本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體是一種乳腺癌基因檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮細胞組織的惡性腫瘤，乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命，但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落，一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴結(jié)播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。全球乳腺癌發(fā)生率自20世紀70年代末開始一直上升，且逐漸年輕化，嚴重威脅廣大婦女的身體健康，因此，對乳腺癌的合理防治至關(guān)重要。
乳腺癌是多因素、多基因和環(huán)境共同作用的結(jié)果，其家族遺傳性早已被人們所認識。大量研究表明，與現(xiàn)已知的BRCA1、BRCA2，和PALB2、RECQL等這些基因突變相關(guān)的乳腺癌稱為遺傳性乳腺癌，占全部乳腺癌的5%-10%。隨著乳腺癌發(fā)病率的增加，乳腺癌易感基因的研究越來越被重視。新一代測序技術(shù)為尋找這些易感基因的致病突變提供了一種新的平臺。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，將提高治療的針對性，避免過度化治療。利用現(xiàn)代科學研究成果，開發(fā)一項基于分子遺傳基礎的乳腺癌基因檢測產(chǎn)品會對受檢者罹患乳腺癌風險性的評估更便捷，更科學，同時對易感基因突變攜帶者的臨床應用也有很重要的意義。人們都是采用乳腺癌檢測試劑盒對基因進行檢測，現(xiàn)有的乳腺癌檢測試劑盒只能檢測幾個致病SNP位點，其余的檢測需要在別的試劑盒中進行檢測，使用不方便并且加大了使用成本，花費時間長。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種乳腺癌基因檢測試劑盒，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種乳腺癌基因檢測試劑盒，包括包裝盒體、襯墊和試管，所述襯墊設置在包裝盒體的內(nèi)部并且襯墊上設置有容器孔，試管包括引物試管、PCR反應液試管、SAP反應液試管、CODE反應液試管、接頭試管、磁珠試管、陽性對照品試管和陰性對照品試管，引物試管、PCR反應液試管、SAP反應液試管、CODE反應液試管、接頭試管、磁珠試管、陽性對照品試管和陰性對照品試管均放置在容器孔中，引物試管的數(shù)量為七個，第一個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.1所述，第一個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.2所述，第二個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.3所述，第二個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.4所述，第三個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.5所述，第三個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.6所述，第四個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.7所述，第四個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.8所述，第五個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.9所述，第五個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.10所述，第六個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.11所述，第六個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.12所述，第七個引物試管中引物的上游引物序列如SEQIDNo.13所述，第七個引物試管中引物的下游引物序列如SEQIDNo.14所述。
作為本發(fā)明進一步的方案： PCR反應液試管、SAP反應液試管、CODE反應液試管、磁珠試管、陽性對照品試管和陰性對照品試管的數(shù)量均為一個，接頭試管的數(shù)量為12的整數(shù)倍。
作為本發(fā)明進一步的方案：包裝盒體上端設置有封蓋。
所述乳腺癌基因檢測試劑盒的使用方法，具體步驟如下：
步驟一，在PCR儀上擴增基因片段，每支引物試管的PCR擴增使用3個反應管，其中1個反應管為被檢測樣本，陽性對照和陰性對照各使用1個反應管，每個試管中總體積6.5ul，其中3ulPCR反應液、1ul引物和2.5ul檢測樣本（基因組DNA、陽性對照和陰性對照）。反應條件為：95℃下進行2分鐘；45個循環(huán)的95℃，30秒，56℃，30秒，72℃，1分鐘；72℃，5分鐘；最終在4℃保存；
步驟二，擴增反應結(jié)束之后，使用SAP反應液對每管產(chǎn)物進行純化，反應條件為：37℃，60分鐘；80℃、20分鐘；最終在4℃保存；
步驟三，SAP反應液反應完成后，使用CODE反應液對每個樣本的產(chǎn)物加不同的接頭，反應條件為：95℃、10分鐘；12個循環(huán)的95℃、15秒，60℃、30秒，72℃、30秒；72℃、3分鐘；最終在4℃保存；
步驟四，CODE反應結(jié)束之后，使用磁珠對產(chǎn)物進行純化，并使用QIAquick? Gel Extraction Kit回收產(chǎn)物中200-500bp的片段，反應結(jié)束后在Hiseq X10儀器上進行測序，根據(jù)得到的測序結(jié)果進行生物信息學分析，判斷BRCA1、BRCA2、PALB2和RECQL基因的外顯子序列是否存在致病突變。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：該產(chǎn)品設計合理，結(jié)構(gòu)簡單，運用多重PCR技術(shù)實現(xiàn)了同時檢測4個乳腺癌相關(guān)基因全部外顯子序列的目的，從而告知被檢者患乳腺癌的風險數(shù)值，提前預防和控制，指導醫(yī)師選擇正確的臨床治療方案，有利于患者進行針對性治療；該產(chǎn)品將同一疾病相關(guān)基因的全部外顯子檢測整合在一個試劑盒內(nèi)，使用更方便而且成本更低，對患乳腺癌風險性的評估也更便捷，更科學。
附圖說明
圖1為乳腺癌基因檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
其中：1-包裝盒體，2-襯墊，3-引物試管，4-PCR反應液試管，5-SAP反應液試管，6-CODE反應液試管，7-接頭試管，8-磁珠試管，9-陽性對照品試管，10-陰性對照品試管。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進一步詳細地說明。
請參閱圖1，一種乳腺癌基因檢測試劑盒，包括包裝盒體1、襯墊2和試管，所述襯墊2設置在包裝盒體1的內(nèi)部并且襯墊2上設置有容器孔，試管包括引物試管3、PCR反應液試管4、SAP反應液試管5、CODE反應液試管6、接頭試管7、磁珠試管8、陽性對照品試管9和陰性對照品試管10，引物試管3、PCR反應液試管4、SAP反應液試管5、CODE反應液試管6、接頭試管7、磁珠試管8、陽性對照品試管9和陰性對照品試管10均放置在容器孔中，引物試管3的數(shù)量為七個。PCR反應液試管4、SAP反應液試管5、CODE反應液試管6、磁珠試管8、陽性對照品試管9和陰性對照品試管10的數(shù)量均為一個，接頭試管7的數(shù)量為12的整數(shù)倍。包裝盒體1上端設置有封蓋。其中PCR反應液的成分包含：KAPA2G Robust 熱啟動DNA聚合酶、dNTP、MgCl2和PCR緩沖液。SAP反應液的成分包含：SAP、SAP反應緩沖液、核酸外切酶1和核酸外切酶1反應緩沖液。CODE反應液的成分包含：KAPA HIFI 緩沖液，KAPA HIFI 熱啟動DNA聚合酶和dNTP。純化產(chǎn)物用的磁珠為：Axygen的AMPure XP beads。對照品分為陽性對照品和陰性對照品，陰性對照品為無菌雙蒸水樣品，陽性對照品為血液DNA樣本。
實施例
血樣總DNA提取試劑盒購于美國Qiagen公司，KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase、dNTP、MgCl2、PCR緩沖液、KAPA HiFi Fidelity buffer、KAPA HiFi Hotstart DNA Polymerase等相關(guān)試劑購于美國Kapa Biosystems公司，SAP和SAP reaction buffer購于美國Affymetrix公司，Exonuclease 1和Exonuclease 1 reaction buffer購于美國NEB公司，磁珠購于美國Axygen公司，9700型PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品。選取30例血液樣本，其中已確定患乳腺癌的為18例。樣本用血樣總DNA提取試劑盒提取總DNA，每一例檢測為21個反應管，每管中總體積6.5ul，其中3ul PCR反應液，1ul引物，每一管引物使用3個反應管，1個反應管中加入2.5ul被檢測DNA，另外2個反應管中加入2.5ul陽性對照和陰性對照，在ABI 9700 PCR儀上進行擴增，反應條件為：95℃、2分鐘；45個循環(huán)的95℃、30秒，56℃、30秒，72℃、1分鐘；72℃、5分鐘；最終在4℃保存。擴增反應結(jié)束之后，使用SAP反應液對每管產(chǎn)物進行純化，反應條件為：37℃、60分鐘；80℃、20分鐘；最終在4℃保存。SAP反應液反應完成后，使用CODE反應液對每個樣本的產(chǎn)物加不同的接頭，反應條件為：95℃、10分鐘；12個循環(huán)的95℃、15秒，60℃、30秒，72℃、30秒；72℃、3分鐘；最終在4℃保存。CODE反應結(jié)束之后，使用磁珠對產(chǎn)物進行純化，并使用QIAquick? Gel Extraction Kit回收產(chǎn)物中200-500bp的片段。反應結(jié)束后在Hiseq X10儀器上進行測序。根據(jù)得到的測序結(jié)果進行生物信息學分析，判斷BRCA1、BRCA2、PALB2、和RECQL基因的外顯子序列是否存在致病突變即可。
該產(chǎn)品設計合理，結(jié)構(gòu)簡單，運用多重PCR技術(shù)實現(xiàn)了同時檢測4個乳腺癌相關(guān)基因全部外顯子序列的目的，從而告知被檢者患乳腺癌的風險數(shù)值，提前預防和控制，指導醫(yī)師選擇正確的臨床治療方案，有利于患者進行針對性治療；該產(chǎn)品將同一疾病相關(guān)基因的全部外顯子檢測整合在一個試劑盒內(nèi)，使用更方便而且成本更低，對患乳腺癌風險性的評估也更便捷，更科學。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應將權(quán)利要求中的任何附圖標記視為限制所涉及的權(quán)利要求。
此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。
<110> 上海愛他基因科技有限公司
<120> 一種檢測乳腺癌易感基因的試劑盒
<130> 2016
<160> 14
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1536
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管1上游引物序列
<400> 1
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTGGGCAC GCTAGAGGAG ACAA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAGGTTT GTTCATTACT GCTTATGACT T 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAAATCT GTTTTTCTGA ATCTGTTTAC CA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACCAGCTG ACAGAGACAA AGATG 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTCCTT CTCCTCACAG CTGAG 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCTCTGC GTAATTCTTC ACAAAA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACACTTAAT AATGGTTAGC ATGGCAAAGT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCCATCTC CAGGGTTAAA GGAC 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGCTCCT GGCATGTGTT TCTA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCGTCTTT GTATGCTGGC TTTG 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATTTGCT GAGCCTCTCA CCTT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTTGTC CAGCCAGCAA ATGAG 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACACTTGG CCCTGTCACT TTTTA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCGGGAGA GCTGACTTTA GTTA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTGCTTC CAGGCTAAGA CTCTT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTGTAGTC GCCCTGGTGA AATT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTCTTGC TTCTGCAAAT GATCTTGA 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCACACA AAATAACTGC AAAACCGT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGGTATG ATGACAAAGC ACTTCTTCA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAACATA CATACCAGGT CTGAAATCAT GT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCTAGGAT CAATAGGCTA TAACATATCA CC 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCTCCAT ATGCAAGTAA GTGTCAAACT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTAATTT GAAGACTACA GAACACAGGG AA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGGAGGAT TATCTCAAAG ATAGGGCAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTTCTAT GGAAGATATA GACCTAACCT GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTCTAACT CTCCGGTGTT TGACT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAATGAA TGACTGTATT GAGTTAATGA TGAC 54
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTTGTT GAATTGTACT TCTGGTTTTA TAACC 55
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAAAGAT TGGACATCCC TGATCTACAT ATTT 54
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAACAAATG GCAGCTGCTA ATAAACAG 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAAAAGA TTGGACATCC TTGATCTACA T 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAATGGCAT ATACATGCAT AAACCATCTT TAATT 55
<210> 2
<211> 1548
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管1下游引物序列引物
<400> 2
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTGGGAG TCCGCCTATC A 41
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGCTATTC CTACCATTCT GATGAGGTAT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCCTGTAT GCAAAAAACT GGAGAA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTGCCAT AGGATAACAT TTAGGTGCT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTTGGA CCTAGGTTGA TTGCAGA 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCTTAGAC AGACACTCGG TAGCA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCTAAATG GAGCCCAGAT GGAGA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTCTGACT CCACCTTTCC ACTTG 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGAAGTT GCTGGACGAA CTTG 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTACCTGAT GAAGACTTTG GACCTCTTAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGATCAAC AAGTAGAAGT CATGACGTTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTTTGGGA ACATGGTTTT GACCTTTTT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTAGCCTGT CGATTGTTAA CAGGTC 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCCAATTG CCAGAGGAAA GTAGC 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACTGTCTC TACAGATAAC CTCCTTGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGTCTTTG GCACTGATTC ACTCA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCTTGTT TATGTCCAGA CAGACTTATT TT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCACACTT CCTCGTGAAG ATCT 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTTCAGAC CACTTCAGCT TGAAACTA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTAGTAT TTCAGTCTGC TAGCTTAGTT TT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTTGATGG CTCAACATTT TGATGAAGTA T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGAGGTTT GTTATCCATC ATTCAATGAG TA 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGCAGTGT TTAGAGGATT CTGATGC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCAGAAGC TTTATGAGAT GGTATCATAC T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAAACCAT CTTCCAGGAA TATGCCAT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAATAAC TCGTAATGTT GTTCGGTGA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGTCTACT AGAGTACATT TGGCTAAGTA GATAA 55
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCACATAA AATATGCTAA CACTGACGAT AG 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATTGCAAG AAAAATCTCA TGTTTTAAGA AAGT 54
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTTTTTGT TTCATCCTTC CCTTTCCT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAACTTTT GAGAATGTTT GAAAATTAGA GATCA 55
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCAAGGT GCTTGCTTTG TTTTT 45
<210> 3
<211> 1492
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管2上游引物序列
<400> 3
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCTTCACA ACAACCCTGT AAAATTAGAG G 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGCACAGT GCCTTTCAGA ATGT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGGTTTTT CTGAGCAGGA CTTCA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTGGGAAA TGAATAATAA AGCAGGCAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGCAAATG GCTGCAAAGA TCTC 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACGTGAGC ACCACGCTAT TT 42
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACGGCCAAT TAAATCCACC ATTCG 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGAATAT GACAGAAAAG CATCCCAT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAACTCA ACTGCAGGTA AAGC 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCACTTTT TGAAAGTTAT CTCTGTCTCC AA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGATACT GCTGTATTAG AAAGTGTGCA A 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAATCAT ATCAAAGAAA CACGTCAAAC CA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGACTGAG TCTTTCAAAT GAGCAAGTT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGTTAAAA ATCAATCAAT GCTTTTCTTA CCCT 54
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACGTGCTGA TATTTGTGTG AGGTGA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCTTGAC ATCCAAATGA CTCTGAATGA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGCAGTT GGCCACTTTT ACTTA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTGATTT CTTCCTGTTC CTTTAGTCTT TT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAAGATC AGTGGTGCTA CCAT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGATTTGA GTCCTACATA CCTGCA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAGAAAT ACCTCCTTTC CAGCCAT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGTAATA CAGGTTGATC ATCCCAAATC C 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGTTATC GCACATTTTG TTACATGC 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCGGCAGG TGAAGAATCA TATTCAT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGTTATAA AAAGGTATGT GGCTTACTTG CT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTTACTT GTGATTTAGC TTTGGAGCAA 50
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ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAGTATA AGCTAGGCAT CCACA 45
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ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGGGTTT TACATAAAAA TTTTTCCCTT GTTTT 55
<210> 4
<211> 1532
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管2下游引物序列
<400> 4
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCGGAGAAG GGCTACCTAG AGAC 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCCAGATC TTTATTTTTC CTGACATACT CT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGATTGTCT GTTTTGTTGG GTTTTGTTAC TA 52
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TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCATACTTA TGCTTTGCAT AAAACAGCAC T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGCTGCTC TTTTCGTTCT GTC 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGAGATT CCGGCTACTT CCG 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGTTTTCC GTGATTCCTT CAAAAGC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAAAACGT GAATGGTTTG CATCTGA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCACTTGG ATGGTACTCA TTCATTTACT TT 52
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TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTATGTAGA TCAAGGATGT CCAATCTTTT GG 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCATTCTTT TCCATGCAGG AGGATTG 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTACTCCCG AGTAGCGGAA AGAT 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTAAGAAAA GAAAAATCGA TGATGCCTGA TATGA 55
<210> 5
<211> 2662
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管3上游引物序列
<400> 5
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGCAAACT GAAAAACCTC TTCTTACAAC 50
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ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCTGCAAC TTGTTACACA AATCAGT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCATTCTA GGACTTGCCC CTTTC 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTAGTAG AGACAGGGTT TCTCCATT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAATCAAAG TGTTTGTTCC AATACAGCAG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACACCACAA AGAGATAAGT CAGGTATGAT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTGCTGC CAGTAGAAAT TCTCATAAC 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTAACTAA ATAGGAAAAT ACCAGCTTCA TAGAC 55
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCCAATA CCTAAGTTTG AATCCATGCT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGGGTCG TCAGACACCA AAA 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGGGAGAT ACATATGGAT ACACTCACAA A 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATACTTT GCAATGAAGC AGAAAACAAG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGTAGCCA GGACAGTAGA AGGAC 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGAGTAAT AAACTGCTGT TCTCATGCT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATTTGTT TCTCCGGCTG CAC 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTGTCGCC AAAGAGTCAT TTAATAAAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGGTAAAT TCATCTGCTT TCTCTGGAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGGACCC CATATAGCAC AGGTA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATTCTGC TCCGTTTGGT TAGTTC 46
<210> 6
<211> 2649
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管3下游引物序列
<400> 6
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCATTTTAG TTTTCACTGT GCGAAGACTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTGGATCA CCTGAGGTCA GAAT 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCGCTTG AACTAGTAGT CAGTAGA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCAATGT TTAGAAACGC CATACGTATA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCATGCAT CTCAGGTTTG TTCTGA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAACTGT CAGTCTGCCA TTCTTTAA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCCAAAGA CGGTACAACT TCCTT 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAAGATGG CTGAAAGTCT GGATCT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTACTAGGT GATTTCAATT CCTGTGCTA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCGTACTGG GTTTTTAGCA AGCATT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCGCGTTGA AGAAGTACAA AATGTCA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCAACAT TCTCTGCCCA CTC 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAACCGAG ATCACGGGTG AC 42
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACTGAGGC TCTTTAGCTT CTTAGGA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTCTCCTC TGCAAGAACA TAAACCA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGTCAGGA AAGAATCCAA GTTTGGTATA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTTCTTCA GAGTCTGGAT TGACAGT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTCTGCA GAAGTTTCCT CACTAATATT C 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCATGGCTA TTTGCCTTTT GAGTATTCTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCGTGCCAA AAGACTTCTA CAGAGT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAATGTTAA ATTCAAAGTC TCTAAGACTT TGTTC 55
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCATTGA AAGTCTCTTT AGGTGATTCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTGTGCT AAAAATCCCA CAAGTATT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGACAGAG GTACCTGAAT CAGCA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTCCTTGG ATAACACTAA ATAGCAGCAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGCAGTTT AGAATCTGTC AGTTCATCAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTTTTGG CTAGGTGTTA AATTATGGTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGCCAGT TTCCATATGA TCCATCTATA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCACAGT CTCAATAGAA ACAAGGTTTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTTGAAG ATTTTTCCAA AGTCAGATGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAACCTGAA TTATCACTAT CAGAACAAAG CA 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCACAAACG ATTTTACCAC TGGCT 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTTTTTGG ATCATTTTCA CACTGTCCTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGAAGAC CCCAAAGATC TCATGTTA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCCTGTG ATTATTCAAG GCTCTT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAGAAAT GGGAAATGAG AACATTCCAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAAATCA TCAGGTGGTG AACAGAA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGACCATCA AATATTCCTT CTCTAAGCCA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGAAAAC ACAGAAAAAT CTCCAGCAAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCGTTGCC TTTGTTTCTT CTTAATTC 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAGGAGCT CATTAAGGTT GTTGATGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGGTAGAA TATTTACCTT CACAAACTTT GGT 53
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGAGCTTT CGCAACTTCC AAAAAA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGTTGAAT ATCTGTTTTT CAACAAGTAC ATTT 54
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTTGTTT TCTTCACAGT GCAGT 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACAATTAT CAACCTCATC TGCTCTTTCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAGAAAGT GTGAGCAGGG AGAAG 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAACAGAA TATACGATGG CCTCCA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTGTTGGA CAGTGTAGCA CTCTA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGCTGCT TGTGAATTTT CTGAGAC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAACCAGAC AAAAGAGCTT GGGTAT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCCTGGAA GGTCACTAGT TGATTTC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTCTAGAC GTAGGTGAAT AGTGAAGACT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGTCCTAC TTTGACACTT TGAATGCTC 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAATAAAT TAAAGCGTAA AAGGAGACCT ACA 53
<210> 7
<211> 2657
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管4上游引物序列
<400> 7
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTTTTTG TGTGTGTTTA TTTTGTGTAG CTG 53
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGTGTTTG TATTTGCAGT CAAGTCTTC 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGCTTTCT TGATAAAATC CTCAGGATGA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTGGGTT GATGATGTTC AGTATTTGTT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTATCAGG TAGGTGTCCA GCTC 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGTTTTAC CAAGGAAGGA TTTTCGG 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACCCTTTC TGTTGAAGCT GTCAA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTCAGGA AGGAATGTTC CCAATAGTAG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGAGGGA GACTGTGTGT AAT 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCCATTGC ATCTTTCTCA TCTTTCTCC 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCTTTGA GAGTGGAAGT GACAA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGATCTTT CAGTTTGCAA AACCCTTTC 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGGTGTG GATCCAAAGC TTATTTCTA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAGCTGA TTCTCTGTCA TGCCT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCCCTTCT TTGGGTGTTT TATGCT 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAATGAA GCGGCCCATC TCT 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAGCCCCT TCACTTCAGC AA 42
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGAAAGAA AGTGTCCCAG TTGGT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGGCTCA GATACAAACA CAGCTATT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGTTATTA CGGCTAATTG TGCTCACT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCAGTTA GATCCTCCCC TCTTA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTCTTCAG AATGCCAGAG ATATACAGG 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGACTCT TCCAGCTGTT GCT 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTCAGATG TTATTTTCCA AGCAGGATTT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGGGAAGC TTCATAAGTC AGTCTCA 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTTCTTC ATTTCAGGGT ATCAAAAAGT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCAATAGC TGACGAAGAA CTTGCATT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATCACTTC TGGAAAACCA CTCATTAACT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGTCACAG GGTTATTTCA GTGAAGA 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGTAGATG TGCTTTTTGA TGTCTGACAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATCCATA GGGACTGACA GGTG 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAGAATC CAAATCAGGC CTTCTT 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAGTGGT ATGTGGGAGT TTGTT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCTCTGAG AAAGAATGAA ATGGAGTTGG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACACAAAGT TAAGGGAGTG TTAGAGGAAT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTGAGCAT CTGTTACATT CACTGAAAAT TG 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAAAAAG CTGTGAAACT GTTTAGTGA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTAACAGT ACTCGGCCTG CT 42
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTCTGTG AGTCAGACTT CATTACTTGA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTCTTGT GCTGACTTAC CAGATG 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCACCTGG TCAAGAATTT CTGTCTAAA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGAGGGAA ACACTCAGAT TAAAGAAGAT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGCTTTTG AAGCACCACT TACATTTG 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAATTTG TCTGTCACTG GTTAAAACT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAATTCA GTACAATTAG GTGGGCTTA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCCAAAG TGTAAAGAAA TGCAGAATT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAGCAACC CAAGTGTCAA TTAAAAAA 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGTAGGGC CACCTGCATT TA 42
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTTGAAA CAGAAGCAGT AGAAATTGCT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGAGCTGT TGCCACCTGA AAA 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGTGGGAT ACATACTACT GAATGCAAAG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTGACTTT TGGACTTTGT TTCTTTAAGG A 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACGCCTCAT GTGGTTTTAT GCAG 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCAAAGC TGCCTACCAC AAA 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGACTGAC CGAAAAATAA AATGCCAAG 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATTTCACC ATCATCTAAC AGGTCATCAG 50
<210> 8
<211> 2684
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管4下游引物序列
<400> 8
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTCCTTTT CCAGTCCATA AACTTTCCTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTTCTCA GTCTACTAGG CATAGCA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAAAACCT ATCGGAAGAA GGCAAG 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGTTGGT TGATTTCCAC CTCCA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAGGAGA ATGAATTGAC ACTAATCTCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCATACAT AGGGTTTCTC TTGGTTTCT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCAGCTCG TGTTGGCAAC ATA 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAGGCTC TTAGCCAAAA TATTAGCA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACTTTGAA GTCATCTGGG CTGAG 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTACCGGT AGTTGTTGAT ACTGAGTT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGTCACA TGAAGAAATA TGCAATAGGG 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCACCTGGT TCTTTTACTA AGTGTTCAAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAAACCTT AACCATACTG CCGTATATGA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGAACAT CCTTGGAAGT AGGAGTT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCAAAGCA CGAACTTGCT GT 42
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGAAGGAA GCTTCTCTTT CTCTTATCCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACTGGTAG CTCCAACTAA TCATAAGAGA T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGTTTTTC ACTTTGTCCA AAGATTCCTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAACAGTA CCCGTTCCCT TGA 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAACGAAAC TGGACTCATT ACTCCAAATA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATGACT GATTTTTACC AAGAGTGCAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAGCCATC AGTATTGTAG ACAAACACAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATTGGT GGCGATGGTT TTCT 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGCATTC CTCAGAAGTG GTCTTT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACTTTGGA AAAGACTTGC TTGGTACTAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGGCCAG CTTCCATTAT CAATTAAATT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAACTCTC CTGTTCTTTG ATCAGAGAT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGATGGGCT GGAAGTAAGG AAACA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACACGGTT GTGACATCCC TT 42
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGACCAGGT TTAGAGACTT TCTCAAAGG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGTAGAGG GCCTGGGTTA AGTA 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTATTTC CTTGATACTG GACTGTCA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGATTTGT AAATCTCAGG GCAAAGGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGATCAAGG AACCTGTCTC CACAAA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCTGAAGA ACCACCTTCA ACATTTAAGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCGGCTCT AAAGAAACAT GATGCATAAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAACAAAA GTGCCAGTAG TCATTTCAA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGACCGAAA CTCCATCTCA AACAAAC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTCTTCAA TACTGGCTCA ATACCAGAAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTCTAATG TGTTAAAGTT CATTGGAACA GAAA 54
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTAACACA CTGTTCAACT CTGTGAAAAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCACTTGC AGTCTGAAAA AATGTATCA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCATGTT TGAGTGACCT GATTCT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTTATGTT CAGATTCTTC TGCAGGTTCA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAATCACT CGAAAAAGAA TCTGCTTTCA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCAGGACT TTTTGCTGTT TCTTTTTCTA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAGCTACC TCCAAAACTG TGATTTGA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAATATC CTCTGAATCA TCCAATGCC 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGCAACA CGAAAGGTAA AAATGAAC 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCCTTTCA TTAGCTACTT GGAAGACAAA A 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCACAGCAA GTTGCAGCGT TTA 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTGGGACA TGAAGTTAAC CACAGT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCTGAGCT GTGTGCTAGA GGTA 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGATACAAC CTCAAAAGAC GTCTGTCT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATGTGG TCTTTGCAGC TATTTACTTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGGTTTTG CAACCTGAGG TCTATAA 47
<210> 9
<211> 2686
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管5上游引物序列
<400> 9
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTATGAAA AGCACCTTAG GAGGAACA 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTTCTTC AGAAGCTCCA CCCT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGTTTCCT AGGCACAATA AAAGATCGAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACAGGATT TGGAAAAACA TCAGGGAAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAATCCAG ACTCTGAAGA ACTTTTCTCA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTAACAT ACAGTTAGCA GCGACA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTTAAAC AGTGGAATTC TAGAGTCACA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTGTAAG TGAAAAAAAT AATAAATGCC AACTG 55
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAACGCAA GACAAGTGTT TTCTGAAA 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAAAAGG ACCCCATATA GCACAG 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCATACAG CTAGCGGGAA AAAAGTTAAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTGGAGCT AGGTCCTTAC TCTTCA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATTTCTTC CTCTAGGTTA TTAATTGACA ATACC 55
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGATCATG AAAATGCCAG CACTCT 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCGTTATA CCTTTGCCCT GAGA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAAAACC TGAGACCCTT ACCCAATT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGTTCACT TTCTTCCATT TCTATGCTTG T 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTCAGAAA TGGAAAAAAC CTGCAGTAAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCCCGAAA ATGAGGAAAT GGTTTTG 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTAACTG CTACTAAAAC GGAGCAAAAT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTGCATC GGCATGTTTG ACAAT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGAACTTT CAATGCAGAG GTTGAAG 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAAACCT GAGCTTTCGC CAAA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGCAGAGT CTTTTCAGTT TCACACT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATTATCTC AGACTGAAAC GACGTTGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTGAATG AAATGTCACT GATTCTTTCT T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTTAAAAA CTTGTTGTCA CTGTTGTGCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTCTTAAA GGATAGAAAA AGGGCCACTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCAGGCCG AATGGTGGAT T 41
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAGCCTTC AAATGATGAA AATTATCCTT GT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGGTAATG CAGGCAGACA TTATACA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCTCCTA AGACATGCTA TGATGAATAA GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTTGCTC ACAGAAGGAG GACT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCCTGGCC TGATACAATT AACTTGAAT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTGAAGC CCCAGAATCT CTTATGTTAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACACTGTGC CCAAACACTA CCT 43
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAGCCACA TAACACATTC AAACTTACTT G 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTGGTGGT ATACGATATG GGTTTTGTAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAATGGG CAGGACTCTT AGGT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTGCTGC TTATAGGTTC AGCTTTC 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACCTTGTT TCTATTGAGA CTGTGGTG 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGTACTG TATCTACCCA CTCTCTTT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGATTTTCA GTTACATGGC TTAAGTTGGG 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTCCCTC TGCGTGTTCT CATAA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAACCAAA GTCTTTGTTC CACCTTTTAA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGGAAAGT GGTGCATTGA TGGA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAACTAGTT TTTGCCAGTT TTTTAAAATA ACCT 54
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGATGCTT ACAATTACTT CCAGGAAGA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACCATATT TACCATCACG TGCACT 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAACGCGAA GAGCAGATAA ATCCA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCAAACGA AAATTATGGC AGGTTGTT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTGCTGAA CAAAAGGAAC AAGGTT 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACCACGTC ATAGAAAGTA ATTGTGCAA 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTGGAAGG CTAGGATTGA CAAATTCTTT A 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCCAAAAG GAAGTCTGTT TCCACA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAGTGCC TGAAAACCAG ATGAC 45
<210> 10
<211> 2509
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管5下游引物序列
<400> 10
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCGGGCTTG GAAGAAAATA ATCAAGAAG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGGTTTGC CTAAATTCCT AGTTTGTAGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGAAGTGT TAACTTCTTA ACGTTAGTGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTTGGTTC CACTTCAGAT ACAAATGAGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTAGAGTT CTTGAAAATG GGTTCGTTT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCGTGGCT GGTAAATCTG AAATAAAATT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTCAATG AAATTATGTC AGAAACACAG A 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATCAGTAA ATAGCAAGTC CGTTTCATCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAAACTTG CTTTCCACTT GCTGTA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCCTACTT TGACACTTTG AATGCTCTTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTACTTTA GGGTCTTTGC CCATTGA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGCAGGA AATGGCTGAA CTAGA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAAAGGG TCAACAAAAG AATGTCCAT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGCAACA GCTCAACGTT TTTATAATTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCTCAGC TCCTAGACTT TCAGA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGTCAAGT TTCTCTTCAG GAGGAAAAG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCTCGTTA CTGGAAGTTA GCACTCT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACGTTTTT AGGTGAAGCC TGTTCT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGCTGAA AAGACATAGT TTATAACACT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGCAATTC TTCTGGTTTC TGATCAAAGA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTTGGGAT CATTTGCATG CAGTATATG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACAGAGAC CAGAACTTTG TAATTCAACA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAGTAAA TTGTAACATT CGTCTGACAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAAGAAA GAGGGATGAG GGAATACA 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGTGCAAC ATAAGTACTA ATGTGTGGT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGGGCTG AACAGTTAAT TAGTTCTGA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTTCATG TTCTTCAAAT TCCTCCTGAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTCCCAA AAACTGCACA AAAACT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAACATT TCCTCAGAAT TGTCCCAAA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAACTTGA GGCCTTATGT TGACT 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGCCAGTT GATAATGCCA AATGTAGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGGCTTGC TCAGTTTCTT TTGATTATCT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGCAGTT CAAAAGACTC CTGAAAT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTAAGGC TGAATTTTCA ATGACTGAAT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGGTCATT TGACAGTTCT GCATACAT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGCTGATG TATTGGACGT TCTAAATGAG 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATTCCTGC ACTAATGTGT TCATTCT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAACGGAA ATATCTAACT GAAAGGCAAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTCTTTT GTGAATCGCT GACC 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAAACAAA CTCCCACATA CCACTG 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGATGAAA ACATTCAAGC AGAACTAGGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACAGCTTC TCACCTTGAA TAATCATCAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGACGTTGT CATTAGTTCT TTGGTTTGTA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGTTTCCA AACTAACATC ACAAGGTGA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCATTAGT AGTGGATTTT GCTTCTCTG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAAGGTTGA TAATCACTTG CTGAGTGT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGCAGAA ACCTACAACT CATGGA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACAACTCC TTGGTGGCTG AAAT 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTAAACC CCACTTCATT TTCATCTGTT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCACAAAT ACTCATGCCA GCTC 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAAGTTCC TCAACGCAAA TATCTTCATT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGTGAATA CCCTATAAGC CAGAATCCA 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTATGGGC CCTTCACCAA CAT 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTGCAGCT TCTCTTTGAT TTGTGTTT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTTTCAC CCATACACAT TTGGCT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTCTTCA TCTCTCTTAT TTACCACTGT 50
<210> 11
<211> 1245
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管6上游引物序列
<400> 11
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGGAGAAC CCTCAATCAA AAGAAACTTA TT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGATTTG CTTTGTTTTA TTTTAGTCCT GT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAATAGT AGATGTGCTT TTTGATGTCT GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCTGCAG AGGTACATCC AATAAGTTTA TC 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTACCT CAGTCACATA ATAAGGAATG CA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGATGAAT GGTTTTATAG GAACGCTATG T 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAATCAA AGTGTTTGTT CCAATACAGC A 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACACTGAAT TATTGTACTG TTTCAGGAAG GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCAATAAA ACTAGTAGTG CAGATACCCA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATTTGGAG TAATGAGTCC AGTTTCGTT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAATGGCAT ATACATGCAT AAACCATCTT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTTTAAC AGGATTTGGA AAAACATCAG G 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCACACCT GGCTACTTTT GTGTT 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTGAAGCC TCTGAAAGTG GACT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAACCCAT TTTCAAGAAC TCTACCATG 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAGCTTGTG TTGAAATTGT AAATACCTTG G 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATGGACAT TCTAAGTTAT GAGGAAACAG AC 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAGCCTTA GCTTTTTACA CAAGTTGT 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAAATAT GTGGAGGCCC AACAA 45
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATCCAGGAA GACTTTGTTT ATAGACCTCA 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAATTCGAG TTCCATATTG CTTATACTGC T 51
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTAATTT GAAGACTACA GAACACAGGG AA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCAGTGA TGGAGGAAAT GTTGGTT 47
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACCCATTGC AGCACAACTA AGGA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACATAAAAC TCTTTCCAGA ATGTTGTTAA GTC 53
<210> 12
<211> 1226
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管6下游引物序列
<400> 12
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTATAAAGA GGTCCTTGAT TAGGCACAGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATGAAACA AACTCCCACA TACCACT 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGTTTAGA GACTTTCTCA AAGGCTTAGA T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTACTTGAA TCACTGCCAT CAAATTCTAA GT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGGTTCTAA GCAACACTGT GACGTA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGTTGTG AGATTATCTT TTCATGGCTA TT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATTGGT GGCGATGGTT TTCTC 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGGCTCT TAGCCAAAAT ATTAGCATAA AA 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATGACT GATTTTTACC AAGAGTGCAA 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAAGAGG AATGTGCAAC ATTCTCTG 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAACTGAAT AGCTGGATTT TTACCAAGGT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAGCGTTT GCTTCATGGA AAATTTTT 48
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATCTCTGG CATTCTGAAG ACTTGTAATT AAA 53
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCATTTGCT TCAAACTGGG CTGAA 45
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGAAGCT ACCTCCAAAA CTGTGA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCCTTTTG GCTAGGTGTT AAATTATGG 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCACTTTGT CCAAAGATTC CTTTGCA 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAATAGCT GTTAGACATG CTACTGTTAC T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTGTTGCTA TTCTTTGTCT AACACCAAAA A 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGAAAGA GAAATGGGAA ATGAGAACAT TC 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCCTGAGG ATTTTATCAA GAAAGCAGAT TT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGCAGTGT TTAGAGGATT CTGATGC 47
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTGGTGGC TCAGCTACTT GAG 43
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTAACACA CTGTTCAACT CTGTGAAAAT G 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTACCATCT TCAACCTCTG CATTGAAA 48
<210> 13
<211> 1106
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管7上游引物序列
<400> 13
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGACATTG AAGACTGACT TTACTCTTTC AA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTTTTAT TCTGCTCATG GCACAA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATCATGGA AAATTTGTGC ATTGTTAAGG AA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGAAAAT GTTCTTGGGT GTCA 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATAGGAAA ATACCAGCTT CATAGACAAA GG 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGATAGAT TTAATTACAA GTCTTCAGAA TGCCA 55
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAAAAAATAC CGAAAGACCA AAAATCAGAA CT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAGATAA CAAATATACT GCTGCCAGTA GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACTTCCTTT ATTTCACCAT CATCTAACAG GT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGGAATCA GGCTTTACTA GAAGAACA 48
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACGCTGATG AATGTGAAAA ATCTAAAAAC CA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATGAGGAAA CAGTGGTAAA TAAGAGAGAT GA 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGCTGATTT CTGTTGTATG CTTGTACTG 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAAATGGG CAGGACTCTT AGGT 44
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGAAAAATA TTAGTGTCGC CAAAGAGTCA TT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGGTTTTCA TACAGCTAGC GGGAAA 46
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAATGACAAA AATCATCTCT CCGAAAAACA AG 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTCTCTAA TGTTATTACG GCTAATTGTG CT 52
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAGTTCCCTG ATTTATCATT TCAGGAGTCT 50
ACACTGACGA CATGGTTCTA CATTTTAAGG CAGTTCTAGA AGAATGAAAA CTCT 54
ACACTGACGA CATGGTTCTA CAACTTACCA GATGGGACAC TCTAAGATT 49
ACACTGACGA CATGGTTCTA CACAACCAAA GTCTTTGTTC CACCTTTTA 49
<210> 14
<211> 1102
<212> DNA
<213> 人工序列
<223>管7下游引物序列
<400> 14
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCTTTTTG AAGCCTTTAA GGATTTTTCT TG 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAACAAAA GTGCCAGTAG TCATTTCAAT AT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTCTCCT CTGTCATTCT TCCTGT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATGTGTTT ATGACAAGTT ACACATCAAA ACC 53
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGCCACAGT AGATGCTCAG TAAATATTTC TA 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCTGTCAT AAAAGCCATC AGTATTGTAG AC 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCTAAACA ATCATGTATA CAGATGATGC CT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTTGAGCTT TCGCAACTTC CAAAAA 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCCAAAATT GAATGCTATG CTTAGATTAG GG 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAATGTGG TCTTTGCAGC TATTTACTT 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTATTTTCTC CATCTGGGCT CCATTT 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCCTCCTT CTGTGAGCAA ACAG 44
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGTAATCGG CTCTAAAGAA ACATGATGC 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCTGAGGCT TGCTCAGTTT CTTTTG 46
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAACTGGG ACACTTTCTT TCAGTATTTT G 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTACCACAGT CTCAATAGAA ACAAGGTTTT TA 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTCAAGTTCC TCAACGCAAA TATCTTCATT 50
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAGGCTCT AGGTTTTGTC TATCATCTC 49
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTAGAGTTCA CTCCAAATCA GTAGAGAGTA AT 52
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTTCATACCT GTATAGGGTA TGCTCTTTGA ATAAT 55
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGACGTTGT CATTAGTTCT TTGGTTTGTA T 51
TACGGTAGCA GAGACTTGGT CTGAAAGGCA AAAATTCATC ACACAAATTG T 51