本發(fā)明屬于微生物檢測領(lǐng)域，特別是現(xiàn)場致病微生物的檢測，具體涉及一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒。本發(fā)明將磁珠法核酸提取技術(shù)和核酸檢測技術(shù)（如lamp濁度檢測技術(shù)）相結(jié)合，在封閉卡盒內(nèi)，實現(xiàn)了自動化核酸提取/純化、擴增、檢測過程。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法是將具有特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等加入培養(yǎng)基中，對檢測對象進行選擇、分離、鑒定。其操作過程繁瑣耗時，且有被感染的風(fēng)險；不同的細菌需要不同的培養(yǎng)基，大多非可培養(yǎng)狀態(tài)菌無法通過培養(yǎng)被檢測；不同菌體可能產(chǎn)生相同的特異性物質(zhì)，產(chǎn)生假陽性菌落。采用磁分離技術(shù)和lamp技術(shù)的核酸檢測方法，可以避免選擇性增菌培養(yǎng)，減少了檢測時間，且容易實現(xiàn)自動化。此外，lamp與傳統(tǒng)的核酸擴增方法相比具有如下優(yōu)點：操作簡單、高效快速，、高特異性、高靈敏度。當(dāng)然lamp缺點是容易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設(shè)計空間較受限、擴增長度＜500bp時不能進行長鏈擴增。

在疫區(qū)查找致病源需要將樣本進行遠程運輸隔離后在實驗室培養(yǎng)，這樣需要花費幾天的時間甚至更久，然而對于傳染性強的病毒，會在非常短的時間里讓大面積的人和動物感染，甚至死亡。為挽救生命，必須在現(xiàn)場幾個小時內(nèi)確定致病源。與此同時還要避免在取樣、操作過程中出現(xiàn)的交叉污染導(dǎo)致的檢測結(jié)果錯誤。傳統(tǒng)的核酸檢測需要使用多臺儀器，如核酸提取儀、核酸擴增儀、熒光檢測儀/凝膠電泳儀等檢測設(shè)備。工作人員操作過程繁瑣且容易感染，實驗過程是開放的容易產(chǎn)生交叉污染，出現(xiàn)假陽性等缺點。

在農(nóng)產(chǎn)品的前后期加工與流通中，容易造成食品的微生物污染。致微生物的檢測是食源性疾病預(yù)防和控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對維護消費者的健康具有重要意義。食品安全事件具有突發(fā)性和緊迫性，食品污染源檢測結(jié)果也需要有時效性，而現(xiàn)行使用的致病菌檢測方法或設(shè)備具有操作復(fù)雜、耗時長等局限性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新的旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒，將核酸檢測所需試劑封存在卡盒內(nèi)，在封閉卡盒內(nèi)自動完成復(fù)雜的核酸提取、擴增和檢測過程，不僅減少了繁瑣耗時的手動/半自動核酸檢測流程和工作人員的感染機會，而且能有效解決操作環(huán)境對試劑或樣品的污染和生化反應(yīng)對外界環(huán)境的氣溶膠污染等；內(nèi)置獨特的移液/分液器；集成陽性和陰性對照組，確保檢測的可靠性。

為了實現(xiàn)發(fā)明目的，一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒包括：移液器、垂直導(dǎo)桿、外殼、密封蓋、底座、至少2個密封圈、至少2個彈簧等組成，外殼上具有至少3個定位孔、至少1個加樣孔、至少1個外殼檢測孔、至少1個底座檢測孔。

所述移液器是可旋轉(zhuǎn)的，位于卡盒內(nèi)部，由注射推桿、彈簧1、定位孔2、空氣置換腔體、可旋轉(zhuǎn)移液臂、導(dǎo)氣管、移液吸頭、密封圈等組成。

所述定位孔2位于注射推桿上方，注射推桿和彈簧1位于空氣置換腔體內(nèi)，空氣置換腔體與可旋轉(zhuǎn)移液臂由導(dǎo)氣管密封連接，移液吸頭與可旋轉(zhuǎn)移液臂密封連接。通過外部動力和彈簧1，驅(qū)動注射推桿往復(fù)運動，實現(xiàn)精確定量、定速的吸液和分液功能。

所述底座包含多個試劑室和外螺紋特征，試劑室中至少1個檢測室，至少1個加熱/制冷室，1個樣本室，至少1個對照組。實驗過程中所有試劑以液態(tài)或固態(tài)方式存儲于試劑室中。檢測室可以采用對射式、散射式、反射式等方式的光電檢測。

所述底座的材料采用高透明、低試劑/樣本吸附率、壁厚薄、不與任何化學(xué)試劑反應(yīng)、具有生物兼容性的高分子聚合物。

所述旋轉(zhuǎn)移液臂下面有十字定位孔。通過外部動力可以實現(xiàn)移液吸頭精確旋轉(zhuǎn)至每個試劑室上方。

所述定位孔1和定位孔3位于垂直導(dǎo)桿上方，垂直導(dǎo)桿與可旋轉(zhuǎn)移液臂連接，彈簧2位于可旋轉(zhuǎn)移液臂外部。通過外部動力和彈簧2，作用于垂直導(dǎo)桿，帶動移液吸頭精確定位到試劑室底部。

所述檢測室與外殼檢測孔和底座檢測孔在統(tǒng)一中心軸上。

所述試劑室的中心與移液吸頭垂直，置于移液吸頭移動范圍內(nèi)。

所述底座與外殼通過螺紋旋轉(zhuǎn)密封連接。

所述密封蓋通過加樣孔與外殼密封連接。

所述密封連接方式有密封圈、螺紋方式等。

所述外部動力可以是電機、氣泵、液泵等各種提供扭矩、氣壓、液壓動力的部件。并且由微處理器控制，在卡盒內(nèi)部自動完成試驗流程。

所述卡盒，通過可用吸頭刺穿的鋁膜，預(yù)先將核酸檢測所需試劑封存。

本發(fā)明的一種旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒，將核酸檢測所需試劑封存在卡盒內(nèi)，在封閉卡盒內(nèi)自動完成復(fù)雜的核酸提取、擴增和檢測過程。具有以下優(yōu)點。

（1）全自動。卡盒通過外部動力部件實現(xiàn)核酸檢測全自動，包括核酸提取、擴增和檢測。手動把樣本加入卡盒，將卡盒放入儀器內(nèi)可全自動運行。

（2）封閉?？ê惺且粋€全封閉的體系，底座的試劑室事先封存，保證樣本不會混淆，不會對環(huán)境造成氣溶膠等污染，也減少工作人員的感染。

（3）快速?？ê锌删C合基于磁分離的核酸提取技術(shù)和基于lamp的濁度檢測技術(shù)的優(yōu)點，相比傳統(tǒng)檢測方法加快了檢測速度。

（4）可擴展。由于卡盒底座是可拆卸的，用戶可以實際需要設(shè)計不同的卡盒底座，也可以通過微處理器控制完成不同的試驗流程。

（5）可靠性?？ê袃?nèi)置陰性和陽性對照組，避免試劑失效出現(xiàn)假陰性和試劑污染導(dǎo)致假陽性。

附圖說明

圖1旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒正視圖。

圖2旋轉(zhuǎn)式核酸檢測卡盒裝配模型圖。

圖3卡盒底座俯視圖。

其中：注射推桿-101、彈簧1-102、垂直導(dǎo)桿-103、空氣置換腔體-104、可旋轉(zhuǎn)移液臂-105、移液吸頭-106、彈簧2-107、密封圈-108、試劑室-109、螺紋-110、底座-111、密封塞-112、定位孔1-113、定位孔2-114、定位孔3-115、加樣孔-116、外殼-117、外殼檢測孔-118、底座檢測孔-119。

具體實施方式

本發(fā)明涉及對樣本中微生物進行核酸檢測。微生物可以是細菌、病毒和真菌等。底座的試劑槽內(nèi)預(yù)裝了包括結(jié)合液、裂解液、清洗液、洗脫液、礦物油、lamp反應(yīng)液，在卡盒試劑室包含一個檢測室，該檢測室采用對射式光電檢測，用于目標dna或者rna的檢測。

首先將前處理好的樣本用手動移液器加注到卡盒試劑室里面的樣本室，然后將卡盒按照要求放置于一體化檢測儀里面。該檢測儀是配套卡盒的設(shè)備。在外部設(shè)備的驅(qū)動下反應(yīng)盒內(nèi)部移液組件開始按照預(yù)設(shè)程序?qū)颖疽后w進行處理，依次經(jīng)過結(jié)合液、裂解液、清洗液等過程，然后再將提取的核酸液移至檢測室，最后將礦物油加入檢測室。整個檢測過程在恒溫條件下進行，溫度大約在60℃-65℃由外圍設(shè)備提供。此時650nm波長的光線聚焦于檢測室內(nèi)的樣本液體內(nèi)，隨著lamp反應(yīng)的進行檢測室內(nèi)液體會變渾濁，對射面的光電探測器采集到的光電信號會發(fā)生變化。通過光電信號的變化來確定樣本中是否含有某種微生物。不同的lamp反應(yīng)液檢測不同的微生物。

以上描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行多種等同變換，這些等同變換均屬于本發(fā)明的保護范圍。