本發(fā)明屬于重金屬污染土壤修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤中土著微生物生長抑制作用的評價(jià)方法。

背景技術(shù)：

因重金屬污染土壤具有隱蔽性、長期性、很強(qiáng)的富集性和不可逆性等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響土壤環(huán)境安全及人體健康，故而重金屬污染的土壤修復(fù)治理工作受到廣泛的關(guān)注。目前比較常用的治理技術(shù)為固化/穩(wěn)定化方法，其主要原理為通過向被重金屬污染的土壤中加入重金屬捕集劑，使其中的重金屬離子形成沉淀或轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的形態(tài)，達(dá)到降低重金屬污染危害的目的。

硫脲醛樹脂作為一種高效、廉價(jià)的新型重金屬捕集劑，在土壤固化/穩(wěn)定化修復(fù)方面具有增容小、不破壞土壤理化性質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，但其對于被修復(fù)農(nóng)田土壤環(huán)境屬于外來物質(zhì)。向被污染的農(nóng)田土壤介質(zhì)中施用硫脲醛樹脂，可能會(huì)對農(nóng)田土壤微環(huán)境產(chǎn)生影響，具體體現(xiàn)為抑制土壤中微生物的生長，破壞土壤微環(huán)境原有的微生物種群結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響農(nóng)田土壤生態(tài)系統(tǒng)。目前報(bào)道的關(guān)于固化/穩(wěn)定化技術(shù)中新型重金屬捕集劑的文獻(xiàn)主要集中在對捕集劑穩(wěn)定化效率的研究，缺少關(guān)于新型重金屬捕集劑對土壤中土著微生物生長抑制作用的評價(jià)方法，在工程應(yīng)用中也缺少簡便精確的方法確定重金屬捕集劑的合理濃度，在修復(fù)重金屬污染土壤的同時(shí)，兼顧農(nóng)田土壤微環(huán)境的生態(tài)安全。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于評價(jià)硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤微生物生長抑制作用的測定方法，用于確定硫脲醛樹脂用作土壤重金屬捕集劑合理的用量范圍。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種評價(jià)硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤微生物生長抑制作用的方法，用于確定硫脲醛樹脂用作重金屬捕集劑時(shí)的合理濃度；其特征在于：配置硫脲醛樹脂梯度濃度的微生物液體培養(yǎng)基并滅菌，以蒸餾水替代硫脲醛樹脂設(shè)置空白對照，在無菌條件下，將從污染農(nóng)田土壤中富集得到的微生物接種至上述滅菌培養(yǎng)基，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)3～5天后測定其OD 600值，以實(shí)驗(yàn)組和對照組吸光度值的變化率來反映硫脲醛樹脂對土壤微生物的生長抑制作用。

具體步驟如下：

1)富集受污染農(nóng)田土壤中的土著微生物：從受污染農(nóng)田中取土壤置于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基所含營養(yǎng)物質(zhì)能滿足微生物生長所需；根據(jù)培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)濃度，每2～3天更換一次培養(yǎng)基，并從中棄去20～40g土壤，10～15天后丟棄全部土壤完成微生物在液體培養(yǎng)基中的富集，用于后續(xù)步驟中的菌液接種；

2)將待測定的硫脲醛樹脂按梯度濃度稀釋于培養(yǎng)皿中并滅菌，將微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以粉末狀加入稀釋液中，并以蒸餾水替代硫脲醛樹脂設(shè)置空白對照組；

3)取富集后的菌懸液接種至培養(yǎng)皿中置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度控制在25～37℃；培養(yǎng)3～5天之后取出菌液，在光電比色計(jì)600nm下測定每份硫脲醛樹脂稀釋樣中菌液的濁度，通過與空白組對照，以實(shí)驗(yàn)組和空白組吸光度值的變化率來計(jì)算硫脲醛樹脂對微生物生長的抑制率，確定硫脲醛樹脂用作土壤重金屬捕集劑合理的用量范圍。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

1、本發(fā)明適用于硫脲醛樹脂作為新型重金屬捕集劑施用于環(huán)境前的生態(tài)安全評估，對污染農(nóng)田土壤的土著微生物進(jìn)行富集作為檢測用菌，測定結(jié)果的針對性更強(qiáng)。

2、通常情況下，固體培養(yǎng)基培養(yǎng)只能通過微生物細(xì)胞數(shù)目和聚集形式的變化判斷微生物對待測物質(zhì)的易感性，即定性檢測。而本發(fā)明方法采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，并使用紫外分光光度法檢測，達(dá)到了定性和定量檢測的目的，相比于固體條件，液體條件更適于微生物生長，故在液體條件下測定硫脲醛樹脂對微生物的抑制性更可靠。

附圖說明

圖1是本方法測定某種硫脲醛樹脂對微生物生長抑制作用的結(jié)果。

具體實(shí)施方式

測定硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤微生物生長抑制作用的方法實(shí)施實(shí)例，以下實(shí)施方式和實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1：

富集受污染農(nóng)田中的土著微生物，取100g受污染農(nóng)田土壤置于液體培養(yǎng)基中，富集培養(yǎng)使用m9液體培養(yǎng)基，每3天更換一次培養(yǎng)基并丟棄20g土壤，15天后丟棄全部土壤完成微生物在液體培養(yǎng)基中的富集，以備用于接種；將待測定的硫脲醛樹脂按1:1-1:8(1:1、1:2、1:3……1:8)的梯度比例稀釋于培養(yǎng)皿中，將微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以粉末狀加入稀釋液中，并以蒸餾水替代硫脲醛樹脂設(shè)置空白對照(加入的營養(yǎng)物質(zhì)與富集時(shí)所使用的營養(yǎng)物質(zhì)相同)；取富集后的菌懸液接種至培養(yǎng)皿中，置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后取出菌液，在光電比色計(jì)600nm下測定每份硫脲醛樹脂稀釋樣中菌液的濁度，通過與空白組對照，以實(shí)驗(yàn)組和空白組吸光度值的變化率來計(jì)算硫脲醛樹脂對微生物生長的抑制率。

實(shí)施例2：

富集受污染農(nóng)田中的土著微生物，取200g受污染農(nóng)田土壤置于液體培養(yǎng)基中，富集培養(yǎng)使用LB(Luria-Bertani)液體培養(yǎng)基，每2天更換一次培養(yǎng)基并丟棄40g土壤，10天后丟棄全部土壤完成微生物在液體培養(yǎng)基中的富集，以備用于接種；將待測定的硫脲醛樹脂按1:1-1:128(1:1、1:2、1:4、1:8……1:128)的梯度比例稀釋于培養(yǎng)皿中，將微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以粉末狀加入稀釋液中，并以蒸餾水替代硫脲醛樹脂設(shè)置空白對照(加入的營養(yǎng)物質(zhì)與富集時(shí)所使用的營養(yǎng)物質(zhì)相同)；取富集后的菌懸液接種至培養(yǎng)皿中，置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)5天后取出菌液，在光電比色計(jì)600nm下測定每份硫脲醛樹脂稀釋樣中菌液的濁度，通過與空白組對照，以實(shí)驗(yàn)組和空白組吸光度值的變化率來計(jì)算硫脲醛樹脂對微生物生長的抑制率。

實(shí)施例3：

富集受污染農(nóng)田中的土著微生物，取200g受污染農(nóng)田土壤置于液體培養(yǎng)基中，富集培養(yǎng)使用m9液體培養(yǎng)基，每3天更換一次培養(yǎng)基并丟棄40g土壤，15天后丟棄全部土壤完成微生物在液體培養(yǎng)基中的富集，以備用于接種；將待測定的硫脲醛樹脂按1:1-1:8(1:1、1:2、1:3……1:8)的梯度比例稀釋于培養(yǎng)皿中，將微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以粉末狀加入稀釋液中，并以蒸餾水替代硫脲醛樹脂設(shè)置空白對照(加入的營養(yǎng)物質(zhì)與富集時(shí)所使用的營養(yǎng)物質(zhì)相同)；取富集后的菌懸液接種至培養(yǎng)皿中，置于35℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)4天后取出菌液，在光電比色計(jì)600nm下測定每份硫脲醛樹脂稀釋樣中菌液的濁度，通過與空白組對照，以實(shí)驗(yàn)組和空白組吸光度值的變化率來計(jì)算硫脲醛樹脂對微生物生長的抑制率。

某種硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤微生物生長抑制作用按實(shí)施例1的測試結(jié)果見圖1。由圖分析可知，該種硫脲醛樹脂在稀釋1倍時(shí)對農(nóng)田土壤微生物生長的抑制率為(0.513-0.151)/0.513＝70.56％，在稀釋5倍時(shí)對農(nóng)田土壤微生物的生長抑制率為(0.513-0.485)/0.513＝5.46％，在稀釋8倍時(shí)對農(nóng)田土壤微生物的生長抑制率為(0.513-0.638)/0.513＝(0.513-0.485)/0.513＝-24.37％，故在使用時(shí)至少將其稀釋5倍以達(dá)到合理的使用濃度范圍。本專利方法和依方法所得結(jié)論僅針對硫脲醛樹脂用作重金屬捕集劑時(shí)對土壤土著微生物的抑制作用，工程應(yīng)用中的具體施用量還應(yīng)結(jié)合重金屬捕集劑的對受污染土壤的處理效果綜合考慮。

本發(fā)明提出的評價(jià)硫脲醛樹脂對農(nóng)田土壤微生物生長抑制作用的方法，已通過實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)技術(shù)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的制作方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)本方法。特別需要指出的是，所有相類似的替換和改動(dòng)對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，他們都被視為包括在本發(fā)明精神、范圍和內(nèi)容中。