本發(fā)明屬于生物芯片技術領域,具體涉及一種生物芯片用清洗液。
背景技術:
目前常用的洗滌液為磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液,配方為稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至1L即可。
洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景,從而帶來不理想的結果。PBS溶液作為洗滌液,會引起洗滌不充分,常常出現(xiàn)高背景,引起檢測結果差異。
技術實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術中常用磷酸鹽緩沖溶液中生物芯片洗滌不充分導致背景高,引起檢測結果差異的問題,提供一種生物芯片用清洗液,所述清洗液具有能使芯片膜面背景信號低,分析信噪比高的優(yōu)點。
本發(fā)明提供了一種生物芯片用清洗液,按重量百分比計,由以下組分構成:
50%1.25X TBE緩沖液,10%硫酸銨溶液,2%的非離子型表面活性劑,0.02%Proclin300,余量為去離子水;
所述1.25X TBE緩沖液由下述制備方法制備:
1)準確稱量135g Tris,倒入5000ml燒杯中;
2)準確稱量68.75克硼酸,倒入5000ml燒杯中;
3)用量筒加入2000ml去離子水倒入5000ml燒杯中,混勻;
4)向步驟3)溶液中加入50ml 0.5M的EDTA二鈉溶液,混勻;
5)步驟4)中溶液倒入3000ml量筒定容至2500ml,再倒入5000ml燒杯,混勻即可。
所述0.5M的EDTA溶液通過下述步驟配制:
1)準確稱量46.53g乙二胺四乙酸二鈉,到入500ml燒杯;
2)用量筒加入200ml去離子水至500ml燒杯中,磁力加熱攪拌器攪拌溶解;
3)加NaOH調(diào)pH值至8.0,定容至250ml即可。
所述非離子型表面活性劑為吐溫20;
所述Proclin300由2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮組成;
所述硫酸銨溶液為飽和水溶液;
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面,本發(fā)明提供了一種生物芯片用清洗液制備方法:包括以下步驟
1)稱取1.25X TBE緩沖液置于混合容器中;
2)稱取硫酸銨溶液置于步驟1)混合容器中攪拌混勻;
3)稱取非離子型表面活性劑置于步驟2)中攪拌混勻;
4)向步驟3)溶液中加入Proclin300;
5)補充去離子水至所需量,攪拌混勻后得生物芯片用清洗液。
本發(fā)明所述清洗液含有50%1.25X TBE緩沖液可穩(wěn)定溶液酸堿度在PH7-8,使芯片檢測反應中抗原抗體反應體系穩(wěn)定。10%硫酸銨溶液有利于蛋白的沉淀吸附,使抗原抗體反應更加充分。2%Tween20為非離子型表面活性劑(去污劑),更加有效地去除反應體系中未參與反應的部分。0.02%Proclin300為防腐劑,有利于洗滌液的長期保存使用。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點:
本發(fā)明所述清洗液采用TBE緩沖液,而非PBS緩沖液,緩沖能力優(yōu)于PBS緩沖液。本發(fā)明緩沖液增加的10%硫酸銨溶液有利于蛋白的沉淀吸附,抗原抗體反應優(yōu)于PBS緩沖液。本發(fā)明緩沖液增加的2%Tween20為非離子型表面活性劑(去污劑),更加有效地去除反應體系中未參與反應的部分,能使芯片膜面背景信號低,分析信噪比高,使清洗液的清洗效果優(yōu)于PBS緩沖液。
具體實施方式
為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚明了,下面結合具體實施方式,對本發(fā)明進一步詳細說明。應該理解,這些描述只是示例性的,而并非要限制本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明未特指說明的溶液均為水溶液,所用試劑為常規(guī)生化試劑。
實施例
一、首先配制0.5M的EDTA溶液:
1)準確稱量46.53g乙二胺四乙酸二鈉,到入500ml燒杯;
2)用量筒加入200ml去離子水至500ml燒杯中,磁力加熱攪拌器攪拌溶解;
3)加NaOH調(diào)pH值至8.0,定容至250ml即可。
二、然后配制1.25X TBE緩沖液:
1)準確稱量135g Tris,倒入5000ml燒杯中;
2)準確稱量68.75克硼酸,倒入5000ml燒杯中;
3)用量筒加入2000ml去離子水倒入5000ml燒杯中,混勻;
4)向步驟3)溶液中加入50ml 0.5M的EDTA二鈉溶液,混勻;
5)步驟4)中溶液倒入3000ml量筒定容至2500ml,再倒入5000ml燒杯,混勻即可。
三、配制生物芯片用清洗液
按以下重量百分比配制:50%1.25X TBE緩沖液,10%硫酸銨溶液,2%的非離子型表面活性劑,0.02%Proclin300,余量為去離子水;
具體制備過程如下:
1)稱取1.25X TBE緩沖液置于混合容器中;
2)稱取硫酸銨溶液置于步驟1)混合容器中攪拌混勻;
3)稱取吐溫20置于步驟2)中攪拌混勻;
4)向步驟3)溶液中加入Proclin300;
5)補充去離子水至所需量,攪拌混勻后得生物芯片用清洗液。
盡管已經(jīng)詳細描述了本發(fā)明的實施方式,但是應該理解的是,在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下,可以對本發(fā)明的實施方式做出各種改變、替換和變更。