本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域。更具體地，涉及一種¹³¹I標(biāo)記槲皮素的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

甲狀腺癌是一種常見的內(nèi)分泌腫瘤，約占整個(gè)人體腫瘤的1％，2005年有報(bào)道顯示，全球甲狀腺癌發(fā)病率以每年4％的增幅上升，已躍居女性常見腫瘤第8位。分化型甲狀腺癌(Differentiated thyroid carcinoma,DTC)包括甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)和甲狀腺濾泡狀癌(Follicular thyroid carcinoma,FTC)，由于腫瘤細(xì)胞保留了正常甲狀腺細(xì)胞的部分功能而具有濃聚碘能力，所以大多數(shù)DTC患者經(jīng)手術(shù)切除+放射性核素¹³¹I治療+甲狀腺激素代替抑制療法可治愈，預(yù)后良好。但是30％的病人在¹³¹I治療過程中病情呈進(jìn)展性變化，甲狀腺癌及轉(zhuǎn)移灶因失分化逐漸失去攝碘能力。因此，研究尋找減少失分化和使失分化的癌再分化的治療方法，恢復(fù)¹³¹I治療效果，降低甲狀腺癌的死亡率，有著重要的意義。

再分化治療是指抑制腫瘤的生長，使失分化和未分化的甲癌重新獲得吸碘的功能的方法，目前對失分化甲癌的治療現(xiàn)有以下幾方面的研究：1、維甲酸(RA)促再分化治療，2、NIS基因轉(zhuǎn)移治療，3、NIS去甲基化治療，4、抗VEGF治療。但是，以上的幾種治療療效不佳且有許多的副作用，因此，需要一種安全有效的藥物。

任何一種腫瘤治療方法單獨(dú)應(yīng)用，其療效的提高很難令人滿意，各種方法的綜合使用可以揚(yáng)長補(bǔ)短，提高療效，降低毒副作用，例如臨床上廣泛采用的放射治療和化療的聯(lián)合應(yīng)用，放射增敏劑的應(yīng)用也是綜合治療中的一部分。放射增敏劑是指能提高射線對腫瘤細(xì)胞的殺傷力，尤其是腫瘤組織中的乏氧細(xì)胞，而對受照射的正常細(xì)胞影響不大的一些化學(xué)物質(zhì)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在腫瘤治療中，用正常組織可耐受的劑量進(jìn)行單純照射治療，腫瘤的治愈率只能達(dá)到40％左右，如果合并使用增敏藥物，治愈率可達(dá)90％。目前己獲得一些增敏效價(jià)很高的藥物，并試用于臨床，如硝基咪唑類化合物等，但由于存在明顯的神經(jīng)毒副作用限制了其在臨床上的應(yīng)用，因而，尋找高效低毒的腫瘤放療增敏劑是當(dāng)前腫瘤放療急需解決的難題，特別是在內(nèi)放療增敏研究，國內(nèi)外很少見研究。

槲皮素(quercetin,QU；3,3′,4′,5,7-5羥基黃酮)及其衍生物是具有多種生物學(xué)活性的黃酮類化合物。廣泛存在于自然界各種植物的花和果實(shí)中。國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)槲皮素有極強(qiáng)的抗腫瘤作用，其機(jī)制是通過多途徑抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡等。有許多試驗(yàn)證實(shí)該物質(zhì)能使許多類型的細(xì)胞系得癌細(xì)胞再分化。

鑒于目前研究狀況，探討¹³¹I標(biāo)記槲皮素對腫瘤內(nèi)放射增敏、對失分化和未分化甲狀腺癌有再分化治療的作用，為甲狀腺癌的治療提供方法和對放射免疫治療的輻射增敏研究提供理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種¹³¹I標(biāo)記槲皮素的制備方法，該方法簡單，標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記率高。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種¹³¹I標(biāo)記槲皮素的應(yīng)用。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種¹³¹I標(biāo)記槲皮素的制備方法，采用氯胺T法進(jìn)行放射性碘標(biāo)記，包括以下步驟：

(1)將槲皮素在pH＝6-8的體系中與KI、¹³¹I和氯胺-T進(jìn)行在0-37℃的條件下反應(yīng)5-30min；

(2)加入過量還原劑終止步驟(1)反應(yīng)；

(3)純化，即得。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，所述體系的pH＝6；

進(jìn)一步，所述KI與槲皮素的摩爾比為0.25-0.75；優(yōu)選的為0.25；

進(jìn)一步，所述¹³¹I的用量為1mg槲皮素與1.21-1.693m Ci的¹³¹I進(jìn)行反應(yīng)；優(yōu)選的，為1mg槲皮素與1.529mCi的¹³¹I進(jìn)行反應(yīng)。

本發(fā)明對pH、KI的量、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度等對標(biāo)記率的影響，以及QU對¹³¹I的負(fù)載量的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明pH、KI的量對標(biāo)記率影響較大，反應(yīng)時(shí)間和溫度對標(biāo)記率的影響較小，最終得到：當(dāng)pH＝6-8，KI與槲皮素的摩爾比為0.25-0.75標(biāo)記率較高；當(dāng)pH＝6，KI與槲皮素的摩爾比為0.25標(biāo)記率最高；而QU對¹³¹I的負(fù)載量也具有重要影響，1mg槲皮素對應(yīng)與1.21-1.693mCi的¹³¹I進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，負(fù)載量和標(biāo)記率達(dá)到了較好的結(jié)果，既能使得標(biāo)記率較高，又不造成¹³¹I的大量浪費(fèi)，節(jié)約了成本；另外，為了節(jié)省時(shí)間，所述反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選的為5min。

在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例中，所述還原劑為偏重亞硫酸鈉或硫代硫酸鈉；

在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例中，所述純化為乙酸乙酯萃取法。

本發(fā)明還公開了所述¹³¹I標(biāo)記槲皮素在制備治療甲狀腺癌藥物或制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明通過研究¹³¹I-QU與甲狀腺癌細(xì)胞的相互作用表明：與¹³¹I相比，甲狀腺癌細(xì)胞對¹³¹I-QU具有高而快速的攝取，滯留時(shí)間長；與¹³¹I，QU及¹³¹I+QU對未分化細(xì)胞增殖的抑制情況相比，¹³¹I-QU對癌細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)；通過荷瘤鼠瘤內(nèi)注射¹³¹I-QU對甲狀腺癌的治療，結(jié)果表明¹³¹I-QU對甲狀腺癌具有很好的治療效果，且不影響體重。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明¹³¹I標(biāo)記槲皮素的制備方法簡單，標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記率高，便于進(jìn)一步開發(fā)利用。另外，本發(fā)明¹³¹I標(biāo)記槲皮素有效提高了對甲狀腺癌細(xì)胞的抑制作用，達(dá)到較好的治療效果。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

圖1示出pH對¹³¹I標(biāo)記率的影響；

圖2示出KI的量對¹³¹I標(biāo)記率的影響；

圖3示出反應(yīng)時(shí)間對標(biāo)記率的影響；

圖4示出¹³¹I的負(fù)載量與標(biāo)記率的關(guān)系；

圖5示出碘標(biāo)記QU的HPLC結(jié)果；

圖6示出3.63min處的質(zhì)譜分析；

圖7示出5.81min處的質(zhì)譜分析；

圖8示出6.82min處的質(zhì)譜分析；

圖9示出¹³¹I-QU在生理鹽水及PBS(0.01mol/L，pH＝7.4)中的穩(wěn)定性

圖10示出分化型甲狀腺癌細(xì)胞FTC-133對¹³¹I及¹³¹I-QU的攝取情況；

圖11示出分化型甲狀腺癌細(xì)胞TT對¹³¹I及¹³¹I-QU的攝取情況；

圖12示出未分化甲狀腺癌細(xì)胞DRO對¹³¹I及¹³¹I-QU的攝取情況；

圖13示出加入過量的QU時(shí)三種甲狀腺癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的攝取情況；

圖14示出槲皮素在甲狀腺癌細(xì)胞DRO中的熒光效應(yīng)，其中，A：細(xì)胞的顯微照片，B：細(xì)胞熒光照片，C：細(xì)胞攝取槲皮素后的顯微照片，D：細(xì)胞攝取槲皮素后的熒光照片，E：細(xì)胞攝取槲皮素后顯微照片及熒光照片的融合圖；

圖15示出甲狀腺癌細(xì)胞DRO中¹³¹I-QU的流出情況；

圖16示出¹³¹I-QU、¹³¹I、QU、¹³¹I+QU對甲狀腺癌細(xì)胞DRO生長抑制情況(藥物作用時(shí)間T＝24h)；

圖17示出¹³¹I-QU、¹³¹I、QU、¹³¹I+QU對甲狀腺癌細(xì)胞DRO生長抑制情況(藥物作用時(shí)間T＝48h)；

圖18示出¹³¹I-QU、¹³¹I、QU、¹³¹I+QU對甲狀腺癌細(xì)胞DRO生長抑制情況(藥物作用時(shí)間T＝72h)；

圖19示出瘤內(nèi)注射¹³¹I-QU后，荷瘤裸鼠不同時(shí)間點(diǎn)的SPECT顯像；

圖20示出治療組與對照組荷瘤裸鼠腫瘤體積大??；

圖21示出荷瘤裸鼠體重變化。

具體實(shí)施方式

為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例和附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。附圖中相似的部件以相同的附圖標(biāo)記進(jìn)行表示。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

試驗(yàn)例1 ¹³¹I標(biāo)記槲皮素(QU)條件的選擇

本發(fā)明研究了在采用氯胺-T法作¹³¹I標(biāo)記QU的過程中，pH、KI的量、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度等對標(biāo)記率的影響，以及QU對¹³¹I的負(fù)載量的影響；

1、pH對標(biāo)記率的影響

利用1mol/HCl及NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH，使pH＝2-10，研究pH與¹³¹I標(biāo)記率的影響關(guān)系，結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明：pH＝6時(shí)，標(biāo)記率最高，達(dá)82.17％。當(dāng)pH≤6時(shí)，標(biāo)記率隨pH的增加而增加，pH≥6時(shí)，標(biāo)記率隨pH的增加而降低。這可能與氯胺-T的活性有關(guān)，氯胺-T在中性條件下(pH＝6-8)活性最高，氧化效果最好。另外，pH改變，使QU苯環(huán)電子云密度發(fā)生變化，影響¹³¹I的標(biāo)記率。當(dāng)QU堿性條件下會以其鈉鹽的形式存在，從而改變QU的水溶性，影響乙酸乙酯的萃取效率。

2、KI用量對標(biāo)記率的影響

在QU的量固定為1mg，pH＝6的條件下，設(shè)置KI/QU(mol/mol)＝0，0.25，0.5，0.75，1.0，1.25，1.5，2.0，測定KI與¹³¹I標(biāo)記率的關(guān)系。結(jié)果如圖2所示，結(jié)果表明：穩(wěn)定的KI與QU摩爾比為0.25時(shí)，¹³¹I的標(biāo)記率最大，為86.78％；隨著KI與QU摩爾比的逐漸增加(由0.25增加到2.0)，¹³¹I的標(biāo)記率逐漸降低。這可能是因?yàn)镵I量增加不利于¹³¹I與KI的相互競爭；而當(dāng)KI的量為0時(shí)，其標(biāo)記率(80.28％)低于KI為0.25時(shí)的標(biāo)記率(86.78％)，這可能是由于¹³¹I濃度過低所致，適當(dāng)?shù)奶砑臃€(wěn)定的KI有利于減少¹³¹I的游離，從而增加標(biāo)記率。

3、反應(yīng)時(shí)間及溫度對標(biāo)記率的影響

0.3μmol的QU，0.075μmol的KI，10μL¹³¹I及0.1μmol的氯胺-T在pH＝6的條件下分別反應(yīng)5、10、15、20、30min后，測定¹³¹I的標(biāo)記率結(jié)果如圖3所示，從圖中可以看出反應(yīng)5、10、15、20、30min后¹³¹I的標(biāo)記率分別為86.78％、85.04％、85.19％、87.29％、85.44％，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，說明反應(yīng)時(shí)間對標(biāo)記率的影響較小，采用氯胺T法標(biāo)記碘是一個(gè)快速的過程，反應(yīng)5min即能得到較高的標(biāo)記率。

本發(fā)明還研究了溫度對¹³¹I標(biāo)記率的影響，結(jié)果表明，在溫度為0～37℃區(qū)間內(nèi)，溫度對標(biāo)記率無明顯影響。

4、QU對¹³¹I的負(fù)載量的影響

為了探討QU對放射性碘的最大負(fù)載量，本發(fā)明研究了1mg QU在不同¹³¹I劑量下的標(biāo)記率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1和圖4所示，從圖中可以看出：當(dāng)¹³¹I的劑量為0.219-2.477mCi時(shí)，隨著¹³¹I加入劑量的增加，1mg QU對碘的負(fù)載量也隨之增加(由0.163mCi/mg增加到1.407mCi/mg)，但¹³¹I的標(biāo)記率卻呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢。說明QU對¹³¹I的負(fù)載量雖然增加了，但隨著標(biāo)記率的降低，¹³¹I的浪費(fèi)增加。

綜合考慮負(fù)載量及¹³¹I的標(biāo)記率，本發(fā)明認(rèn)為QU對¹³¹I最適合的負(fù)載量出現(xiàn)在0.856-1.125mCi之間(如圖4，A點(diǎn)處)，A點(diǎn)處¹³¹I加入量為1.529mCi，¹³¹I的負(fù)載量約為1.04mCi/mg，標(biāo)記率約為68％。

表1水相及乙酸乙酯相的放射性計(jì)數(shù)

試驗(yàn)例2 ¹³¹I標(biāo)記QU的質(zhì)量檢測

1、HPLC、MS、LCMS-IT-TOF檢測標(biāo)記物

本發(fā)明采用LC-MS分析判定穩(wěn)定的KI對QU的標(biāo)記情況，確定I代反應(yīng)的個(gè)數(shù)。由圖5可知，純化后的碘標(biāo)記的QU的產(chǎn)物的HPLC中主要包含1.95、2.79、3.63、5.25、5.81、6.82min處的六個(gè)峰，其中3.63、5.81、6.82min處的三個(gè)峰在360nm處的吸光度較大，其含量占標(biāo)記產(chǎn)物的95.44％(如表2)。發(fā)明采用MS進(jìn)一步分析得到：3.63，5.81，6.82min處的分子量分別為302.0347，427.9328，427.9328(如圖6，圖7，圖8)。這與QU的分子量302.02，1I-QU的分子量427.9166一致。且三個(gè)時(shí)間點(diǎn)產(chǎn)物所占比例分別為78.53％，9.46％，7.45％。5.81，6.82min處分子量相同，為I-QU的兩種同分異構(gòu)體。

表2碘標(biāo)記QU各組分的積分面積

因此，可認(rèn)為穩(wěn)定I的對QU標(biāo)記后，并通過萃取法純化的產(chǎn)物主要為QU及I-QU，占95.44％。故認(rèn)為采用氯胺T法對QU進(jìn)行碘標(biāo)記的產(chǎn)物可用于后續(xù)的細(xì)胞及動物實(shí)驗(yàn)的研究。

雖然從QU的分子結(jié)構(gòu)上分析，QU有多個(gè)碘的親電取代位點(diǎn)，但在不同反應(yīng)條件下，I有不同的親電取代位點(diǎn)。但由LCMS數(shù)據(jù)分析可知，僅有一個(gè)碘發(fā)生了取代反應(yīng)。碘與QU反應(yīng)，碘最易取代QU酚羥基的鄰對位，由此，本發(fā)明中碘標(biāo)記QU的反應(yīng)的反應(yīng)方程式如下：

2、¹³¹I標(biāo)記槲皮素的體外穩(wěn)定性

本發(fā)明中，¹³¹I-QU的體外穩(wěn)定性采用¹³¹I-QU在37℃下，在不同介質(zhì)中孵育不同時(shí)間后的放射化學(xué)純度來表示。如圖9所示，¹³¹I-QU在生理鹽水(0.9％的NaCl溶液)及PBS(0.01mol/L，pH＝7.4)中于37℃條件下放置1、2、4、8、16、24、48h后，其放射化學(xué)純度呈現(xiàn)緩慢下降的趨勢。

¹³¹I-QU在生理鹽水中1h的放射化學(xué)純度為91.24％±3.25％(means±sd)，48h后放射化學(xué)純度仍高達(dá)81.62±6.28％，說明¹³¹I-QU在生理鹽水中具有較好的體外穩(wěn)定性。¹³¹I-QU在PBS(0.01mol/L，pH＝7.4)中孵育1h后，其放射化學(xué)純度為82.25％±4.05％，48h后放射化學(xué)純度54.48％±10.07％。與¹³¹I-QU在生理鹽水中的穩(wěn)定性相比，¹³¹I-QU在PBS中的穩(wěn)定性不及在生理鹽水中的穩(wěn)定性。

試驗(yàn)例3 ¹³¹I-QU與甲狀腺癌細(xì)胞的相互作用

1、甲狀腺癌細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

為探究¹³¹I-QU能否提高甲狀腺癌細(xì)胞對放射性的攝取，本發(fā)明研究并比較了甲狀腺癌分化型細(xì)胞(FTC-133、TT)和未分化型細(xì)胞(DRO)對¹³¹I和¹³¹I-QU的攝取能力，結(jié)果如圖10、圖11及圖12所示，從圖中可以看出：未分化甲癌細(xì)胞DRO幾乎不具有攝取¹³¹I的能力，而分化型甲癌細(xì)胞FTC-133、TT具有攝取¹³¹I的能力，且對¹³¹I的攝取隨時(shí)間變化表現(xiàn)出先增加后逐漸保持平衡的趨勢，其最大攝取量均出現(xiàn)在15min左右。FTC-133與TT的攝取¹³¹I能力的差異可能與細(xì)胞活性及細(xì)胞培養(yǎng)代數(shù)有關(guān)，且分化型甲狀腺癌細(xì)胞在長期培養(yǎng)過程中可能逐漸發(fā)生失分化，具體表現(xiàn)為攝碘能力的降低。

與¹³¹I相比，F(xiàn)TC-133、TT、DRO對¹³¹I-QU均有較高的攝取，其中FTC-133對¹³¹I-QU的最大攝取量是對¹³¹I攝取量的4.2倍，TT對¹³¹I-QU的最大攝取量是對¹³¹I的13.1倍，DRO對¹³¹I-QU的最大攝取量是對¹³¹I的17.0倍。并且，三種癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的最大攝取量均出現(xiàn)在5-7min，說明癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的攝取較¹³¹I更快速。甲狀腺癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的高而快速的攝取，將更有利于¹³¹I-QU對癌細(xì)胞的生長抑制作用及甲狀腺癌的治療。

為進(jìn)一步探討三種甲狀腺癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的攝取主要?dú)w功于癌細(xì)胞對QU的攝取，本發(fā)明開展了以下實(shí)驗(yàn)，即在研究癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的攝取時(shí)，加入過量的QU，測定細(xì)胞中的放射性，并比較細(xì)胞對¹³¹I-QU攝取情況，結(jié)果如圖13所示。在攝取實(shí)驗(yàn)中加入過量的QU后，F(xiàn)TC-133、TT、DRO對¹³¹I-QU的攝取明顯降低，降低到約原來的1/8。其原因可解釋為QU與¹³¹I-QU的競爭作用，癌細(xì)胞對QU的攝取，降低了其對¹³¹I-QU的攝取。

此外，鑒于QU在紫外光照射下，能發(fā)出綠色的熒光。本發(fā)明通過熒光顯微鏡研究了甲狀腺癌細(xì)胞(DRO)與QU共同孵育后，細(xì)胞的熒光效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖14所示，細(xì)胞與QU共同孵育后，細(xì)胞在熒光顯微鏡下呈綠色，證明細(xì)胞確實(shí)能攝取QU。

甲狀腺癌細(xì)胞對¹³¹I-QU的攝取實(shí)驗(yàn)說明，將¹³¹I標(biāo)記到QU上，可使原來不具有攝碘能力的甲狀腺癌細(xì)胞DRO攝取放射性碘(¹³¹I-QU)，從而達(dá)到殺死和抑制細(xì)胞生長的作用；同時(shí)增加具有攝碘能力的癌細(xì)胞FTC-133，TT對放射性碘(¹³¹I-QU)的攝取能力，增加對其癌細(xì)胞的破壞作用。并且QU具有放射性增敏的作用，以及使失分化及未分化的癌細(xì)胞再分化的作用，¹³¹I與QU的聯(lián)合使用將有望更快速的殺死癌細(xì)胞，避免失分化的發(fā)生，并同時(shí)使失分化及未分化的癌細(xì)胞再分化。

2、細(xì)胞流出實(shí)驗(yàn)

甲狀腺癌細(xì)胞攝取¹³¹I-QU后，¹³¹I-QU能否在細(xì)胞內(nèi)“長期”存在，是影響其對甲狀腺癌細(xì)胞抑制作用的重要因素。因此，本發(fā)明測定了¹³¹I-QU在未分化甲狀腺癌細(xì)胞DRO中的流出情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖15所示。¹³¹I-QU在DRO中的半衰期約為10min，說明¹³¹I-QU在甲狀腺癌細(xì)胞內(nèi)的滯留時(shí)間與¹³¹I在黑色瘤細(xì)胞內(nèi)的滯留時(shí)間相當(dāng)。

3、細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)

本發(fā)明主要采用CCK-8法檢驗(yàn)不同藥物作用下未分化甲狀腺癌細(xì)胞DRO存活情況，并同時(shí)研究了藥物劑量，作用時(shí)間的影響。在細(xì)胞水平上研究¹³¹I-QU，¹³¹I，QU及¹³¹I+QU對未分化細(xì)胞增殖的抑制情況。其中，¹³¹I的劑量分別為5、10、20、30、40μCi，QU的濃度分別為14、28、56、84、112μmol/L，藥物作用時(shí)間分別為24、48、72h，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖16、圖17、圖18所示。

在同一藥物劑量下，四種藥物對DRO增殖的抑制強(qiáng)弱順序?yàn)?sup>131I-QU≥¹³¹I+QU＞QU＞¹³¹I，且抑制作用與藥物劑量及作用時(shí)間均成依賴關(guān)系。當(dāng)QU濃度為112μmol/L，¹³¹I劑量為40μCi，作用時(shí)間為72h時(shí)，¹³¹I-QU對細(xì)胞增殖的抑制率高達(dá)86.87±7.15％(mean±SD)，¹³¹I+QU，QU及¹³¹I對細(xì)胞的抑制率分別為83.66±12.11％，58.43±5.08％，18.86±6.29％。與相同劑量的¹³¹I相比，¹³¹I-QU對細(xì)胞的抑制作用約提高5倍。其原因可歸功于DRO對QU的快速攝取及QU的放射性增敏作用。

QU進(jìn)入細(xì)胞后，能嵌入到DNA雙鏈上，并通過共價(jià)或非共價(jià)鍵作用與DNA磷酸基團(tuán)結(jié)合。由于未分化型甲癌細(xì)胞DRO不能攝取¹³¹I，¹³¹I及¹³¹I+QU主要通過外照射抑制癌細(xì)胞的生長。與¹³¹I、¹³¹I+QU相比，¹³¹I-QU能被癌細(xì)胞攝取，并嵌入到DNA雙鏈中，將大大增加藥物對細(xì)胞核及DNA的損傷，并加速細(xì)胞的碎裂。

從對癌細(xì)胞生長的抑制情況上看，與¹³¹I+QU組相比，¹³¹I-QU組對甲狀腺癌細(xì)胞DRO生長的抑制作用并沒有明顯優(yōu)勢(86.87±7.15％Vs 83.66±12.11％)，但對于實(shí)體腫瘤來說，因甲狀腺未分化癌細(xì)胞不具備攝取¹³¹I的能力，¹³¹I+QU的治療方式將較難達(dá)到抑制腫瘤生長的作用。

試驗(yàn)例4 ¹³¹I-QU對甲狀腺癌抑制作用及其體內(nèi)分布

1、¹³¹I-QU在荷瘤鼠體內(nèi)的分布及SPECT顯像

本發(fā)明利用SPECT顯像對¹³¹I-QU在腫瘤內(nèi)的滯留時(shí)間及全身分布進(jìn)行了初步分析。并通過不同時(shí)間¹³¹I-QU在荷瘤裸鼠各組織的分布情況，研究了¹³¹I-QU在動物體內(nèi)的代謝情況。

SPECT顯像結(jié)果表明(如圖19)，通過瘤內(nèi)注射的放射注射¹³¹I-QU后的前4h，¹³¹I-QU主要富集在腫瘤內(nèi)；注射藥物8h后，¹³¹I-QU開始由腫瘤中心向周圍組織擴(kuò)散，注射藥物24h，36h后，¹³¹I-QU進(jìn)一步向周圍組織擴(kuò)散，且腫瘤中心的放射性劑量明顯減弱。

荷DRO瘤裸鼠腫瘤及其他各組織器官的放射性生物分布如表3所示。瘤內(nèi)注射¹³¹I-QU 2h后，¹³¹I-QU主要集中在腫瘤組織，約占注入量的57.99±5.62％(mean±SD)，血液、肝臟等組織未見明顯的放射性濃聚；且注射藥物8、16、24、48h后，腫瘤內(nèi)的¹³¹I-QU分別占注入量的47.22±3.86％、35.22±5.23％、18.46±4.54％及9.03+1.14％。與骨骼、肌肉等組織相比，肝臟及腎臟具有較高的放射性，進(jìn)一步說明游離的¹³¹I主要通過尿液排出體外，并與QU的代謝產(chǎn)物主要通過CO₂和糞尿排出體外的研究結(jié)果相符。

表3 ¹³¹I-QU在瘤裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布(％ID/g,mean±SD,n＝4)

2、¹³¹I-槲皮素對甲狀腺癌的治療效果觀察

注射藥物后，荷DRO瘤裸鼠的腫瘤生長是否受到抑制是判斷¹³¹I-QU治療活體腫瘤是否有效的最直接證據(jù)。本發(fā)明觀察了瘤內(nèi)注射¹³¹I-QU及同等量的PBS(pH＝7.4，0.01mol/L)0-28天后，治療組及對照組裸鼠腫瘤的體積變化，其結(jié)果如表4及圖20所示。

在28天的觀察期內(nèi)，對照組腫瘤體積不斷增大，第28天時(shí)，腫瘤體積為907.65±189.21mm³(mean±SD)。與對照組相比，注射藥物后治療組腫瘤體積被明顯抑制，且從第3天開始，治療組與對照組腫瘤體積有顯著性差異(P＜0.05)，第28天的抑瘤率約為66.51％。瘤內(nèi)注射¹³¹I-QU后的第7天，治療組腫瘤體積達(dá)到最小(由54.98±5.14mm³縮小至34.93±13.29mm³)，隨后治療組腫瘤體積開始逐漸增大。其原因可能是1mCi的¹³¹I-QU不足以完全抑制腫瘤的生長或¹³¹I-QU在腫瘤內(nèi)的滯留時(shí)間不夠長。鑒于此，要完全抑制約50mm³的腫瘤的生長，需增加¹³¹I-QU單次給藥的劑量或采用多次給藥的治療手段。另外，也可延長藥物在腫瘤內(nèi)的滯留時(shí)間以達(dá)到更好的治療效果。

表4治療組與對照組荷瘤裸鼠腫瘤體積大小(mean±SD,n＝5)

此外，在觀察¹³¹I-QU對甲狀腺癌的治療效果的同時(shí)，本發(fā)明對裸鼠體重也進(jìn)行了考察，其結(jié)果如圖21所示。治療實(shí)驗(yàn)后期對照組及治療組裸鼠的身體狀態(tài)與治療實(shí)驗(yàn)前期相比均有所減弱，但從裸鼠體重上看，未見明顯的體重下降，且治療組與對照組裸鼠體重沒有顯著性差異(P＞0.05)。

顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實(shí)施方式的限定，對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動，這里無法對所有的實(shí)施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。