專利名稱：快速定量檢測血清淀粉樣蛋白a試劑盒及其制備和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于臨床免疫學檢測領域，特別涉及一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒及其制備和應用。
背景技術：
血清淀粉樣蛋白A (serum amyloidA，SAA)是由同一簇基因編碼的一組多形性蛋白，它是淀粉樣變組織中沉積的淀粉樣蛋白A的前體，屬于急性時相反應蛋白(UhlarCM, WhiteheadAS. Serum amyloid A,the major vertebrate acute-phase reactant[J].Eur J Biochem，1999，265 (2) : 501-523)。SAA在炎癥或感染急性期(48 72h)可迅速升高，并在疾病的恢復期迅速下降(Urieli SSj Linke RPiMatzner Y. Expression and functionof serum amyloid A, a majoracute-phase protein,in normal and disease states[J].Hematology，2000，7 (I) :64 - 69)，例如在病毒感染(R. Shainkin-Kestenbaum，S.Zimlichmanj Y. Winkoff, M. Prasj C. Chaimovitz&1. Sarov, Serum amyloid A(SAA) inPatients with Infections Due to Cytomegalovirus, Varicella-Zoster Virus, andHerpes Simplex Virus[J].1nfectious Diseases，1982，146(3):443)、心血管疾病(Laiinergard A, Larsson A，Friman G，et al. Human serum amyloid A (SAA) and highsensitive C-reactive protein (hsCRP)in preterm newborn infants with nosocomialinfections[J] · Acta Paediatr，2008，97(8):1061-1065)、腫瘤(Malle Ej Sodin-SemrlSjKovacevic A. Serum amyloid A:An acute—phaseprotein involved in tumourpathogenesis [J] · Cell Mol Life Sci，2009，66 (I) : 9 - 26)等疾病。研究發(fā)現，SAA 與 C-反應蛋白相比，其靈敏度、特異度更高(陸召輝，戴路明，血清淀粉樣蛋白A在呼吸系統疾病中的研究進展[J].國家呼吸雜志，2009，29(1) :47-50)，尤其是在早期病毒感染時，SAA變化較CRP更敏感，有助于對細菌感染與病毒感染的鑒別診斷(盧慶文，三種急性時相反應蛋白測定在急性呼吸道感染鑒別中的應用價值，[J].中國誤診學雜志，2006，6(19):3725-3726 ；H. Miwataj T. Yamadaj M. Okadaj T. Kudoj H. Kimuraj T. Morishimaj Serum AmyloidA Proteinin Acute Viral Infections[J]. Archives of Disease in Childhood，1993，68:210-214);且在移植排斥反應(JG. Raynes，EH. Cooper，Comparison of Serum Amyloid A Protein andC-reactiveProtein Concentrations in Cancer and Non-malignant Disease[J]. Clin.Pathol.，1983，36:798-803)等疾病中均有體現，為臨床診斷提供更好的參考價值。目前，國內外已有多種方法用于檢測血清中的SAA，如酶聯免疫吸附試驗(EnzymeLinkedImmunosorbent Assay，ELISA)、放射性免疫測定法(Radioimmunoassay，RIA)、乳膠增強的速率散射比池法、微球酶免疫法(Microspheres Enzyme Immunoassay，MEIA)等。然而，目前國內經國家食品藥品監(jiān)督管理局(State Food and DrugAdiministration, SFDA)批準用于臨床標本SAA檢測的試劑只有釆用乳膠增強速率散射比濁法在配套的蛋白分析儀上(國食藥監(jiān)械(進)字2012第2403367號)使用。由于其檢測成本相對較高、需特殊儀器等原因，SAA檢測尚未在臨床中廣泛應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒及其制備和應用，該試劑盒可以在人體發(fā)生疾病時醫(yī)生當場可獲知SAA測定結果，能快速判斷病人病情，從而更有針對性的對病人進行有效處理，縮短治愈時間，降低醫(yī)療費用，具有良好的應用前景。本發(fā)明的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，所述試劑盒包括凍干抗SAA免疫膠體金、反應板、樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液。所述凍干抗SAA免疫膠體金由SAA單抗包被于膠體金制成。所述反應板為膠體金定量檢測板，反應板上的硝基纖維膜由針對另一反應決定簇的另一純化SAA單抗或多抗包被。樣品稀釋液:
權利要求
1.一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括凍干抗SAA免疫膠體金、反應板、樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液。
2.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述凍干抗SAA免疫膠體金由SAA單抗包被于膠體金制成。
3.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述反應板為膠體金定量檢測板，反應板上的硝基纖維膜由針對另一反應決定簇的另一純化SAA單抗或多抗包被。
4.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述樣品稀釋液的組成為:1000ml純化水中含有0.5 2g甘氨酸、4.0 6.0ml的Imol/LNaOH溶液和 0.5g NaN3, pH7.0 9.0。
5.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述凍干膠體金復溶液的組成為:1000ml超純水中含有5-10g NaCl和0.5g NaN3。
6.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述洗滌液的組成為:1000ml純化水中含有2.0-4.0g十二水磷酸氫二鈉、0.1-0.5g二水磷酸二氫鈉、5 IOg NaCl 和 0.5g NaN3, pH7.0 9.0。
7.根據權利要求1所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，其特征在于:所述封閉液的組成為:1000ml純化水中含有2.0-4.0g十二水磷酸氫二鈉、0.1-0.5g二水磷酸二氫鈉、5 IOgNaCl 和1.5gNaN3, pH7.0 9.0。
8.—種如權利要求Γ7中任一所述的快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒的制備方法，包括: (1)首先制備膠體金 和抗SAA免疫膠體金綴合物；2500ml膠體金在包被離心洗滌后，力口入磷酸鹽緩沖液得到1500ml抗SAA免疫膠體金應用液；冷凍干燥、抽真空，即得凍干抗SAA免疫膠體金； (2)分別按比例配制樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液，制備反應板，組裝成品即得試劑盒。
9.根據權利要求8所述的一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒的制備方法，其特征在于:所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.005-0.02mol/L, pH值為7.0 8.0。
10.一種如權利要求1所述的快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒的應用，其特征在于:具體使用步驟如下: (1)從冷藏處取出抗SAA金標液凍干品，室溫平衡，在抗SAA金標液凍干品中，加入標貼或說明書中規(guī)定體積的凍干品復溶液搖勻； (2)待測樣品加入樣品稀釋液進行40-480倍稀釋，充分混勻； (3)將反應板平放于實驗臺上，于反應孔內滴加封閉液，待完全滲入； (4)吸取稀釋樣品到反應板上，待完全滲入后，將步驟(I)得到的金標液加入到反應板孔中； (5)待完全滲入后，加入洗滌液； (6)待洗滌液完全滲入后，于5分鐘內在Qpad金標定量儀SAA項目下測度SAA值； (7 ) Upper Qpad金標法定量讀數儀按儀器說明書操作。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種免疫膠體金法快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒及其制備和應用，試劑盒包括凍干抗SAA免疫膠體金、反應板、樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液。制備方法包括(1)首先制備膠體金和抗SAA免疫膠體金綴合物；制備凍干抗SAA免疫膠體金；(2)分別按比例配制樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液，制備反應板，組裝成品即得試劑盒。本發(fā)明可以在人體發(fā)生疾病時醫(yī)生當場可獲知SAA測定結果，能快速判斷病人病情，從而更有針對性的對病人進行有效處理，縮短治愈時間，降低醫(yī)療費用，具有良好的應用前景。
文檔編號G01N33/68GK103076455SQ20121057560
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權日2012年12月26日
發(fā)明者楊晶, 沈旭輝, 翟小杰 申請人:上海奧普生物醫(yī)藥有限公司