激分子(包含但不限于cd80(b7-1)、cd86(b7-2)、cd40、icos、mhc-i、mhc-ii、pd1、pd-l1、gitr、baff-r、ox40、41bb、dr3、cr2)在抗原呈遞細(xì)胞上的表達(dá)，所述抗原呈遞細(xì)胞包含但不限于樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、b細(xì)胞、先天淋巴細(xì)胞、nk細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞。

20、所述方法可以進(jìn)一步包括向?qū)ο笫┯糜行Я康挠糜诩膊』虿“Y的第二療法，其中所述第二療法不是本文所描述的融合蛋白。

21、所述第二療法可以是細(xì)胞療法或基因療法。

22、另一方面，本公開包含一種用于刺激對(duì)象的t調(diào)節(jié)(treg)細(xì)胞增殖和/或活化的方法，所述方法包括：從所述對(duì)象中分離t細(xì)胞；以及使經(jīng)分離的t細(xì)胞與以下各項(xiàng)接觸：有效量的組合物、融合蛋白、重組宿主細(xì)胞或表達(dá)il-2或截短的il-33中的至少一者的細(xì)胞，如本文所描述。

23、本公開還包含試劑盒，所述試劑盒包含本文所描述的藥物組合物；以及用于執(zhí)行治療以炎癥為特征的疾病或病癥的方法的說(shuō)明書，所述方法包括向有需要的對(duì)象施用有效量的所述藥物組合物。