本發(fā)明發(fā)現(xiàn)一類5，7-雙羥基-6，8-雙(1-甲基哌嗪)-4h-色烯-4-酮類新型化合物，該類化合物可抑制胃癌細(xì)胞的體外增殖。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)該類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：本發(fā)明通過對化合物庫的篩選，發(fā)現(xiàn)了一類5，7-雙羥基-6，8-雙(1-甲基哌嗪)-4h-色烯-4-酮類新型化合物，該類化合物可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的體外增殖。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明在體外細(xì)胞水平上尋找先導(dǎo)化合物，發(fā)現(xiàn)了一類5，7-雙羥基-6，8-雙(1-甲基哌嗪)-4h-色烯-4-酮類結(jié)構(gòu)新穎的化合物，并細(xì)胞學(xué)實驗證實了該類化合物可抑制腫瘤細(xì)胞的體外增殖。本發(fā)明可為抗腫瘤藥物的開發(fā)提供先導(dǎo)化合物。本發(fā)明的技術(shù)方案為：首先在細(xì)胞水平上進(jìn)行初篩、復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)一類體外可抑制腫瘤細(xì)胞的化合物；隨后，以mtt實驗和克隆形成實驗證實其抑制胃癌細(xì)胞增殖的作用。附圖說明圖1：1號樣品抑制兩種胃癌細(xì)胞體外生長的柱狀圖(n＝3)；圖2：1號樣品抑制兩種胃癌細(xì)胞的克隆形成實驗(代表圖)；圖3：1號樣品克隆形成實驗的統(tǒng)計圖(n＝3)。具體實施方式：以下結(jié)合附圖說明1.mtt實驗(1)取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的人胃癌細(xì)胞一瓶，消化后計數(shù)，取180μl細(xì)胞懸液接種于96孔板上，2-4×103個/孔，置恒溫co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。(2)第二天換入新鮮的培養(yǎng)液(含10％血清)，加入不同濃度的受試樣品，繼續(xù)培養(yǎng)72小時。(3)將mtt試劑加入96孔板中，20μl/孔，培養(yǎng)箱中反應(yīng)4小時。(4)吸去上清液，加入dmso，150μl/孔，平板搖床上振搖5分鐘。用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為570nm處測定每孔的吸光值，并計算細(xì)胞抑制。2.克隆形成實驗取對數(shù)生長期的胃癌細(xì)胞，消化后計數(shù)1000個，加入3.5cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，貼壁過夜；第二天換新鮮培養(yǎng)基2ml，加入不同濃度的受試藥物，放入恒溫co2培養(yǎng)箱連續(xù)培養(yǎng)7天。姬姆薩染色，解剖顯微鏡下計數(shù)含50個細(xì)胞以上的集落。實驗結(jié)果1.篩選得到的該類化合物結(jié)構(gòu)通式如下：化合物r1r2r31faa2fbb3fcc4fdd5fee6fff7fkk8fll9eaa10gaa11haa12iaa13ibb14jaa15kaa16laa其中，a：-h；b：-ch2-ch3；c：-o-ch3；d：-ch2oh；2.10μg/ml的樣品對胃癌細(xì)胞的抑制率(72h，％)如下：3.樣品對胃癌細(xì)胞的抑制及ic50值(72h)根據(jù)初篩結(jié)果，選擇效果最好的1號樣品進(jìn)行復(fù)篩，作出樣品抑制胃癌細(xì)胞生長的柱狀圖(圖1)。1號樣品對胃癌bgc-823和mgc-803細(xì)胞的ic50值分別為11.27±0.67μm和7.31±0.53μm。4.樣品抑制胃癌細(xì)胞的體外增殖研究1號樣品對bgc-823以及mgc-803兩種細(xì)胞體外增殖的抑制作用。分別設(shè)高(5μm)、中(3μm)、低(1μm)三組劑量，給予bgc-823以及mgc-803細(xì)胞，恒溫co2培養(yǎng)箱連續(xù)培養(yǎng)7天。實驗結(jié)束后以姬姆薩染色，解剖顯微鏡下觀察細(xì)胞集落的形成狀況。結(jié)果見圖2，統(tǒng)計結(jié)果見圖3。可見，1號樣品對兩種胃癌細(xì)胞的集落形成均具有明顯的抑制作用，并呈現(xiàn)顯著的劑量依賴性。當(dāng)前第1頁12