本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清的方法。
背景技術(shù)：
：人血清淀粉樣蛋白a（saa）是一種急性相蛋白并與血漿高密度脂蛋白(hdl)結(jié)合?？寡鍨楹心骋活惥哂刑禺惷庖吖δ艿目贵w分子的血清，一般為動(dòng)物被人工注射某類抗原后制備的動(dòng)物血清。一種抗原能否引起抗體生成反應(yīng)，一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇（antigenicdeterminant），另一方面取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，當(dāng)具備以上兩個(gè)條件后，抗體生成將遵循抗體生成的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng)?？乖姆N類繁多，包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細(xì)胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫動(dòng)物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫動(dòng)物需加用佐劑，尤其在使用可溶性抗原時(shí)，以期得到高效價(jià)的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物質(zhì)需先通過人工的方法與蛋白質(zhì)載體連接后再與佐劑混合免疫動(dòng)物，方可獲得理想的免疫效果。使用佐劑后可增加抗原的免疫原性和延長(zhǎng)抗原在機(jī)體內(nèi)存留的時(shí)間，從而改變了抗原原有的免疫原性。動(dòng)物免疫系統(tǒng)是動(dòng)物在種系發(fā)生和個(gè)體發(fā)育過程中逐漸進(jìn)化和完善起來的，是機(jī)體執(zhí)行免疫功能的組織機(jī)構(gòu)，是產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)基礎(chǔ)。動(dòng)物免疫系統(tǒng)是由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子組成的。目前，將人血清淀粉樣蛋白a（saa）抗原與佐劑乳化后，按一定的程序免疫動(dòng)物，可在動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗人的saa抗體。雖然目前的生產(chǎn)方法都可以產(chǎn)生一定量的抗體，但是抗體產(chǎn)生速度慢，水平較低，且抗原用量高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種能提高抗體效價(jià)、降低抗原用量的生產(chǎn)羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清的方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。一種生產(chǎn)羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清的方法，該方法包括以下步驟：（1）抗原準(zhǔn)備：選用人血清淀粉樣蛋白a（saa）抗原，注射前以弗氏佐劑進(jìn)行乳化得抗原乳劑；（2）第一次注射：使用上述抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射；在動(dòng)物體上選取22個(gè)部位點(diǎn)進(jìn)行注射；（3）第二次注射：第一次注射后14天進(jìn)行第二次注射；（4）第三次注射：第二次注射后12天進(jìn)行第三次注射；（5）第四次注射：第三次注射后10天進(jìn)行第四次注射；（6）第五次注射：第四次注射后8天進(jìn)行第五次注射；（7）第六次注射：第五次注射后8天進(jìn)行第六次注射；（8）第七次注射：第六次注射后8天進(jìn)行第七次注射；（9）第八次注射：第七次注射后8天進(jìn)行第八次注射；（9）血清效價(jià)檢測(cè)：最后一次注射后8-10天采血，分離血清，檢測(cè)其雙擴(kuò)效價(jià)；第二次至第八次的免疫注射部位均在動(dòng)物體上選取8-16個(gè)部位點(diǎn)進(jìn)行注射。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，第一次注射前乳化用的弗氏佐劑為完全弗氏佐劑，第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射前乳化用的弗氏佐劑為不完全弗氏佐劑。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述22個(gè)部位點(diǎn)分別為：后足窩各1點(diǎn)、頜下淋巴結(jié)左右各1點(diǎn)、腋窩周圍左右各2點(diǎn)、股淋巴結(jié)周圍各3點(diǎn)、背部脊柱左右兩側(cè)各4點(diǎn)。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，第二次至第八次的免疫注射部位分別為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，第一次注射的劑量為每只羊0.55mg，每一針劑量平均分配。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，第二次免疫劑量是第一次的2倍。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射的劑量均為第二次的2倍量，每一針劑量平均分配。有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明生產(chǎn)羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清的方法，成本低，過程簡(jiǎn)單，不僅能穩(wěn)定生產(chǎn)抗體，并且產(chǎn)生抗體速度快，抗體水平高，抗原用量??；還能縮短免疫周期，節(jié)約生產(chǎn)成本。能克服各羊只之間的個(gè)體差異，抗體效價(jià)整齊劃一，能為ivd行業(yè)提供穩(wěn)定的的原料：使生物科技在動(dòng)物抗體制備方面規(guī)模化生產(chǎn)成為可能。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施例1：一種生產(chǎn)羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清的方法，該方法包括以下步驟：（1）抗原準(zhǔn)備：選用人血清淀粉樣蛋白a抗原，注射前以弗氏佐劑進(jìn)行乳化得抗原乳劑；以下第一次注射前乳化用的弗氏佐劑為完全弗氏佐劑，第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射前乳化用的弗氏佐劑為不完全弗氏佐劑；（2）第一次注射：使用使用步驟（1）方法制備的人血清淀粉樣蛋白a（saa）抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射；注射部位為后足窩各1點(diǎn)、頜下淋巴結(jié)左右各1點(diǎn)、腋窩周圍左右各2點(diǎn)、股淋巴結(jié)周圍各3點(diǎn)、背部脊柱左右兩側(cè)各4點(diǎn)，共22個(gè)點(diǎn)；第一次注射的劑量為每只羊0.55mg抗原，每一針劑量平均分配。（3）第二次注射：第一次注射后14天進(jìn)行第二次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)，劑量為每只羊1.1mg抗原，每一針劑量平均分配。（4）第三次注射：第二次注射后12天進(jìn)行第三次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（5）第四次注射：第三次注射后10天進(jìn)行第四次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（6）第五次注射：第四次注射后8天進(jìn)行第五次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（7）第六次注射：第五次注射后8天進(jìn)行第六次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（8）第七次注射：第六次注射后8天進(jìn)行第七次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（9）第八次注射：第七次注射后8天進(jìn)行第八次注射；使用步驟（1）方法制備的抗原乳劑對(duì)羊進(jìn)行注射，注射部位為：腹股溝、腋部、頸部、背部皮下多點(diǎn)注射，每個(gè)部位1-2點(diǎn)，共計(jì)8-16點(diǎn)。劑量為每只羊2.2mg抗原，每一針劑量平均分配。（10）血清效價(jià)檢測(cè)：最后一次注射后8-10天采血，分離血清，檢測(cè)其雙擴(kuò)效價(jià)；下面通過表1來進(jìn)一步闡述的有益效果。表1:采用本發(fā)明制備出羊抗人血清淀粉樣蛋白a抗血清產(chǎn)品效價(jià)表免疫方法產(chǎn)品統(tǒng)計(jì)時(shí)間段批次/數(shù)量產(chǎn)品效價(jià)（雙擴(kuò)）傳統(tǒng)方法saa2013年11月至2014年12月2/101:8本發(fā)明實(shí)施例1saa2014年12月至2016年2月3/151:16由表1可知，采用本發(fā)明可以使saa免疫效價(jià)提高2倍以上。本發(fā)明按照上述實(shí)施例進(jìn)行了說明，應(yīng)當(dāng)理解，上述實(shí)施例不以任何形式限定本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12