本發(fā)明涉及的是抗病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種中草藥的抗病毒功能的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
隨著集約化、高密度養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)頻繁爆發(fā)疾病，造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，成為了目前影響海水養(yǎng)殖穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題。其中，病毒由于其傳播速度快，能夠在短時(shí)間內(nèi)造成養(yǎng)殖個(gè)體大量死亡，是目前養(yǎng)殖業(yè)中最為普遍、又危害極為嚴(yán)重的病害。并且其宿主范圍廣，從魚(yú)類、兩棲類、爬行類直到哺乳類都有病例報(bào)道，有些還是人畜共患病原。
本發(fā)明針對(duì)以上缺陷，提供了一種中草藥抗病毒功能的檢測(cè)方法，便于抗病毒。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供了一種中草藥的抗病毒功能的檢測(cè)方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
一種中草藥的抗病毒功能的檢測(cè)方法，步驟如下：
一、樣品處理
1、中草藥預(yù)處理：將選擇的中草藥產(chǎn)品，如果是固體或制劑，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)熬煮成為液體湯藥；如果是液體產(chǎn)品，直接進(jìn)行1500rpm離心5min,去除沉淀；
2、用0.45μm濾器過(guò)濾上述過(guò)程得到的上清液為樣品，放-20℃冰箱中保存；
二、樣品最佳濃度的選擇
1、設(shè)置不同濃度梯度50％(即250ul完全培養(yǎng)基+250ul中草藥樣品)、10％、1％、0.1％，28℃孵育epc細(xì)胞24h；
2、觀察epc細(xì)胞的存活情況，選擇合適濃度；
三、抗病毒功能檢測(cè)
1、實(shí)驗(yàn)前先用選擇好的樣品濃度孵育epc細(xì)胞24h，并設(shè)立不加中草藥樣品和用epc中草藥樣品的對(duì)照組；
2、所有孔吸出原培養(yǎng)基用0.1moisvcv孵育細(xì)胞1h后，吸出培養(yǎng)基再用10％fbs+mem培養(yǎng)基孵育細(xì)胞，觀察24h時(shí)細(xì)胞的病變情況并收集樣品；
3、提取上述樣品rna，反轉(zhuǎn)錄為cdna，分別檢測(cè)與抗病毒反應(yīng)相關(guān)的mx1的轉(zhuǎn)錄水平以及svcv-g的復(fù)制水平。
本發(fā)明的有益效果為：中草藥具有明顯的抗病毒效果，不但能夠提高養(yǎng)殖生物的免疫力，提高對(duì)外界環(huán)境的抗逆性，還具有無(wú)毒、無(wú)藥物殘留、使用安全方便的優(yōu)點(diǎn)，具有一定的適用性。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實(shí)施例：
一種中草藥的抗病毒功能的檢測(cè)方法，步驟如下：
一、樣品處理
1、中草藥預(yù)處理：將選擇的中草藥產(chǎn)品，如果是固體或制劑，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)熬煮成為液體湯藥；如果是液體產(chǎn)品，直接進(jìn)行1500rpm離心5min,去除沉淀；
2、用0.45μm濾器過(guò)濾上述過(guò)程得到的上清液為樣品，放-20℃冰箱中保存；
二、樣品最佳濃度的選擇
1、設(shè)置不同濃度梯度50％(即250ul完全培養(yǎng)基+250ul中草藥樣品)、10％、1％、0.1％，28℃孵育epc細(xì)胞24h；
2、觀察epc細(xì)胞的存活情況，選擇合適濃度；
三、抗病毒功能檢測(cè)
1、實(shí)驗(yàn)前先用選擇好的樣品濃度孵育epc細(xì)胞24h，并設(shè)立不加中草藥樣品和用epc中草藥樣品的對(duì)照組；
2、所有孔吸出原培養(yǎng)基用0.1moisvcv孵育細(xì)胞1h后，吸出培養(yǎng)基再用10％fbs+mem培養(yǎng)基孵育細(xì)胞，觀察24h時(shí)細(xì)胞的病變情況并收集樣品；
3、提取上述樣品rna，反轉(zhuǎn)錄為cdna，分別檢測(cè)與抗病毒反應(yīng)相關(guān)的mx1的轉(zhuǎn)錄水平以及svcv-g的復(fù)制水平。
實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果
運(yùn)用50％濃度中草藥樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)epc細(xì)胞6h內(nèi)死亡，死亡率高達(dá)90％；10％濃度中草藥樣品對(duì)epc細(xì)胞有較大毒性，死亡率40％；1％濃度中草藥樣品對(duì)細(xì)胞幾乎沒(méi)有損傷。
實(shí)驗(yàn)證明，所篩選的中草藥具有明顯的抗病毒效果。
對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的這種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。