本發(fā)明屬于焦磷酸有機(jī)銨鹽，尤其涉及一種焦磷酸有機(jī)銨鹽固體的制備方法。

背景技術(shù)：

1、天然核苷多磷酸不但在生命活動(dòng)中扮演著重要作用，而且與其類似物一起作為重要的工具在眾多生命科學(xué)及醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。在眾多核苷多磷酸生物分子中，核苷三磷酸(nucleoside?triphosphate，ntp)是維持生命體系運(yùn)轉(zhuǎn)的一類重要物質(zhì)。天然核苷三磷酸包括：(脫氧)腺苷三磷酸((d)atp)，(脫氧)鳥(niǎo)苷三磷酸((dgtp)，(脫氧)胞苷三磷酸((d)ctp)，尿苷三磷酸utp)，脫氧胸苷三磷酸(dttp)。脫氧核苷三磷酸(dntps)是構(gòu)成dna結(jié)構(gòu)的基本單元，隨著1977年第一代dna測(cè)序技術(shù)的開(kāi)端，到現(xiàn)在四十幾年的時(shí)間里，飛速發(fā)展。目前dna測(cè)序所用到的核苷三磷酸大多是化學(xué)合成的，目前合成dntps比較常見(jiàn)的有“一鍋三步法”、“水楊酸亞磷酰氯法”和“磷酰胺法”。其中“一鍋三步法”和“水楊酸亞磷酰氯法”在反應(yīng)過(guò)程中都是先形成核苷單磷化合物，然后再與焦磷酸鹽反應(yīng)，生成核苷三磷酸。這其中所用到的焦磷酸鹽，主要是指三丁基焦磷酸銨((bu3nh)2ppi)或四(三丁基)焦磷酸銨((bu4n)2ppi)。

2、現(xiàn)有技術(shù)制備焦磷酸大多是用焦磷酸鈉或十水焦磷酸鈉為原料，通過(guò)離子交換樹(shù)脂使焦磷酸鈉變成焦磷酸，然后再與有機(jī)胺的醇溶液反應(yīng)，得到有機(jī)胺的焦磷酸水溶液，接著濃縮大部分的水，形成漿糊狀的產(chǎn)物。由于焦磷酸有機(jī)銨鹽非常容易吸水，所以很難得到干燥的固體粉末。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種焦磷酸有機(jī)銨鹽固體的制備方法，本發(fā)明提供的方法能夠制備得到焦磷酸有機(jī)銨鹽固體，且制備方法工藝簡(jiǎn)單、成本較低。

2、本發(fā)明提供了一種焦磷酸有機(jī)銨鹽固體的制備方法，包括：

3、在負(fù)壓作用下，通過(guò)乙醇蒸餾的方法將焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液中的水去除，將得到的產(chǎn)物進(jìn)行冷凍后再進(jìn)行冷凍干燥，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽固體。

4、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液的制備方法可以包括：

5、將焦磷酸和有機(jī)胺的醇溶液反應(yīng)，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液。

6、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸的制備方法可以包括：

7、將焦磷酸無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行離子交換，得到焦磷酸。

8、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸無(wú)機(jī)鹽可以為焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶液，可以通過(guò)將焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶解在水中，得到焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶液；水可以為純凈水；溶解可以為攪拌溶解。在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸無(wú)機(jī)鹽可以選自焦磷酸鈉及其結(jié)晶水合物、焦磷酸鉀及其結(jié)晶水合物中的一種或幾種；焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶液中水的體積和焦磷酸無(wú)機(jī)鹽的質(zhì)量的比例可以為(10～100)ml：1g，也可以為(10～50)ml：1g，還可以為(10～20)ml：1g。

9、在本發(fā)明的實(shí)施例中，離子交換可以為陽(yáng)離子交換，離子交換可以采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以為強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，如可以采用市售商品型號(hào)dowex?50、國(guó)產(chǎn)732、amberlite?ir、diaion?sk中的一種或幾種。

10、在本發(fā)明的實(shí)施例中，離子交換可以為將焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶液通過(guò)強(qiáng)酸陽(yáng)離子樹(shù)脂，溶液流出后收集ph＜6的溶液，得到焦磷酸。

11、在本發(fā)明的實(shí)施例中，有機(jī)胺的醇溶液可以通過(guò)將醇和有機(jī)胺混合制備得到；混合可以在攪拌的條件下進(jìn)行；攪拌可以采用磁力攪拌子進(jìn)行攪拌；醇可以選自甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、叔丁醇的一種或幾種；有機(jī)胺可以選自一級(jí)胺、二級(jí)胺或三級(jí)胺中的一種或幾種，如三級(jí)胺；一級(jí)胺可以選自乙胺、丙胺、正丁胺、叔丁胺中的一種或幾種；二級(jí)胺可以選自二乙胺、二丙胺、二正丁胺、二叔丁胺中的一種或幾種；三級(jí)胺可以選自三乙胺、三丙胺、三正丁胺、三叔丁胺和n,n-二異丙基乙胺中的一種或幾種，如三正丁胺。在本發(fā)明的實(shí)施例中，有機(jī)胺的醇溶液中的醇的體積和焦磷酸無(wú)機(jī)鹽的質(zhì)量的比例可以為(1～10)ml：1g，也可以為(1～5)ml：1g；有機(jī)胺的醇溶液中的有機(jī)胺和焦磷酸無(wú)機(jī)鹽的摩爾比可以為(1～5):1，也可以為(2～3):1。

12、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸和有機(jī)胺的醇溶液反應(yīng)過(guò)程中可以將焦磷酸在攪拌下滴入有機(jī)胺的醇溶液中；反應(yīng)過(guò)程中可以在攪拌的條件下進(jìn)行；反應(yīng)的溫度可以為-20～50℃，也可以為-10～20℃，還可以為-5～10℃；反應(yīng)的時(shí)間可以為1～120min，也可以為10～80min，也可以為10～50min，還可以為10～30min。

13、在本發(fā)明的實(shí)施例中，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液后可以對(duì)其進(jìn)行濃縮，得到糊狀產(chǎn)物，然后將此糊狀產(chǎn)物利用乙醇蒸餾去除其中的水分；濃縮的方法可以為在負(fù)壓的條件下減壓蒸餾去除焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液中的水和醇；可以將焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液與真空泵連接，通過(guò)真空泵的抽真空實(shí)現(xiàn)負(fù)壓條件；真空泵可以選自油泵、水泵或隔膜泵，如油泵或隔膜泵；負(fù)壓條件的真空度可以為1～20pa，也可以為5～15pa，還可以為10pa；減壓蒸餾的溫度可以為0～50℃，也可以為10～40℃，還可以為20～30℃；去除焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液中水和醇的體積可以為焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液總體積的60～90％，也可以為80～90％。

14、在本發(fā)明的實(shí)施例中，乙醇蒸餾的方法可以包括：

15、將乙醇和焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液混合，得到混合物；

16、在負(fù)壓作用下，將上述混合物中的乙醇進(jìn)行蒸餾，去除其中的水分。

17、在本發(fā)明的實(shí)施例中，乙醇和焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液或者上述糊狀產(chǎn)物的體積比可以為(1～10):1，也可以為(1～8):1，也可以為(1～4):1，還可以為(1～2):1。

18、在本發(fā)明的實(shí)施例中，負(fù)壓作用可以通過(guò)真空泵實(shí)現(xiàn)，如將上述混合物與真空泵連通，通過(guò)真空泵的抽真空作用使上述混合物處于負(fù)壓狀態(tài)；真空泵可以選自油泵、水泵或隔膜泵，如油泵或隔膜泵；負(fù)壓作用的真空度可以為1～20pa，也可以為5～15pa，還可以為10pa。

19、在本發(fā)明的實(shí)施例中，蒸餾可以采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀并在抽真空的作用下使乙醇減壓蒸餾；減壓蒸餾的溫度可以為0～50℃，也可以為10～40℃，還可以為20～30℃。

20、在本發(fā)明的實(shí)施例中，采用乙醇蒸餾去除糊狀產(chǎn)物中的水分后得到粘稠液體后，將得到的粘稠液體冷凍后進(jìn)行冷凍干燥，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽固體。

21、在本發(fā)明的實(shí)施例中，冷凍可以采用冰箱進(jìn)行冷凍；可以將粘稠液體通過(guò)冰箱冷凍成固體；冷凍的溫度可以為0℃以下，如-20～-80℃，也可以為-40～-60℃；冷凍的時(shí)間可以為1～48h，也可以為12～24h。

22、在本發(fā)明的實(shí)施例中，冷凍干燥可以采用冷凍干燥機(jī)；冷凍干燥的壓力可以為1～20pa，也可以為2～10pa，還可以為2～5pa；冷凍干燥的時(shí)間可以為10～96h，也可以為24～48h；冷凍干燥的溫度可以為-20～-80℃，也可以為-40～-60℃。

23、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸有機(jī)銨鹽固體的制備方法可以包括：

24、將焦磷酸無(wú)機(jī)鹽經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂交換得到焦磷酸，然后將其與有機(jī)胺的醇溶液反應(yīng)，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽的溶液，將其通過(guò)濃縮得到漿糊狀的產(chǎn)物；

25、向此漿糊狀的產(chǎn)物中加入乙醇，得到乙醇與焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液的混合物；然后將此混合物接入真空泵，在負(fù)壓下通過(guò)乙醇的蒸餾將焦磷酸有機(jī)銨鹽溶液中的水帶走，當(dāng)乙醇完全蒸餾，將剩余粘稠液體放置于冰箱中，最后冷凍干燥，得到焦磷酸有機(jī)銨鹽固體。

26、在本發(fā)明的實(shí)施例中，焦磷酸有機(jī)銨鹽固體的制備方法可以包括以下步驟：

27、1)取焦磷酸無(wú)機(jī)鹽于燒杯中，加入純凈水充分?jǐn)嚢枞芙猓?/p>

28、2)將溶解好的焦磷酸無(wú)機(jī)鹽溶液加入強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂，使溶液流出，收集ph＜6的溶液；

29、3)取另一反應(yīng)瓶，加入磁力攪拌子，加入醇和有機(jī)胺，攪拌；

30、4)將步驟2)的收集液攪拌下滴入步驟3)的燒瓶中，攪拌；

31、5)取出反應(yīng)瓶，連接到真空泵并減壓蒸餾除去水和醇，得到漿糊狀產(chǎn)物；

32、6)向反應(yīng)瓶中加入乙醇，得到乙醇與焦磷酸有機(jī)銨溶液的混合物；

33、7)將乙醇與焦磷酸有機(jī)銨溶液的混合物連接到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，抽真空使乙醇減壓蒸餾，得到粘稠狀液體；

34、8)將步驟7)的粘稠狀液體放入冰箱，凍成固體；

35、9)將步驟8)的固體從冰箱取出，放置于冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥得到焦磷酸有機(jī)銨固體。

36、如果將得到的焦磷酸有機(jī)銨的漿糊狀物用乙醇反復(fù)帶水，然后配成dmf溶液使用，則焦磷酸有機(jī)銨的dmf溶液不易保存，而且dmf容易吸水，取用比較麻煩；若用四丁基氫氧化銨溶液與焦磷酸反應(yīng)，并用吡啶共沸除水，可以得到焦磷酸有機(jī)鹽的固體，但是四丁基氫氧化銨價(jià)格比較昂貴，成本高，不利于放大生產(chǎn)。本發(fā)明提供了一種能得到焦磷酸有機(jī)銨鹽固體且價(jià)格便宜的方法，解決了焦磷酸有機(jī)銨鹽不好除水，成本價(jià)格高昂的問(wèn)題；本發(fā)明提供的方法能夠制備得到焦磷酸有機(jī)銨鹽的固體，便于儲(chǔ)存運(yùn)輸，原料易得且便宜，大大降低了生產(chǎn)成本。