本發(fā)明屬于分子生物學(xué)dna標(biāo)記技術(shù)與應(yīng)用領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種基于srap標(biāo)記的草果種質(zhì)資源遺傳多樣性分析方法。

背景技術(shù)：

草果(amomumtsaokocrevostetlemaire)是姜科豆蔻屬植物中一種多年生草本植物，不僅是我國(guó)食品加工業(yè)和輕工業(yè)的重要原料，而且是一種傳統(tǒng)的中藥材，有燥濕、健胃、祛痰、溫中、順氣、抗瘧等功能，還是大眾的調(diào)料食品，國(guó)際、國(guó)內(nèi)市場(chǎng)需求量大。草果對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境條件要求較高，一般生長(zhǎng)在海拔800～1500m的北熱帶和中、南亞熱帶中低山區(qū)，年降雨量在1200～1600mm，年平均氣溫在16～22℃，冬季多霧、濕度大、透光度在40％～50％的陰濕山坡溝谷森林環(huán)境下，主要分布在我國(guó)云南、廣西和貴州三省局部地區(qū)，其中云南是草果主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)量約占全國(guó)的95％，主要分布在紅河、文山、西雙版納、德宏、保山、思茅、臨滄7個(gè)地(州)的31個(gè)縣(市)。

分子標(biāo)記是一種以dna序列差異性為標(biāo)記的檢測(cè)遺傳多樣性的方法，具有不受外界環(huán)境及基因表達(dá)與否的影響，不影響實(shí)驗(yàn)材料的性狀、可標(biāo)記數(shù)量大及分辨率高等特點(diǎn)，目前被廣泛應(yīng)用于生物遺傳研究。srap(相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性，sequence—relatedamplifiedpolymorphism)是一種新型的基于pcr的標(biāo)記系統(tǒng)，由美國(guó)加州大學(xué)蔬菜系li與quiros博士(li,g.,quiros,c.f.,2001.sequence-relatedamplifiedpolymorphism(srap),anewmarkersystembasedonasimplepcrreaction:itsapplicationtomappingandgenetagginginbrassica.theor.appl.genet.103,455–461.)于2001年在蕓薹屬作物中開(kāi)發(fā)出來(lái)。該標(biāo)記通過(guò)獨(dú)特的雙引物設(shè)計(jì)對(duì)基因的orfs(開(kāi)放式閱讀框)的特定區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，因不同個(gè)體以及物種的內(nèi)含子、啟動(dòng)子與間隔區(qū)長(zhǎng)度不同而產(chǎn)生多態(tài)性。該標(biāo)記具有簡(jiǎn)便、高效、產(chǎn)率高、重復(fù)性好、易測(cè)序、便于克隆目標(biāo)片段的特點(diǎn)。目前已成功地應(yīng)用于作物遺傳多樣性分析、遺傳圖譜的構(gòu)建、重要性狀的標(biāo)記以及相關(guān)基因的克隆等。但在草果中，應(yīng)用srap分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行種質(zhì)資源鑒定、遺傳多樣性分析的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明針對(duì)目前對(duì)草果的鑒定仍采用傳統(tǒng)的形態(tài)鑒定法、主要依據(jù)果實(shí)的形狀、大小、色澤等進(jìn)行劃分，形態(tài)性狀易受環(huán)境條件影響，實(shí)驗(yàn)誤差較大，限制了人們對(duì)草果資源的鑒定和遺傳多樣性分析的問(wèn)題，提供了一種相對(duì)科學(xué)合理有效的基于srap標(biāo)記的草果種質(zhì)資源遺傳多樣性分析方法，可以為后續(xù)的科學(xué)研究提供很好的技術(shù)指導(dǎo)和理論支持。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種用于草果遺傳多樣性分析的srap分子標(biāo)記引物體系，包括12對(duì)引物，分別是：

me1-em11：其核苷酸序列如seqidno.1和seqidno.20所示；

me1-em12：其核苷酸序列如seqidno.1和seqidno.21所示；

me1-em15：其核苷酸序列如seqidno.1和seqidno.24所示；

me2-em11：其核苷酸序列如seqidno.2和seqidno.20所示；

me2-em12：其核苷酸序列如seqidno.2和seqidno.21所示；

me5-em5：其核苷酸序列如seqidno.5和seqidno.14所示；

me5-em6：其核苷酸序列如seqidno.5和seqidno.15所示；

me6-em2：其核苷酸序列如seqidno.6和seqidno.11所示；

me6-em5：其核苷酸序列如seqidno.6和seqidno.14所示；

me6-em14：其核苷酸序列如seqidno.6和seqidno.23所示；

me9-em6：其核苷酸序列如seqidno.9和seqidno.15所示；

me9-em11：其核苷酸序列如seqidno.9和seqidno.20所示。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種用于草果遺傳多樣性分析的srap-pcr反應(yīng)體系，每25μl的反應(yīng)體系中含有不含mg²⁺的10×pcrbuffer3.0μl、taq酶1u、mg²⁺1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.2μmol/l和模板dna30ng；將上述反應(yīng)混合液按如下程序進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性5min，95℃變性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。

進(jìn)一步地，引物選自上述me1-em11、me1-em12、me1-em15、me2-em11、me2-em12、me5-em5、me5-em6、me6-em2、me6-em5、me6-em14、me9-em6或me9-em11中任一對(duì)。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種利用srap分子標(biāo)記分析草果遺傳多樣性的方法，其步驟包括：

(1)采用2*ctab法提取草果基因組dna以備用；

(2)采用srap-pcr反應(yīng)體系對(duì)步驟(1)中提取的dna樣品進(jìn)行擴(kuò)增；

(3)將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物在6％非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳分離，電泳結(jié)束后銀染檢測(cè)條帶；

(4)草果遺傳多樣性分析：利用12對(duì)srap分子標(biāo)記將不同來(lái)源的草果進(jìn)行聚類及主坐標(biāo)分析，并進(jìn)行各遺傳多樣性參數(shù)的統(tǒng)計(jì)。

進(jìn)一步地，步驟(1)中的dna的提取具體為：采用2*ctab法提取dna，并將提取的dna樣品溶于te緩沖液后存儲(chǔ)于-20℃?zhèn)溆?；擴(kuò)增前用雙蒸水將dna樣品稀釋成20ng/μl的工作液，作為pcr擴(kuò)增反應(yīng)的模板。

進(jìn)一步地，步驟(2)中的srap-pcr反應(yīng)體系具體為：每25μl的反應(yīng)體系中含有不含mg²⁺的10×pcrbuffer3.0μl、taq酶1u、mg²⁺1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.2μmol/l和模板dna30ng；將上述反應(yīng)混合液按如下程序進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性5min，95℃變性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。

進(jìn)一步地，步驟(3)中的將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物在6％非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳分離，電泳結(jié)束后銀染檢測(cè)條帶。具體為：電泳結(jié)束后，將膠體從玻璃板上取下，蒸餾水漂洗，轉(zhuǎn)入含有0.2％硝酸銀的染色液中，振蕩10min，蒸餾水漂洗1次約1min，轉(zhuǎn)入含2％氫氧化鈉和0.4％甲醛的顯色液中，輕輕振蕩待條帶顯色完全，將膠體轉(zhuǎn)入蒸餾水中。在凝膠成像系統(tǒng)下對(duì)膠體進(jìn)行拍照保存。

進(jìn)一步地，步驟(4)中的利用12對(duì)srap分子標(biāo)記將不同來(lái)源的草果進(jìn)行聚類及主坐標(biāo)分析，并進(jìn)行各遺傳多樣性參數(shù)的統(tǒng)計(jì)具體為：讀取步驟(3)獲得的譜帶信息，將電泳圖譜上100～2000bp范圍內(nèi)清晰且可重復(fù)出現(xiàn)的條帶記為1，同一位置沒(méi)有條帶記為0，由此生成0和1原始矩陣；統(tǒng)計(jì)每對(duì)引物擴(kuò)增出的總條帶數(shù)和多態(tài)性條帶數(shù)；用ntsys-pc(2.10e)軟件中simqual程序計(jì)算相似系數(shù)矩陣，以clustering程序中shan進(jìn)行upgma聚類；用treeplot模塊生成聚類圖，構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù)；根據(jù)計(jì)算的相似系數(shù)矩陣進(jìn)行decenter數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，進(jìn)而進(jìn)行主坐標(biāo)分析；

根據(jù)01二元數(shù)據(jù)矩陣，統(tǒng)計(jì)srap擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶總數(shù)和多態(tài)性條帶數(shù)(npb)，計(jì)算多態(tài)性條帶所占的比率(ppb)和引物多態(tài)性信息含量(pic)，pici＝2fi(1－fi)，公式中pici表示第i個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性信息含量，fi表示有帶所占的頻率，(1－fi)表示無(wú)帶所占的頻率；對(duì)每對(duì)引物來(lái)說(shuō)，pic＝∑pici/n，式中n表示每對(duì)引物的多態(tài)性條帶數(shù)；對(duì)每個(gè)引物組合而言，標(biāo)記指數(shù)(mi)可以按下述公式計(jì)算：mi＝npb*pic；采用popgene32軟件對(duì)所有試驗(yàn)材料進(jìn)行遺傳多樣性參數(shù)計(jì)算：等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、shannon's信息指數(shù)、基因多樣性指數(shù)和多態(tài)位點(diǎn)比率。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明可以獲得包括以下技術(shù)效果：

1)利用本發(fā)明所優(yōu)化的pcr反應(yīng)及反應(yīng)程序進(jìn)行srap分子標(biāo)記試驗(yàn)，所得到的條帶清晰、多態(tài)性好、重復(fù)性高，易于鑒別不同植株基因水平的差異，為草果基因水平研究奠定了良好的基礎(chǔ)。

2)采用6％的非變性聚丙烯酰胺凝膠對(duì)srap-pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離，分辨率較瓊脂糖凝膠更高；克服了傳統(tǒng)方法采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)pcr產(chǎn)物進(jìn)行分離，效果較差的問(wèn)題。

3)利用優(yōu)化的pcr反應(yīng)體系，篩選出的12對(duì)srap引物在草果中擴(kuò)增出的條帶更具有多態(tài)性高、特異性強(qiáng)、背景清楚及穩(wěn)定性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)；

4)本發(fā)明可加快草果資源的鑒定速度，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，結(jié)果穩(wěn)定可靠，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定方法的不足。

5)本發(fā)明成本低，在短時(shí)間內(nèi)可完成大批試驗(yàn)材料鑒定。

6)本發(fā)明采用的srap分子標(biāo)記是對(duì)基因組的重要組成部分orfs進(jìn)行擴(kuò)增，基因的多樣性更能反映遺傳資源的多樣性；srap在基因組中分布均勻，它提供的信息比其他分子標(biāo)記更為優(yōu)良，用于草果遺傳多樣性評(píng)價(jià)可信度高。

7)利用該技術(shù)能很好的揭示草果居群間的遺傳多樣性，分辨草果種質(zhì)資源間的親緣關(guān)系，對(duì)草果資源的保護(hù)及利用具有重要意義。

當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有技術(shù)效果。

附圖說(shuō)明

此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本發(fā)明的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1是本發(fā)明1-24號(hào)樣品me1em15引物組合擴(kuò)增效果圖；其中，m，700bpmarker，1-24號(hào)與表1的統(tǒng)一編號(hào)相對(duì)應(yīng)；

圖2是本發(fā)明25-48號(hào)樣品me1em15引物組合擴(kuò)增效果圖；其中，m，700bpmarker，25-48號(hào)與表1的統(tǒng)一編號(hào)相對(duì)應(yīng)；

圖3是本發(fā)明基于srap標(biāo)記的96份草果樣品聚類圖；

圖4是本發(fā)明基于srap標(biāo)記的96份草果樣品主坐標(biāo)分析。

具體實(shí)施方式

以下將配合實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，藉此對(duì)本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題并達(dá)成技術(shù)功效的實(shí)現(xiàn)過(guò)程能充分理解并據(jù)以實(shí)施。

實(shí)施例1基于srap標(biāo)記的草果種質(zhì)資源遺傳多樣性分析方法

(1)采用2*ctab法提取草果基因組dna以備用。

(2)草果srap-pcr反應(yīng)體系優(yōu)化，優(yōu)化的反應(yīng)體系其特征在于：25μl反應(yīng)體系包括：10×pcrbuffer(不含mg²⁺)3.0μl、taq酶1u、mg²⁺1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.2μmol/l和模板dna30ng。

(3)pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序的改良，改良后的程序：95℃預(yù)變性5min，95℃變性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。

(4)srap多態(tài)性引物篩選，從153對(duì)srap引物中篩選出12對(duì)帶型穩(wěn)定、清晰且重復(fù)性好的多態(tài)性引物不同居群的草果進(jìn)行pcr擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后加入2μl溴酚藍(lán)和二甲苯青ff配制的雙色指示劑，取2μl擴(kuò)增產(chǎn)物在6％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，電極緩沖液為0.5×tbe，染色后拍照。

(5)草果遺傳多樣性分析，利用12對(duì)srap分子標(biāo)記可成功的將不同來(lái)源的草果進(jìn)行聚類及主坐標(biāo)分析，并進(jìn)行各遺傳多樣性參數(shù)的統(tǒng)計(jì)。為草果種質(zhì)資源鑒定及遺傳多樣性分析建立新的方法。

實(shí)施例2dna的提取

(1)實(shí)驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的96份草果采自云南省8個(gè)草果產(chǎn)地，其中金平縣13份、元陽(yáng)縣12份、綠春縣11份、屏邊縣10份、普洱瀾滄縣14份、保山市11份、德宏梁河縣13份、臨滄云縣12份，具體見(jiàn)表1和表2。

表1試驗(yàn)材料編號(hào)(1-48)及采樣點(diǎn)

表2試驗(yàn)材料編號(hào)(49-96)及采樣點(diǎn)

(2)dna的提取

在種質(zhì)資源調(diào)查同時(shí)采集嫩葉用于全基因組dna提取。采用2*ctab法提取dna，并將提取的dna樣品溶于te緩沖液后存儲(chǔ)于-20℃?zhèn)溆?。擴(kuò)增前用雙蒸水將dna樣品稀釋成20ng/μl的工作液，作為pcr擴(kuò)增反應(yīng)的模板。

實(shí)施例3pcr反應(yīng)體系優(yōu)化及引物篩選

采用正交設(shè)計(jì)方法，對(duì)mg²⁺、dntps和引物濃度、taqdna聚合酶及模板dna用量等5個(gè)因素進(jìn)行篩選，得到適于草果的srap標(biāo)記pcr反應(yīng)體系。srap-pcr的正交設(shè)計(jì)如表3。經(jīng)me1em15、me4em8、me7em1、me8em14對(duì)引物3次重復(fù)試驗(yàn)后，25μl反應(yīng)體系中10×pcrbuffer(不含mg²⁺)3.0μl、taq酶1u、mg²⁺1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.2μmol/l和模板dna30ng綜合擴(kuò)增效果最好。

表3srap-pcr反應(yīng)l16(4⁵)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

上述反應(yīng)體系的pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)楦牧嫉某绦颍?5℃預(yù)變性5min，95℃變性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。

srap引物序列見(jiàn)表4。利用上述反應(yīng)體系和反應(yīng)程序共篩選出12對(duì)帶型穩(wěn)定、清晰且重復(fù)性好的多態(tài)性引物組合：me1em11、me1em12、me1em15、me2em11、me2em12、me5em5、me5em6、me6em2、me6em5、me6em14、me9em6、me9em11。圖1和圖2為me1em15對(duì)1-48號(hào)樣品擴(kuò)增效果圖，可以得出本發(fā)明所建立的草果srap-pcr反應(yīng)體系擴(kuò)增出的條帶具有多態(tài)性高、特異性強(qiáng)、背景清楚及穩(wěn)定性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。

表4srap引物序列

(3)電泳和銀染體系

pcr擴(kuò)增產(chǎn)物在6％非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳分離。電泳結(jié)束后銀染檢測(cè)條帶，具體操作如下：電泳結(jié)束后，將膠體從玻璃板上取下，蒸餾水漂洗，轉(zhuǎn)入含有0.2％(質(zhì)量百分濃度)硝酸銀的染色液中，振蕩10min，蒸餾水漂洗1次約1min，轉(zhuǎn)入含2％氫氧化鈉和0.4％甲醛(10gnaoh定容至500ml，使用前加入2ml甲醛)的顯色液中，輕輕振蕩待條帶顯色完全，將膠體轉(zhuǎn)入蒸餾水中。在凝膠成像系統(tǒng)下對(duì)膠體進(jìn)行拍照保存。

實(shí)施例4srap標(biāo)記在96份草果品種遺傳多樣性分析中的應(yīng)用

(1)聚類分析和主坐標(biāo)分析

將電泳圖譜上100～2000bp范圍內(nèi)清晰且可重復(fù)出現(xiàn)的條帶記為1，同一位置沒(méi)有條帶記為0，由此生成0和1原始矩陣。統(tǒng)計(jì)每對(duì)引物擴(kuò)增出的總條帶數(shù)和多態(tài)性條帶數(shù)。用ntsys-pc(2.10e)軟件中simqual程序計(jì)算相似系數(shù)矩陣，以clustering程序中shan進(jìn)行upgma(unweightedpair-groupmethodwitharithmeticmeans)聚類；用treeplot模塊生成聚類圖，構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù)。根據(jù)計(jì)算的相似系數(shù)矩陣進(jìn)行decenter數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，進(jìn)而進(jìn)行主坐標(biāo)分析。

基于srap標(biāo)記，利用ntsyspc2.10e軟件對(duì)8個(gè)居群的96份草果進(jìn)行聚類分析和主坐標(biāo)分析。聚類分析中除lc50、p1、p19、d16沒(méi)能被成功聚類外，其余樣本根據(jù)親緣關(guān)系遠(yuǎn)近均被分到不同類群中，在閾值0.82處可將樣本分為5類，來(lái)自金平的j108、j109、j118、j119和j128聚在一起，lc33、xy8和xy16聚在一類，綠春的l28、l34聚在一起，j8、j48、j55、j64、p48、lc2、j84、j91聚在一起，剩余的74份樣本聚在一起，其中p17、yx10、lc31具有高度的一致性(圖3)。

對(duì)96份草果樣本的srap標(biāo)記的原始矩陣進(jìn)行主坐標(biāo)分析，srap標(biāo)記提取的前2個(gè)主坐標(biāo)所能解釋的遺傳變異分別為11.11％和3.51％，二維排序圖能夠直觀的表示96份樣本之間的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近，主坐標(biāo)分析結(jié)果與聚類結(jié)果基本一致(圖4)。

(2)遺傳多樣性分析

根據(jù)01二元數(shù)據(jù)矩陣，統(tǒng)計(jì)srap擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶總數(shù)和多態(tài)性條帶數(shù)(npb)，計(jì)算多態(tài)性條帶所占的比率(ppb)和引物多態(tài)性信息含量(pic)，pici＝2fi(1－fi)，公式中pici表示第i個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性信息含量，fi表示有帶所占的頻率，(1－fi)表示無(wú)帶所占的頻率；對(duì)每對(duì)引物來(lái)說(shuō)，pic＝∑pici/n，式中n表示每對(duì)引物的多態(tài)性條帶數(shù)；對(duì)每個(gè)引物組合而言，標(biāo)記指數(shù)(mi)可以按下述公式計(jì)算：mi＝npb*pic。假定所研究的草果居群都處于hardy-weinberg平衡，釆用popgene32軟件對(duì)所有試驗(yàn)材料進(jìn)行遺傳多樣性參數(shù)計(jì)算：等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、shannon's信息指數(shù)、基因多樣性指數(shù)、多態(tài)位點(diǎn)比率等。12對(duì)srap引物共擴(kuò)增534個(gè)條帶，其中多態(tài)性條帶527條，占總條帶的98.69％，平均每對(duì)引物擴(kuò)增44.5條帶；不同引物所揭示的pic(多態(tài)性信息含量)在0.128～0.250之間，平均為0.161；mi(標(biāo)記指數(shù))最高的是引物me1em12，為8.794，表明該引物在12對(duì)引物中的擴(kuò)增效率最高；有效等位位點(diǎn)數(shù)ne、nei基因多樣度及shannon's信息指數(shù)i最高的引物為me5em5，分別為1.222、0.165和0.288，最低的為me6em14，分別為1.097、0.078和0.152(表5)。srap引物擴(kuò)增多態(tài)性表明云南草果遺傳多樣性水平較低。居群間比較分析表明遺傳多樣性最高的是綠春和金平居群，最低的是保山居群。在物種水平上，多態(tài)性位點(diǎn)百分率p、觀測(cè)等位基因數(shù)na、有效等位位點(diǎn)數(shù)ne、nei基因多樣度h和shannon's信息指數(shù)i分別為98.57％、1.9857、1.1261、0.0983、0.1852(表6)。表明草果無(wú)論在居群水平還是物種水平遺傳多樣性都較低，亟需我們加大保護(hù)力度。

表512對(duì)srap引物擴(kuò)增結(jié)果

注：tnp：擴(kuò)增總條帶數(shù)；npb：多態(tài)性條帶數(shù)；ppb：多態(tài)性比率；na：觀測(cè)等位基因數(shù)；ne：有效等位基因數(shù)；h：nei基因多樣度；i：shannon's信息指數(shù)；pic：多態(tài)性信息含量；mi：標(biāo)記指數(shù)。

表6草果居群srap遺傳多樣性分析

注：p：多態(tài)性位點(diǎn)百分率；na：觀測(cè)等位基因數(shù)。

上述說(shuō)明示出并描述了發(fā)明的若干優(yōu)選實(shí)施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。

序列表

<110>紅河學(xué)院

<120>一種基于srap標(biāo)記的草果種質(zhì)資源遺傳多樣性分析方法

<130>2017

<160>26

<170>patentinversion3.3

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