本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子nac062的活性形式nac062d蛋白及其編碼基因在抑制種子發(fā)芽中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

孟山都公司研究人員從矮牽牛中克隆獲得了抗性基因(epsps基因)，并應(yīng)用粒介導(dǎo)轉(zhuǎn)移脫氧核糖核酸(dna)技術(shù)，將矮牽牛質(zhì)粒(camv)中35s啟動(dòng)子控制的epsps基因?qū)舜蠖够蚪M中，進(jìn)而培育出抗草甘膦大豆品種。這種轉(zhuǎn)基因大豆于1994年被美國(guó)食品與藥品管理局(fda)批準(zhǔn)，較早成為商業(yè)化大規(guī)模推廣的生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因作物之一。由于rr豆具有耐除草劑草甘膦基因，這種大豆對(duì)非選擇性除草劑農(nóng)達(dá)(rwndup)有高度耐受性。在大田中施用草甘膦除草劑，不會(huì)影響大豆產(chǎn)量。此外，轉(zhuǎn)基因大豆還有其他類型，如高蛋氨酸大豆品種等，但轉(zhuǎn)基因大豆的毒性和安全隱患問(wèn)題一直備受爭(zhēng)議，如下：

1.說(shuō)轉(zhuǎn)基因不能留種，而只能買新鮮轉(zhuǎn)基因種，轉(zhuǎn)基因種子也只有研究轉(zhuǎn)基因的人專營(yíng)，這就不免讓人聯(lián)想到利益的趨勢(shì)，一旦利益驅(qū)使，就難免派生不良的理念；

2.例如黃豆需要轉(zhuǎn)化成豆芽的時(shí)候，轉(zhuǎn)基因就不能辦到，必須購(gòu)買能轉(zhuǎn)化成豆芽的非轉(zhuǎn)基因。

隨著環(huán)境污染日益加劇，溫室效應(yīng)加劇，地表氣溫上升，四季氣溫變化異常，霧霾天氣也不斷發(fā)生，嚴(yán)重影響了農(nóng)作物的生長(zhǎng)發(fā)育，繼而影響糧食產(chǎn)量。因此，在未來(lái)很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)，農(nóng)業(yè)研究可能將重點(diǎn)關(guān)注如何提高植物在各種惡性環(huán)境條件下的抗逆性。研究表明，擬南芥膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育、逆境脅迫應(yīng)答等中起著重要的作用。nac膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子是擬南芥重要的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有多種生物功能的植物特異轉(zhuǎn)錄因子。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開(kāi)了一種膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子nac062的活性形式nac062d蛋白及其編碼基因在抑制種子發(fā)芽中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的及解決的主要技術(shù)問(wèn)題是采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種nac062d轉(zhuǎn)錄因子蛋白，其特征在于，nac062全長(zhǎng)蛋白是一個(gè)具有跨膜域(tm)的膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，而nac062d是其去掉跨膜域后的截短形式，其氨基酸序列為序列表中的序列1，其核苷酸序列為序列表中的序列2，是膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子nac062的活性形式。

本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)基因植物培育方法，為將nac062d蛋白的編碼基因?qū)肽康闹参镏?，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植株特征：1)正常情況下與非轉(zhuǎn)基因沒(méi)有區(qū)別；2)加入10um誘導(dǎo)劑beta-estrodial(beta-e)后，轉(zhuǎn)基因植物的發(fā)芽率遠(yuǎn)低于非轉(zhuǎn)基因。

在上述方法中，所述目的植物為雙子葉植物和單子葉植物。

在上述方法中，所述雙子葉植物為擬南芥，油菜、花生、棉花、大豆、向日葵、棕櫚樹(shù)、橄欖樹(shù)、蓖麻、馬鈴薯或煙草；所述單子葉植物為水稻、玉米、小麥、大麥、燕麥、黑麥、高粱或草坪草。

所述目的植物為擬南芥或油菜。

所述方法，nac062d蛋白的編碼基因通過(guò)重組載體導(dǎo)入目的植物，所述重組載體為1)或2)：

1)轉(zhuǎn)錄激活活性鑒定：將所述nac062d蛋白的編碼基因插入pgbk-t7中得到的載體；

2)轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建：將所述nac062d蛋白的編碼基因插入per10得到的載體。

上述的nac062d轉(zhuǎn)錄因子蛋白的編碼基因在抑制種子發(fā)芽中的應(yīng)用，轉(zhuǎn)基因能夠抑制種子發(fā)芽，所述轉(zhuǎn)基因植物抑制種子發(fā)芽體現(xiàn)在所述轉(zhuǎn)基因植株的發(fā)芽率均低于所述目的植物。

所述nac062d是nac062去掉跨膜域后的截短形式，通過(guò)構(gòu)建到pgbk-t7載體中轉(zhuǎn)入到酵母中，實(shí)驗(yàn)證明該形式是具有轉(zhuǎn)錄激活活性。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種重組載體。

本發(fā)明提供了一種重組載體為如下1)或2)

1)轉(zhuǎn)錄激活活性鑒定：將所述nac062d蛋白的編碼基因插入pgbk-t7的bamhi和ecori中得到的載體；

2)轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建：將所述nac062d蛋白的編碼基因插入per10的asci和spei位點(diǎn)間得到的載體。

本發(fā)明將一個(gè)調(diào)控植物種子發(fā)芽的轉(zhuǎn)錄因子nac062d及其編碼基因?qū)霐M南芥哥倫比亞生態(tài)型(columbia)中，得到轉(zhuǎn)基因植物，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子可以用于調(diào)控種子發(fā)芽。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)：

1、本發(fā)明采用了誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，不加誘導(dǎo)劑的時(shí)候，植物生長(zhǎng)和非轉(zhuǎn)基因一致，可以繁殖下一代；

2、如果想要吃種子，例如黃豆，就添加誘導(dǎo)劑，讓基因表達(dá)抑制種子發(fā)芽，就能得到種子。

附圖說(shuō)明

圖1是nac062和nac062d的基因結(jié)構(gòu)框架圖。其中黑色方框表示外顯子，灰色方框表示5’和3’非編碼區(qū)，直線表示內(nèi)含子。atg和tga分別表示基因的起始密碼子和終止密碼子。

圖2是nac062和nac062d蛋白結(jié)構(gòu)示意圖?！皀ac”代表nac結(jié)構(gòu)域，nac062全長(zhǎng)在n端具有nac結(jié)構(gòu)域，c端具有跨膜域。nac062d在n端也具有nac結(jié)構(gòu)域，但是去掉了c端跨膜域。

圖3是nac062d轉(zhuǎn)錄激活活性分析。

圖4是per10-nac062d轉(zhuǎn)基因植株表達(dá)量鑒定；per10是只含有空載體的轉(zhuǎn)基因材料，作為對(duì)照；nac062#14，nac062#16號(hào)分別代表per10-nac062d的t2代轉(zhuǎn)基因材料14號(hào)、16號(hào)。

圖5其中：圖5a.植物編號(hào)圖，per10-nac062d轉(zhuǎn)基因植株表達(dá)量鑒定；wt是野生型，作為對(duì)照；per10-nac062d#6/14/8/25/16號(hào)，是轉(zhuǎn)基因t2代材料；

圖5b.不加beta-e植物全部發(fā)芽，轉(zhuǎn)基因和對(duì)照野生型一致；

圖5c.加beta-e后6天對(duì)照生長(zhǎng)不受影響，而per10-nac062d種子不發(fā)芽；

圖5d.加beta-e后12天后，wt生長(zhǎng)一致，但是per10-nac062d種子仍然不發(fā)芽。

圖6是統(tǒng)計(jì)分析種子發(fā)芽率，nac062d轉(zhuǎn)基因抑制種子發(fā)芽差異極顯著。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖、序列表及較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的nac062d轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其編碼基因在抑制種子發(fā)芽中的應(yīng)用具體實(shí)施方式、特征及其功效，詳細(xì)說(shuō)明如下。

實(shí)施中所使用的試驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；使用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可以從商業(yè)途徑獲得。

一、轉(zhuǎn)nac062d酵母菌株的獲得：

(1)調(diào)控基因的克?。?/p>

轉(zhuǎn)錄激活活性的設(shè)計(jì)引物序列如下：

p1上游:ccgaattcatgaatcagaatcttcatgt

p2下游：agagatcttgctacaacatcaaaaccac

用植物中rna提取試劑盒(天根)，并參照說(shuō)明書提取野生型擬南芥(columbia生態(tài)型，購(gòu)自美國(guó)擬南芥生物資源中心，abrc)10天幼苗的總rna,然后用invitrogen反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cdna,在引物p1,p2的引導(dǎo)下pcr擴(kuò)增；凝膠電泳，回收片段約987bp。

(2)含nac062d的酵母轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建：

用限制性內(nèi)切酶ecori和bamhi雙酶切載體pgbk-t7(購(gòu)于clonetech公司)和實(shí)驗(yàn)1獲得的基因nac062d，對(duì)雙酶切產(chǎn)物進(jìn)行1％跑膠電泳檢測(cè)，并純化連接，得到連接產(chǎn)物。將連接載體用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌(e.coli)dh5α感受態(tài)細(xì)胞，克隆pcr鑒定，篩選陽(yáng)性克隆，將其接種于50mg/l卡那霉素抗性lb液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)16小時(shí)，提質(zhì)粒，標(biāo)記為pgbk-nac062d，對(duì)其進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明pcr產(chǎn)物的基因具有序列表中序列2的核苷酸序列，由987個(gè)堿基構(gòu)成，其編碼序列為自5’端的1-987位堿基，其編碼具有序列表中序列1的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。其中序列表中序列2自5’端第37-492位堿基編碼nac結(jié)構(gòu)域和蛋白-蛋白相互作用結(jié)構(gòu)域。

(3)轉(zhuǎn)nac062d酵母的獲得

挑取一些平板上生長(zhǎng)的新鮮酵母菌落，接種到5ml的ypad液體培養(yǎng)基中，30℃過(guò)夜培養(yǎng)；第二天將過(guò)夜培養(yǎng)的菌液取3ml接種到含50mlypad的三角瓶中，30℃培養(yǎng)3～4小時(shí)，直至od600到0.6為最佳；700g室溫離心5min，收集菌液，用無(wú)菌水重懸菌液，700g室溫離心5min，去掉上清，加入1.5ml1.1×te/liac(10ml＝1.1ml10×te+1.1ml10×liac+7.8mlh2o)重懸，轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，12000g室溫離心30s，去上清，加入600μl1.1×te/liac重懸，每50μl分裝到離心管中，酵母感受態(tài)制備完成接下來(lái)進(jìn)行酵母轉(zhuǎn)化。首先取適量的鮭魚精95℃加熱5min后，迅速插入冰上，使鮭魚精dna變成單鏈，幫助質(zhì)粒dna進(jìn)入酵母體內(nèi)。依次將500μlpeg/liac(10mlpeg/liac＝8ml50％peg3350+1ml10×te+1ml10×liac)，1～5μg質(zhì)粒和已變性的鮭魚精5μl(10mg/ml)加入到已制備好的100μl酵母感受態(tài)細(xì)胞中，混勻，放入30℃恒溫箱中孵育30min，每10min混勻一次；再放入42℃水浴鍋中熱擊15～20min，每5min混勻一次；12000g室溫離心15s，去掉上清，無(wú)菌水重懸酵母，涂布于相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷型平板上。30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天待酵母菌落生長(zhǎng)。

(4)轉(zhuǎn)nac062d酵母轉(zhuǎn)錄激活活性鑒定：

為了鑒定該截短形式是否具有功能，發(fā)明人初步在酵母中完成了轉(zhuǎn)錄激活活性的檢測(cè)。empty代表是pgbk-t7空載體作為對(duì)照，nac062d代表pgbk-t7載體上連接有nac062d基因，作為實(shí)驗(yàn)組。挑取步驟3的單克隆接種到y(tǒng)pda液體培養(yǎng)基上，30℃過(guò)夜搖菌，第二日，測(cè)酵母菌液od600，并用無(wú)菌水稀釋酵母菌液，調(diào)整od600值在相近范圍內(nèi)。吸取5μl菌液在營(yíng)養(yǎng)缺陷型平板培養(yǎng)基上打點(diǎn)，3天后觀察酵母生長(zhǎng)情況。從土中可以看出在缺trp色氨酸的時(shí)候，nac062d和對(duì)照empty(空載體pgbk-t7)生長(zhǎng)一致，當(dāng)培養(yǎng)基中缺trp色氨酸和篩選標(biāo)記his組氨酸的時(shí)候，對(duì)照就不能生長(zhǎng)，而含有nac062d就能生長(zhǎng)，同時(shí)當(dāng)用另外一個(gè)篩選標(biāo)記x-gal染色，含有nac062d的酵母出現(xiàn)藍(lán)色，進(jìn)一步說(shuō)明nac062d這種截短形式在酵母中是具有轉(zhuǎn)錄激活活性的。如圖3。

二、轉(zhuǎn)nac062d擬南芥植株的獲得：

(1)設(shè)計(jì)引物序列如下：

p1上游:ttggcgcgccatgaatcagaatcttcatgt

p2下游：ggactagttgctacaacatcaaaaccactt

用植物中rna提取試劑盒(天根)，并參照說(shuō)明書提取野生型擬南芥(columbia生態(tài)型，購(gòu)自美國(guó)擬南芥生物資源中心，abrc)10天幼苗的總rna,然后用invitrogen反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cdna,在引物p1,p2的引導(dǎo)下pcr擴(kuò)增；凝膠電泳，回收片段約987bp。

(2)含nac062d的植物誘導(dǎo)表達(dá)載體的構(gòu)建：

用限制性內(nèi)切酶asci和spei雙酶切載體per10和實(shí)驗(yàn)1獲得的基因nac062d，對(duì)雙酶切產(chǎn)物進(jìn)行1％跑膠電泳檢測(cè)，并純化連接，得到連接產(chǎn)物。per10是一個(gè)由雌二醇誘導(dǎo)的植物表達(dá)載體，具體參照中科院遺傳與發(fā)育生物學(xué)文章，zuoj，harepd，chuanh.applicationsofchemical-inducibleexpressionsystemsinfunctionalgenomicsandbiotechnology[m]//arabidopsis，protocols.humanapress，2006:329-42.將連接載體用熱激發(fā)轉(zhuǎn)化大腸桿菌(e.coli)dh5α感受態(tài)細(xì)胞，克隆pcr鑒定，篩選陽(yáng)性克隆，將其接種于50mg/lspec壯觀霉素抗性lb液體培養(yǎng)基中，37度培養(yǎng)16小時(shí)，提質(zhì)粒，對(duì)重組質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶asci和spei雙酶切鑒定，與預(yù)期結(jié)果相符，命名為per10-nac062d，對(duì)其進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明pcr產(chǎn)物的基因具有序列表中序列2的核苷酸序列，由987個(gè)堿基構(gòu)成，其編碼序列為自5’端的1-987位堿基，其編碼具有序列表中序列1的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。其中序列表中序列2自5’端第37-492位堿基編碼nac結(jié)構(gòu)域和蛋白-蛋白相互作用區(qū)域。

上述基因nac062d對(duì)應(yīng)的基因組序列具有序列表中序列3的核苷酸序列，由1639個(gè)堿基組成，自5’端第197-374位堿基位該基因組基因的第一個(gè)外顯子，自5’端第375-644位堿基位該基因組基因的第一個(gè)內(nèi)含子，自5’端第197-374位堿基位該基因組基因的第一個(gè)內(nèi)含子自5’端,645-925位堿基位該基因組基因的第二個(gè)外顯子，自5’端第926-1019位堿基位該基因組基因的第二個(gè)內(nèi)含子，自5’端第1020-1259位堿基為該基因組基因的第三個(gè)外顯子，自5’端第1260-1351位堿基為該基因組基因的第三個(gè)內(nèi)含子，自5’端第1352-1639位堿基為該基因組基因的第四個(gè)外顯子。該基因框架結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1，將該基因命名為nac062d,將其編碼的蛋白命名為nac062d。

圖2是nac062和nac062d蛋白結(jié)構(gòu)示意圖?！皀ac”代表nac結(jié)構(gòu)域，nac062全長(zhǎng)在n端具有nac結(jié)構(gòu)域，c端具有跨膜域。nac062d在n端也具有nac結(jié)構(gòu)域，但是去掉了c端跨膜域。

(3)轉(zhuǎn)nac062d擬南芥的獲得：

將步驟2構(gòu)建的植物表達(dá)載體per10-nac062d用電擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌gv3101感受態(tài)細(xì)胞，將其涂布于含50mg/l壯觀霉素和50mg/l的利福平的lb抗性平板上，在28度、150rpm下培養(yǎng)16小時(shí)，挑取長(zhǎng)出的農(nóng)桿菌單菌落經(jīng)過(guò)引物p1和p2的pcr鑒定，結(jié)果經(jīng)pcr擴(kuò)增得到987bp的dna片段，說(shuō)明為陽(yáng)性重組農(nóng)桿菌，命名為gv3101/per10-nac062d.將gv3101/per10-nac062d接種于含50mg/l壯觀霉素和50mg/l的利福平的lb抗性培養(yǎng)液體中，在28度、150rpm下培養(yǎng)20小時(shí)，取1ml菌液接種于含50mg/ll壯觀霉素和50mg/l的利福平的300mllb抗性培養(yǎng)液體中，在28度、150rpm下培養(yǎng)達(dá)到od＝0.6.培養(yǎng)結(jié)束后，5000rpm離心15分鐘收集菌體，再將液體溶于500ml含有5％蔗糖的ms侵染液中，慢慢搖勻，將已經(jīng)去掉花和果莢的野生型擬南芥倒置于燒杯中10分鐘，得到t0代per10-nac062d植物。將上述陽(yáng)性t0代轉(zhuǎn)nac062d植物進(jìn)行培養(yǎng)，收獲種子，所得種子經(jīng)50mg/l卡那霉素篩選后得到40株t1代轉(zhuǎn)nac062d植物。經(jīng)過(guò)自交，獲取t2代nac062d植物，并挑選#6/#14/#8/#25/#16號(hào)進(jìn)行rt-pcr檢測(cè)nac062d表達(dá)量,都是高于野生型中的表達(dá)，說(shuō)明是陽(yáng)性植株。

三、轉(zhuǎn)nac062d擬南芥的表型鑒定：

(1)轉(zhuǎn)per10-nac062d植物的鑒定

首先將步驟二獲得的編號(hào)為#14和#16號(hào)代的t2代轉(zhuǎn)nac062d擬南芥(per10-nac062d)的t2代種子播在ms培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10天后的幼苗含有雌激素ms培養(yǎng)液處理10小時(shí)。(+beta-e)代表用10um雌激素(17-β-estrodiol,sigma,產(chǎn)品貨號(hào)e8875)處理的實(shí)驗(yàn)組，(-beta-e)代表不用試劑處理作為對(duì)照。處理完成后提取全苗的rna,以野生型擬南芥作為對(duì)照，反轉(zhuǎn)錄獲得cdna,用

p3(上游引物)：5’-ggggaagaagattcgaagtcag-3’

p4(下游引物)5’-gctctgcggttgtagcctcatc-3’進(jìn)行qrt-pcr,檢測(cè)了nac062d基因在t2代轉(zhuǎn)基因中植物中的表達(dá)水平，以野生型擬南芥為對(duì)照，以actin為內(nèi)參，內(nèi)參的引物為actin-f:5’-ggtaacattgtgctcagtggtgg-3’,actin-r:5’-aacgaccttaatcttcatgctgc-3’結(jié)果如圖4所示，為qrt-pcr技術(shù)檢測(cè)nac062d基因的表達(dá)水平，從圖4中可以看出，與野生型擬南芥相比，編號(hào)為#14和#16的t2代轉(zhuǎn)per10-nac062d擬南芥中nac062基因的表達(dá)水平具有不同程度的升高，說(shuō)明編號(hào)為#14和#16的t2代轉(zhuǎn)per10-nac062d擬南芥為陽(yáng)性的過(guò)表達(dá)擬南芥。

(2)轉(zhuǎn)per10-nac062d植物的表型分析：

將上述鑒定為陽(yáng)性的編號(hào)的挑選#6/#14/#8/#25/#16號(hào)進(jìn)行rt-pcr檢測(cè)nac062d表達(dá)量的t2代轉(zhuǎn)per10-nac062d擬南芥的種子播在含有10um雌激素(17-β-estrodiol，sigma，產(chǎn)品貨號(hào)e8875)的ms培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)箱，22℃，16小時(shí)光照，以野生型擬南芥為對(duì)照。6天和12天天后觀察t2代轉(zhuǎn)nac062d擬南芥和野生型植株的生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖5所示，圖5a是模式圖，圖5b是不加誘導(dǎo)劑雌激素(-betae)的時(shí)候，通過(guò)與對(duì)照野生型比較，植物和正常一致；圖和圖5c是加入10um雌激素誘導(dǎo)劑(+betae)，誘導(dǎo)nac062d基因表達(dá)6天后，野生型已經(jīng)全部發(fā)芽，而nac062d轉(zhuǎn)基因種子不發(fā)芽，圖5d是加入10um雌激素誘導(dǎo)劑(+betae)，12天后nac062d種子不發(fā)芽，而對(duì)照植物種子野生型生長(zhǎng)正常。

(3)統(tǒng)計(jì)分析差異。根據(jù)圖5的結(jié)果分別在6天和12天統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率，結(jié)果顯示極顯著。如圖6。

四、nac062d調(diào)控種子發(fā)芽的分子機(jī)制研究：

將步驟二獲得的編號(hào)為#14的t2代轉(zhuǎn)nac062d擬南芥(per10-nac062d)的種子在含有10um雌激素(17-β-estrodiol，sigma，產(chǎn)品貨號(hào)e8875)ms培養(yǎng)液中處理12小時(shí)，24小時(shí)，不處理作為對(duì)照，提取種子rna，送公司進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。aba脫落酸是一種具有倍半萜結(jié)構(gòu)的植物激素,具有能引起芽休眠、葉子脫落和抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等生理作用。研究發(fā)現(xiàn)種子發(fā)芽與aba信號(hào)通路有著密切聯(lián)系。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示結(jié)果發(fā)現(xiàn)許多與aba相關(guān)的基因在轉(zhuǎn)基因中發(fā)生了變化，說(shuō)明nac062可能是通過(guò)調(diào)控aba途徑來(lái)調(diào)控基因表達(dá)從而抑制種子發(fā)芽，如下per10-nac062d#14號(hào)通過(guò)轉(zhuǎn)錄組分析與aba信號(hào)通路相關(guān)基因列表。

轉(zhuǎn)基因材料中與aba信號(hào)通路相關(guān)的差異顯著基因。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。

序列表

序列1：nac062d蛋白序列329aa擬南芥（arabidopsisthaliana）

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序列2：nac062dcds序列987bp擬南芥（arabidopsisthaliana）

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序列3:nac062d基因組序列1639bp擬南芥（arabidopsisthaliana）

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