本發(fā)明涉及農(nóng)用微生物菌劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種微生物殺蟲劑的制備方法。
背景技術(shù)：
植物病蟲害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵，據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(fao)統(tǒng)計(jì)每年因植物遭受病害造成的減產(chǎn)平均損失為總產(chǎn)量的15％～20％。長期以來，用于防治或撲滅農(nóng)田害蟲制劑一般均為化學(xué)農(nóng)藥，如六六六、敵敵畏等。長期頻繁使用化學(xué)農(nóng)藥，導(dǎo)致害蟲抗藥性的出現(xiàn)，使化學(xué)農(nóng)藥的效力逐漸降低。目前，主要解決方式是加大用藥量，直接導(dǎo)致農(nóng)業(yè)成本提高；害蟲抗藥性加強(qiáng)，防治難度加大；天敵被殺死，生態(tài)平衡遭到破壞；毒害物質(zhì)在農(nóng)副產(chǎn)品中殘留、積累，危害廣大人民的身體健康。因此，尋找廣譜、高效、低毒的生物農(nóng)藥已成為科研人員及農(nóng)藥使用人員的共識(shí)。
微生物殺蟲劑是利用微生物活體或其代謝產(chǎn)物來防治害蟲的。它具有特異性強(qiáng)，防治效果好，對(duì)人畜安全，不破壞生態(tài)平衡，害蟲不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)。目前的微生物殺蟲劑主要包含三類：1、細(xì)菌類殺蟲劑：細(xì)菌殺蟲劑是應(yīng)用最早的微生物殺蟲劑，根據(jù)對(duì)昆蟲致病性的不同，分為轉(zhuǎn)性病原體、堿性病原體和潛勢(shì)病原體。目前被開發(fā)成產(chǎn)品投入實(shí)際使用的主要有4種：伯克氏霍爾德菌屬、球形芽孢桿菌、日本金龜子芽孢桿菌和緩病芽孢桿菌，其中伯克氏霍爾德菌屬能有效抑制病原菌在植物表面的存活，顯著提高作物抗病能力，促進(jìn)作物生長。2、真菌類殺蟲劑：真菌類殺蟲劑種類繁多，目前記載的約有800多種，其中大部分是兼性或轉(zhuǎn)性病原體，研究應(yīng)用較多的有白僵菌、綠僵菌、擬青霉菌、輪枝菌等。但其生長和繁殖在很大程度上受外界條件的限制，在實(shí)際應(yīng)用中收到環(huán)境限制。3、病毒類殺蟲劑：昆蟲病毒的感染途徑主要有食入感染和皮膚感染，目前該類制劑正處于研發(fā)階段，工業(yè)化生產(chǎn)還不成熟。
綜上，現(xiàn)有的微生物殺蟲劑在實(shí)際應(yīng)用過程中應(yīng)用范圍較為單一，菌種間的拮抗作用強(qiáng)，殺蟲譜較窄；在工業(yè)化應(yīng)用和環(huán)境適應(yīng)性、抗逆性等方面現(xiàn)有產(chǎn)品也存在諸多不足，限制了微生物制劑在農(nóng)作物殺蟲上的廣泛應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是通過菌種選育和發(fā)酵工藝優(yōu)化，設(shè)計(jì)出一種工業(yè)化微生物殺蟲劑的生產(chǎn)方法，即利用伯克氏霍爾德菌屬作為生產(chǎn)菌株，應(yīng)用本發(fā)明所設(shè)計(jì)的工藝方案和優(yōu)化的培養(yǎng)基配方，增強(qiáng)產(chǎn)品的殺蟲性能，并擴(kuò)展其實(shí)際應(yīng)用范圍。
為實(shí)現(xiàn)上述的發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌發(fā)酵方法，其包含如下步驟：
步驟1：將伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌接種于斜面培養(yǎng)基進(jìn)行斜面培養(yǎng)；
步驟2：將步驟1得到培養(yǎng)液接種于搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)；
步驟3：將步驟2得到的培養(yǎng)液接種于種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)；
步驟4：將步驟3得到的培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
步驟5：將步驟4得到的發(fā)酵液進(jìn)行離心，將沉淀物；烘干，粉碎即得。
優(yōu)選的，所述伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌發(fā)酵方法，其包含如下步驟：
步驟1：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌斜面培養(yǎng)
將伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌接種于斜面培養(yǎng)基進(jìn)行斜面培養(yǎng)，接種質(zhì)量百分比為5～10％，所述斜面培養(yǎng)溫度為28℃～32℃，時(shí)間為24h～48h，所述斜面培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：氯化鈉0.5％，蛋白胨0.5％～1％，瓊脂粉1.8％～2％，其余為水，將ph值調(diào)整至6.5～7.5；
步驟2：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌搖瓶培養(yǎng)
將步驟1得到培養(yǎng)液接種于搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，接種質(zhì)量百分比為5～10％，所述搖瓶培養(yǎng)溫度為28℃～32℃，時(shí)間為24h～36h，轉(zhuǎn)速為180rpm～220rpm，所述搖瓶培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：磷酸氫二鉀0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余為水，將ph值調(diào)至6.5～7.5；
步驟3：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌種子培養(yǎng)
將步驟2得到的培養(yǎng)液接種于種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，所述種子培養(yǎng)溫度為28℃～32℃，時(shí)間為24h～48h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，接種質(zhì)量百分比為1％～2％，每分鐘通氣比(空氣體積：發(fā)酵液體積)為0.5:1～1:1，所述種子培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：磷酸氫二鉀0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余為水，將ph值調(diào)至6.5～7.5，裝料系數(shù)為0.5～0.8；
步驟4：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌發(fā)酵培養(yǎng)
將步驟3得到的培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為28℃～32℃，時(shí)間為24h～48h，接種質(zhì)量百分比為1％～2％，起始攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，當(dāng)溶解氧低于20％時(shí)增加攪拌轉(zhuǎn)數(shù)和通氣量，維持溶氧在20％以上，當(dāng)發(fā)酵液中菌體數(shù)量≥5×108cfu/ml時(shí)發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵罐液體排出，裝料系數(shù)為0.5～0.8；
步驟5：將步驟4得到的發(fā)酵液進(jìn)行離心，將沉淀物；烘干，粉碎即得。
優(yōu)選的，所述步驟4中所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，消泡劑0.005％～0.02％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0。
所述步驟4中所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，石菖蒲提取物0.8％，消泡劑0.005％～0.02％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0。
優(yōu)選的，所述步驟4中所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，石菖蒲提取物0.4％，桑葉提取物0.4％，消泡劑0.005％～0.02％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0。
各步驟中培養(yǎng)基的ph通過0.1mnaoh或0.1mhcl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
本發(fā)明中的接種質(zhì)量百分比是指接種的培養(yǎng)液占培養(yǎng)基的質(zhì)量百分比。
本發(fā)明提供了一種伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌，由前述發(fā)酵方法制備得到。
本發(fā)明還提供了一種微生物殺蟲劑，其含有所述的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌。
本發(fā)明還提供了一種微生物殺蟲劑，其包含80-90重量份的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌和10-20重量份的木犀草素。
本發(fā)明所述的微生物殺蟲劑在使用時(shí)，與水進(jìn)行混合均勻即可，每1升水加入5-30g微生物殺蟲劑。
為了防止伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌等或有效成分因腐敗而失活，本發(fā)明還可以添加穩(wěn)定劑，提高微生物殺蟲劑的保質(zhì)期，對(duì)穩(wěn)定劑的選擇盡量選擇對(duì)人體無害的，這樣在對(duì)蔬菜、果樹等進(jìn)行殺蟲的過程中不會(huì)損害人體健康。
為實(shí)現(xiàn)這一目的，本發(fā)明還提供了一種更優(yōu)選的微生物殺蟲劑，其包含80-90重量份的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌和10-20重量份的木犀草素，1-5份穩(wěn)定劑。
所述穩(wěn)定劑為佛手柑內(nèi)酯和/或紫蘇醛。
優(yōu)選的，所述穩(wěn)定劑由20-30wt％佛手柑內(nèi)酯和70-80wt％紫蘇醛組成。
本發(fā)明中所述伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌優(yōu)選為burkholderiaxenovorans。
本發(fā)明的有益效果為：
1、本發(fā)明的微生物殺蟲劑依附于植物體生長健全生育過程；可以分解連續(xù)種植田地中積畜的有害物質(zhì)，用于植物蟲害防控，促進(jìn)植物生長和生物修復(fù)等功能。伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌能產(chǎn)生多種具有抗菌活性的代謝產(chǎn)物如鐵載體(pyochenlin，pyoverdine)、吩嗪、硝吡咯菌素、苯基吡咯、單萜生物堿、cepaciamidea、cepacidinea、cepacina等?，F(xiàn)已應(yīng)用于生物防治，分解有毒物質(zhì)等領(lǐng)域，使害蟲進(jìn)食后患敗血癥死亡，對(duì)瓜果、蔬菜、果樹、大田類作物的菜青蟲、小菜蛾、甜蛾、斜紋夜蛾、甘藍(lán)夜蛾、煙青蟲、玉米螟、稻縱卷葉螟、二化螟、小地老虎等都有毒殺作用。
2、本發(fā)明在研究中發(fā)現(xiàn)，添加石菖蒲提取物和桑葉提取物，對(duì)伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的培養(yǎng)非常有利，極大地提高了伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的生長速率和單位時(shí)間內(nèi)的產(chǎn)率，是本發(fā)明的重大發(fā)現(xiàn)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。
實(shí)施例中的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌為burkholderiaxenovoranslb400，縮寫為b.xenovorans(lb400)，購買自瑞典哥德堡大學(xué)菌種保藏中心，菌種編號(hào)為ccug46959。
實(shí)施例中蛋白胨為福建仙游三和生物科技有限公司提供醫(yī)藥級(jí)蛋白胨。
實(shí)施例中磷酸氫二鉀由成都藍(lán)劍化工有限公司提供。
實(shí)施例中消泡劑為宿州市華潤化工有限責(zé)任公司提供sxp-106有機(jī)硅消泡劑。
實(shí)施例中牛肉膏為浙江東成藥業(yè)有限公司提供的牛肉粉(培養(yǎng)基專用)。
實(shí)施例中所述石菖蒲提取物的制備方法為：將石菖蒲粉碎，過16目篩，得到石菖蒲粉末；將石菖蒲粉末與水以固液質(zhì)量比1：20混合均勻；在超聲功率150w、超聲頻率40khz的條件下于60℃超聲提取2小時(shí)，以轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分進(jìn)行離心20min，取上層清夜在真空度0.06mpa、溫度為70℃下進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至密度為1.05g/ml(25℃)，得到石菖蒲提取物。石菖蒲，拉丁學(xué)名：acorustatarinowiischott，為天南星科植物石菖蒲(acorustatarinowii)的根莖。具體采用安國市躍杰中藥材有限公司提供的石菖蒲。
實(shí)施例中所述桑葉提取物的制備方法為：將桑葉粉碎，過16目篩，得到桑葉粉末；將桑葉粉末與水以固液質(zhì)量比1：20混合均勻；在超聲功率150w、超聲頻率40khz的條件下于60℃超聲提取2小時(shí)，以轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分進(jìn)行離心20min，取上層清夜在真空度0.06mpa、溫度為70℃下進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至密度為1.08g/ml(25℃)，得到桑葉提取物。桑葉為亳州百川藥業(yè)有限公司提供的霜桑葉。
木犀草素，cas號(hào)：491-70-3。
佛手柑內(nèi)酯，cas號(hào)：484-20-8。
紫蘇醛，cas號(hào)：18031-40-8。
各實(shí)施例的各步驟中培養(yǎng)基的ph通過0.1mnaoh或0.1mhcl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
實(shí)施例1
步驟1：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌斜面培養(yǎng)
將伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌接種于斜面培養(yǎng)基進(jìn)行斜面培養(yǎng)，接種質(zhì)量百分比為5％，所述斜面培養(yǎng)溫度為28℃，時(shí)間為24h，所述斜面培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：氯化鈉0.5％，蛋白胨1％，瓊脂粉1.8％，其余為水，將ph值調(diào)整至7.0；
步驟2：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌搖瓶培養(yǎng)
將步驟1得到培養(yǎng)液接種于搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，接種質(zhì)量百分比為10％，所述搖瓶培養(yǎng)溫度為28℃，時(shí)間為24h，轉(zhuǎn)速為220rpm，所述搖瓶培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：磷酸氫二鉀0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余為水，將ph值調(diào)至7.0；
步驟3：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌種子培養(yǎng)
將步驟2得到的培養(yǎng)液接種于種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，所述種子培養(yǎng)溫度為32℃，時(shí)間為48h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，接種質(zhì)量百分比為2％，每分鐘通氣比(空氣體積：發(fā)酵液體積)為0.7:1，所述種子培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：磷酸氫二鉀0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余為水，將ph值調(diào)至7.0，裝料系數(shù)為0.7；
步驟4：伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌發(fā)酵培養(yǎng)
將步驟3得到的培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為32℃，接種質(zhì)量百分比為2％，起始攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，當(dāng)溶解氧低于20％時(shí)增加攪拌轉(zhuǎn)數(shù)和通氣量，維持溶氧在20％以上，當(dāng)發(fā)酵液中菌體數(shù)量為5×108cfu/ml時(shí)發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵罐液體排出，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，消泡劑0.005％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0，裝料系數(shù)為0.7；
步驟5：將步驟4得到的發(fā)酵液進(jìn)行離心，將沉淀物；烘干，粉碎即得。
在本實(shí)施例中，步驟4的發(fā)酵培養(yǎng)經(jīng)過31h后，發(fā)酵液中菌體數(shù)量達(dá)到了5×108cfu/ml。
實(shí)施例2
與實(shí)施例1基本相同，其區(qū)別僅在于：
所述步驟4中所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，石菖蒲提取物0.8％，消泡劑0.005％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0。
在本實(shí)施例中，步驟4的發(fā)酵培養(yǎng)經(jīng)過28h后，發(fā)酵液中菌體數(shù)量達(dá)到了5×108cfu/ml?？梢?，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加石菖蒲提取物，會(huì)加快伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的發(fā)酵速度，在相同的發(fā)酵時(shí)間內(nèi)，伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的產(chǎn)率更高。
實(shí)施例3
與實(shí)施例1基本相同，其區(qū)別僅在于：
所述步驟4中所述發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分的質(zhì)量百分比為：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，石菖蒲提取物0.4％，桑葉提取物0.4％，消泡劑0.005％，其余為水，將ph值調(diào)整到7.0。
在本實(shí)施例中，步驟4的發(fā)酵培養(yǎng)經(jīng)過24h后，發(fā)酵液中菌體數(shù)量達(dá)到了5×108cfu/ml?？梢?，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加桑葉提取物，會(huì)進(jìn)一步加快伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的發(fā)酵速度，在相同的發(fā)酵時(shí)間內(nèi)，伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌的產(chǎn)率更高。
實(shí)施例4
一種微生物殺蟲劑，其組成為100wt％的實(shí)施例3制備的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌。
實(shí)施例5
一種微生物殺蟲劑，其由90wt％的實(shí)施例3制備的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌和10wt％的木犀草素混合均勻得到。
對(duì)比例
一種微生物殺蟲劑，其組成為100wt％的木犀草素。
測(cè)試?yán)?
對(duì)實(shí)施例4-5和對(duì)比例1的微生物殺蟲劑進(jìn)行防治柑橘上蚜蟲的藥效進(jìn)行測(cè)試。
試驗(yàn)地：上海某柑橘果園，正值6月中旬，柑橘蚜蟲爆發(fā)。
供試藥劑：將實(shí)施例4-5和對(duì)比例1所得微生物殺蟲劑分別與水混合均勻，制成微生物殺蟲劑噴霧劑，每升水中含有10g微生物殺蟲劑。
防治對(duì)象：柑橘蚜蟲。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置4組，分別為實(shí)施例4試驗(yàn)組、實(shí)施例5試驗(yàn)組、對(duì)比例1試驗(yàn)組和空白對(duì)照組，每組面積為約100m2的正方形，含9棵柑橘樹(3行×3列)，每組間留有保護(hù)行，保護(hù)行為3m。每個(gè)試驗(yàn)組分別使用微生物殺蟲劑噴霧10kg，均勻噴霧，空白對(duì)照組噴灑10kg的水。分別于施藥后第1、3、7、14天調(diào)查殘蟲量，采用下列公式計(jì)算防治效果：
蟲口減退率(％)＝(藥前蟲口數(shù)-藥后蟲口數(shù))/藥前蟲口數(shù)×100％
具體結(jié)果見表1。
表1：柑橘蚜蟲防治結(jié)果表
測(cè)試?yán)?中，空白對(duì)照組的蟲口減退率為負(fù)數(shù)，代表蟲口數(shù)在增加，沒有減退。實(shí)施例4-5使用本發(fā)明的微生物殺蟲劑，有效的降低了蟲口數(shù)，在施藥后第3天開始，藥效就已十分顯著，實(shí)施例5的微生物殺蟲劑由90wt％的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌和10wt％的木犀草素組成，其比實(shí)施例4單純的是用伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌殺蟲效果更好，而且在施藥后第14天，仍然有顯著的效果，實(shí)施例4單純的使用伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌，在施藥后第14天殺蟲效果有所下降，可能與部分蚜蟲產(chǎn)生了耐藥性有關(guān)。
實(shí)施例6
一種微生物殺蟲劑，其由90重量份的實(shí)施例3制備的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌、10重量份的木犀草素、1重量份佛手柑內(nèi)酯和4重量份紫蘇醛混合均勻得到。
實(shí)施例7
一種微生物殺蟲劑，其由90重量份的實(shí)施例3制備的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌、10重量份的木犀草素、5重量份佛手柑內(nèi)酯混合均勻得到。
實(shí)施例8
一種微生物殺蟲劑，其由90重量份的實(shí)施例3制備的伯克氏霍爾德菌屬細(xì)菌、10重量份的木犀草素、5重量份紫蘇醛混合均勻得到。
測(cè)試?yán)?
對(duì)實(shí)施例5-8的微生物殺蟲劑進(jìn)行防治蔬菜上蚜蟲進(jìn)行穩(wěn)定性測(cè)試。
將實(shí)施例5-8的微生物殺蟲劑避光常溫密封貯存12個(gè)月后，測(cè)試對(duì)蚜蟲的防治效果。
試驗(yàn)地：東北某一蔬菜試驗(yàn)田，正值8月中旬，蔬菜蚜蟲爆發(fā)。
供試藥劑：將實(shí)施例5-8所得微生物殺蟲劑分別與水混合均勻，制成微生物殺蟲劑噴霧劑，每升水中含有10g微生物殺蟲劑。
防治對(duì)象：蔬菜蚜蟲。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)：設(shè)置5組，分別為實(shí)施例5-8的試驗(yàn)組和空白對(duì)照組，每組面積為約50m2的正方形，含蔬菜(10行×10列)。試驗(yàn)組分別使用實(shí)施例5-8的殺蟲劑6kg，均勻噴霧，空白對(duì)照組噴灑6kg的水。分別于施藥后第7、14天調(diào)查殘蟲量，采用下列公式計(jì)算防治效果：
蟲口減退率(％)＝(藥前蟲口數(shù)-藥后蟲口數(shù))/藥前蟲口數(shù)×100％
具體結(jié)果見表2。
表2：蔬菜蚜蟲防治結(jié)果表
測(cè)試?yán)?中，空白對(duì)照組的蟲口減退率為負(fù)數(shù)，代表蟲口數(shù)在增加，沒有減退。實(shí)施例5-8使用本發(fā)明的微生物殺蟲劑，有效的降低了蟲口數(shù)。與實(shí)施例5相比較，實(shí)施例6-8的微生物殺蟲劑添加了穩(wěn)定劑在貯存12個(gè)月后，依然保持了良好的殺蟲藥效。以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施進(jìn)行了說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，不能被認(rèn)為用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡依本發(fā)明申請(qǐng)范圍所作的均等變化與改進(jìn)，均應(yīng)歸屬于本發(fā)明的專利涵蓋范圍之內(nèi)。